金泽冠心软胶囊质量标准研究＊

王贤英，谢香菊，李胜容

(重庆市中药研究院，重庆 400065)

金泽冠心胶囊是在国家药品标准中药成方制剂第十一册(原卫生部部颁标准中药成方制剂第十一册)收载品种“金泽冠心胶囊(WS3－B－2171－96)”的基础上研制的新剂型，由泽泻和雪胆提取物组成，具有调血脂、增加心肌营养性血流量、降低心肌耗氧量的功效，用于冠状动脉粥样硬化性心脏病、心绞痛和高血脂症。原胶囊剂标准仅对泽泻进行了薄层鉴别，无含量测定，不能有效控制新型金泽冠心软胶囊的质量。笔者建立高效液相色谱(HPLC)法对处方中的雪胆提取物进行定性鉴别，建立泽泻提取物主成分23－乙酰泽泻醇B含量测定的HPLC法为金泽冠心软胶囊的质量控制提供依据。

1 仪器与试药

SK250LH型超声仪(上海科导超声仪器有限公司);AG265－S型电子天平(梅特勒－托利多仪器有限公司);LC－2010A型高效液相色谱仪;Shimadzu CLASS－VP V6.12 SP4工作站(日本岛津公司)。雪胆甲素对照品，23－乙酰泽泻醇B对照品均由中国药品生物制品检定所提供;金泽冠心软胶囊样品及缺泽泻阴性样品由重庆市中药研究院制药厂提供;乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水;其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 泽泻的薄层色谱鉴别

取本品1粒，置50 mL具塞三角瓶中，加甲醇10 mL，超声处理(功率250 W，频率50 kHz)15 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液。另取泽泻对照药材2g，加甲醇20mL，同法制成对照药材溶液。依法制备缺泽泻的阴性对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯 － 甲酸(6 ∶3.5 ∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10% 硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性无干扰，见图1。

图1 泽泻的薄层色谱图

2.2 雪胆的HPLC鉴别

取本品装量差异项下的样品，取约1.0 g，精密称定，置 25 mL容量瓶中，加入甲醇约20 mL，超声处理(功率 250 W，频率 50 kHz)30 min，放冷，加甲醇定容至25 mL，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 mL，于中性氧化铝柱上(中性氧化铝200～300目，10 g，干法装柱)，用甲醇50 mL分次洗脱，收集甲醇洗脱液于水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解并定容至 5 mL，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。精密称取雪胆甲素对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，即得对照品溶液。取缺雪胆阴性对空白约0.9 g，照供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。在以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂、乙腈－水(40∶60)为流动相、流速1.0 mL/min、柱温为25℃、检测波长为210 nm的色谱条件下，进样量10 μL，测定色谱峰。供试品溶液HPLC色谱图中，在与对照品溶液HPLC色谱图相应保留时间处出现相同的色谱峰，阴性无干扰，见图2。

2.3 含量测定

2.3.1 色谱条件

色谱柱:Diamonsil(钻石)C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈 － 水(70 ∶30，V/V);流速:1.0 mL/min;柱温:25 ℃;检测波长:208 nm;进样量:10 μL。

图2 雪胆鉴别的HPLC图谱

2.3.2 溶液制备

精密称取23－乙酰泽泻醇B对照品适量，加乙腈制成每1 mL含0.2 mg的溶液，即得对照品溶液。取本品装量差异项下的样品，取约0.5 g，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，加石油醚(60～90℃)10 mL，超声提取10 min，滤过，弃去石油醚提取液，滤渣、滤纸挥去溶剂，一并移入同一具塞锥形瓶中，精密加入乙腈25 mL，称定质量，超声处理(功率250 W，频率50 kHz)30 min，放冷，再称定质量，加乙腈补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。按处方量1%的量，称取缺泽泻的处方量药材按成品制备工艺及供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3.3 方法学考察

系统适用性试验:取2.3.2项下3种溶液，在拟订的色谱条件下进样10 μL。结果见图3。可知，阴性对照品溶液在23－乙酰泽泻醇B出峰时间区域无干扰峰出现，故对测定无干扰作用。理论板数按23－乙酰泽泻醇B峰计算，应不低于2 000，分离度大于 1.5。

线性关系考察:精密称取23－乙酰泽泻醇B对照品溶液(0.182 8 g/L)4，8，10，12，16 μL，分别注入液相色谱仪，测定峰面积，以进样量为横坐标、峰面积积分值为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y=1 502 334X+475 685，r=0.999 9(n=5)。结果表明，23－ 乙酰泽泻醇 B 进样量在 0.731 2～2.924 8 μg范围内与峰面积积分值具有良好的线性关系。

图3 金泽冠心软胶囊HPLC图

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液，重复进样5次(进样量10 μL)，按上述色谱条件测定峰面积。结果的RSD为0.35%。

稳定性试验:取样品1份，精密称定，照拟订的供试品溶液制备方法制备溶液，分别于 0，2，4，6，12 h 时测定。结果峰面积的RSD为0.39%(n=5)，表明供试品溶液放置12 h内稳定。

重现性试验:取同一批号样品，按拟订的含量测定方法，分别制备5份供试品溶液并测定。结果含量的RSD为2.0%，表明方法重现性良好。

加样回收试验:取已知含量的样品内容物各6份，精密称定，分别精密加入23－乙酰泽泻醇B对照品(配成溶液加入，质量浓度为 1.828 μg/mL)0.8，0.8，0.6，0.6，0.4，0.4 mL，按拟订的含量测定方法分别测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 23－乙酰泽泻醇B加样回收试验结果(n=6)

2.3.4 样品含量测定

取6批样品，按供试品溶液制备及测定方法测定峰面积，计算样品中23－乙酰泽泻醇B的含量。结果见表2。

表2 金泽冠心软胶囊中23－乙酰泽泻醇B的含量测定结果(n=6)

3 讨论

曾研究了雪胆的薄层色谱鉴别，但由于本品中雪胆处方量低，且其他样品对其薄层鉴别干扰极大，不易判断，故采用HPLC对雪胆进行鉴别。雪胆的HPLC鉴别时选择了用乙腈－水(40∶60)作为流动相，选用210 nm为检测波长[1]，在此条件下，雪胆甲素与相邻色谱峰达到基线分离，峰形对称，阴性对照无干扰。

曾试验了乙腈 － 水不同比例(75 ∶25[2]，90 ∶10[3]，80 ∶20[4]，70∶30)，结果选用乙腈 －水(70∶30)能使样品中23－乙酰泽泻醇B峰与相邻峰达到良好分离，峰形对称，阴性对照无干扰。用甲醇制备23－乙酰泽泻醇B对照品溶液，进行紫外扫描，结果在208 nm波长处有最大吸收，故选用208 nm为检测波长。

方法学考察结果表明，23－乙酰泽泻醇B的含量测定方法成立，能控制产品质量。

[1]施亚琴.反相高效液相色谱法测定不同采收期长果雪胆中雪胆甲素的含量[J].中国中药杂志，1996，21(5):276 －277.

[2]陈建忠，潘 馨，黄若旺.HPLC法同时测定泽泻中2种有效成分的含量[J].药物分析杂志，2007，27(5):721 －723.

[3]陈 丽，吴水生，郭素华，等.建泽泻中23－乙酰泽泻醇B含量的HPLC 测定[J].福建中医学院学报，2004，14(5):29－32.

[4]杨 锋，赵汉臣，闫 荟，等.23－乙酰泽泻醇B4种提取方法比较[J].中国药房，2007，18(6):429 －430.