高效液相色谱法测定枳实导滞丸中辛弗林含量

曲楠楠

(黑龙江省鸡西市食品药品检验检测中心，黑龙江 鸡西 158100)

枳实导滞丸由枳实、黄芩、黄连、大黄等8味药材的细粉经用水泛丸制成[1]，具有消积导滞、清利湿热功能。中国药典中其含量测定项下采用薄层扫描法测定橙皮苷的含量，未对其他成分进行检测。笔者用高效液相色谱(HPLC)法测定其中辛弗林的含量，简便有效。现报道如下。

1 仪器与试药

HP1100型高效液相色谱仪，HP1100工作站(自动进样，紫外检测器);Sartorius电子天平(CP225D);KQ－400KDE型高功率数控超声波清洗器;TU－1901型双光束紫外－可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。辛弗林对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110727－200306);枳实导滞丸(吉林龙鑫药业有限公司，批号为100206);甲醇(天津市科密欧化学试剂有限公司，批号为20110408)为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Agilent Eclipse XDB C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇－水(0.18%含磷酸和0.22%十二烷基磺酸钠，55∶45);检测波长:274 nm;流速:1.0 mL/min;进样量:10 μL;柱温:30℃。理论板数按辛弗林峰计算，应不低于4 000。按上述色谱条件进样，色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

精密称取经80℃干燥至恒重的辛弗林对照品31.02 mg，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制成每1 mL含辛弗林31 μg的溶液，作为对照品贮备液。取本品粉末约0.1 g，精密称定，加甲醇40 mL，加热回流90 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，定量转移至2 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按枳实导滞丸的处方(枳实、大黄、黄连、黄芩、六神曲、白术、茯苓、泽泻，来源为市售，经我所中药室鉴定)，不加枳实，制备阴性样品，依法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察:精密量取对照品贮备液，按上述色谱条件，分别进样 1，5，10，20，30 μL，以峰面积(Y)对应进样量(X)进行回归分析，得回归方程 Y=226.07X+36.075 6，r=0.999 9(n=5)。结果表明，辛弗林质量浓度在3.1～93 μg/mL范围内与峰面积有良好的线性关系。

精密度试验:取对照品溶液(0.141 2 g/L)，重复进样5次。结果峰面积的 RSD为0.3%(n=5)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别在 0，2，4，6，8，10 h 时重复进样。结果峰面积的 RSD为0.9%(n=6)，表明供试品溶液在10 h内稳定。

重复性试验:取同一批样品(批号为100206)，依法制备5份供试品溶液，分别测定色谱峰面积。结果平均含量为0.62 mg/g，RSD为0.3%(n=5)，表明方法重复性良好。

加样回收试验:精密称取辛弗林对照品14.12 mg，置10 mL量瓶中，制成质量浓度为1.412 g/L的对照品溶液。精密称取已知含量的样品(批号为100206)约0.5 g，6份，分别加甲醇40 mL，加热回流90 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至2 mL量瓶中，分别精密加入辛弗林对照品溶液(1.412 g/L)0.1，0.1，0.2，0.2，0.3，0.3 mL，加甲醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，用微孔滤膜滤过，进样。结果见表1。

表1 辛弗林加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取3批不同厂家的市售样品，按2.2项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定峰面积，用外标法以峰面积计算。批号分别为110629，100206，101026的样品中辛弗林含量分别为0.4698，0.623 4，0.603 3 mg/g。

3 讨论

取对照品溶液，照紫外分光光度法，在200～600 nm波长范围内扫描，结果辛弗林在274 nm波长处有最大吸收，故选择测定波长为274 nm。

分别采用了甲醇－水(0.1%磷酸和0.1%十二烷基磺酸钠，43∶57)、甲醇 －水(0.1%十二烷基磺酸钠和 0.05%磷酸，52∶48)[2－3]以及文中方法进行试验，比较几种流动相的适用性，发现文中的流动相比例更适宜待测成分的分离，故采用此种流动相。

本品的现行质量标准只有橙皮苷的含量测定且是薄层色谱扫描法，这给质量监测带来一定的难度，也很难保证中药“安全、有效、质量可控”。本法的建立，对现行标准是有效的补充和提高。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:876－877.

[2]许 妍，付辉政.RP－HPLC法测定枳实中辛弗林的含量[J].药品评价，2005(6):39－40.

[3]欧阳荣.枳实不同炮制品中辛弗林的含量考察[J].中国药房，2005，16(5):395－396.