正交试验法优选温胃宁口服液水提工艺

李春峰，鲁 静，唐进法

(1.郑州市第六人民医院，河南 郑州450015;2.河南中医学院第一附属医院，河南郑州450000)

温胃宁口服液为我院院内制剂，由延胡索、砂仁、白芍、陈皮、鸡内金、干姜6味中药饮片组成，具有理气和胃、活血化瘀、缓急止痛功效，主要用于治疗气滞血瘀型慢性胃炎、功能性消化不良、十二指肠球部溃疡、返流性食管炎等。为方便临床用药，本研究对组方成分进行了分析，选择水提取，对其提取工艺采用正交试验法进行研究，以提取液中芍药苷含量为指标，优选最佳提取工艺，使制剂工艺更加合理。

1 药品、试剂与仪器

温胃宁口服液处方:延胡索、砂仁、白芍、陈皮、鸡内金、干姜。以上药物由河南医药药材有限公司提供，经河南中医学院陈随清教授鉴定，符合《中国药典》2010版一部各药材项下有关规定。芍药苷对照品，中国食品药品检定研究院提供，批号110736－201136;乙腈，色谱纯，天津市四友精细化学品有限公司产品;磷酸，色谱纯，美国迪马公司产品;水为超纯水;其他试剂均为分析纯。岛津10ATvp高效液相色谱仪，岛津SPD－M10Avp型检测器，CLASS－vp色谱工作站，均为日本岛津公司产品;CP－225D分析天平，德国赛多利斯公司产品。

2 方法与结果

2.1 水煎组正交试验设计

参考彭俊付等［1］的研究，采用正交试验法以加水量(A)、煎煮次数(B)、煎煮时间(C)为试验因素，每个因素3个水平(因素水平见表1)，每组单剂处方量药材按照要求煎煮，得到9组样品，以芍药苷含量为指标优选提取工艺。

表1 水提取工艺因素水平表

称取延胡索10 g、砂仁 6 g、白芍 15 g、陈皮12 g、鸡内金10 g、干姜6 g，按正交表设计的方案进行正交试验。将提取液浓缩，转移至200 mL容量瓶中，加水定容至刻度，得到1～9号样品溶液。

2.2 芍药苷含量的测定

参照文献方法［2］进行。

2.2.1 色谱条件

色谱柱:Agilent ZORBAX SB-C18分析柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流动相为乙腈 － 0.1% 磷酸溶液(14∶86)，进样量 10 μL，体积流量 1.0 mL/min，检测波长230 nm，柱温为室温，理论板数按芍药苷峰计算应不低于2 000。

2.2.2 对照品溶液的制备

精密称取芍药苷对照品3.27 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，作为储备液;再揩密吸取芍药苷对照品储备液1 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，即得浓度为32.7 mg/L的对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备

精密吸取样品溶液1 mL置25 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.2.4 标准曲线的绘制

精密吸取芍药苷对照品溶液 4，7，10，13，16 μL，分别注入液相色谱仪，按照样品测定项下的色谱条件测定，记录峰面积，以芍药苷对照品溶液的进样量为横坐标(X)，峰面积积分值为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，得芍药苷的回归方程为Y=4 345X－14 345，r=0.999 6。结果表明:芍药苷线性范围0.130 8 ～0.52 3 2 μg。

2.2.5 精密度试验

精密吸取芍药苷对照品溶液10 μL，重复进样6次，分别测定峰面积，结果:芍药苷的RSD为1.2%(n=6)。结果表明:本方法精密度良好。

2.2.6 稳定性试验

取正交试验1号样品溶液的供试品溶液，分别于0，2，4，6，8 h 按上述色谱条件进样测定 5 次，结果:芍药苷色谱图面积的RSD为1.6%(n=5)。结果表明:供试品溶液在8 h内稳定性较好。

2.2.7 芍药苷含量测定

取正交试验1～9号样品溶液，按2.2.3项下方法，制备供试品溶液。分别精密吸取供试品溶液10 μL，注入高效液相色谱仪，按 2.2.1 项下色谱条件进行测定。

2.3 测定结果

测定正交试验9组样品，计算得到白芍药材中芍药苷的含量，见表2，方差分析结果见表3。

表2 L9(34)正交试验设计与结果

表3 方差分析结果

由表2、表3可知，3个因素的级差大小顺序为B＞C＞A。因素B提取次数对提取工艺的影响较大，具有显著性;因素A加水量、因素C提取时间影响较小，不呈显著性。温胃宁口服液的最佳水提工艺为A1B3C1，即加6倍量水，提取3次，每次1.5 h。

2.4 工艺验证试验

按优选的最佳工艺制备3批样品进行验证试验，并计算得到白芍药材中芍药苷的含量。计算出芍药苷含量分别为 13.92，13.89，13.91 mg/g，RSD为1.53%。结果表明:此工艺稳定可行。

3 小结

温胃宁口服液为复方制剂，成分复杂。实验选择以芍药苷含量为测定指标，可评价工艺的合理性。采用正交试验设计法对温胃宁口服液提取工艺进行优化筛选，确定加6倍量水、提取3次、每次1.5 h的提取工艺简便，科学，符合生产要求。

［1］彭俊付，刘勇，刘永刚.正交试验法优选广痛消中芍药苷的提取工艺［J］.北京中医药大学学报，2011，34(4):271－273，285.

［2］帅银花，王琼，赵斌.妇科养荣片水提取工艺的研究［J］.河南中医学院学报，2009，24(1):46－47.

［3］国家药典委员会.中华人民共和国药典:二部［M］.北京:中国医药科技出版社，2010:96.

［4］张海龙，崔永霞，王淑美.高效液相色谱法测定脑心通胶囊中芍药苷的含量［J］.中医学报，2010，25(1):118－119.