顶空气相色谱法测定帕托珠利原料药中乙醇的残留量

范 莹，苏 勍

帕托珠利是一类与妥曲珠利相关的三嗪类抗球虫药物，是妥曲珠利的主要代谢产物，又名妥曲珠利砜。该药于2001年由美国FDA批准上市，用于治疗洪氏新孢子虫（Neospora hughesi）和肉孢子虫（S.neurona）引起的哺乳动物中枢性疾病，有效的缓解EPM症状。研究表明，帕托珠利在动物体内杀死球虫的同时不影响动物自身免疫力的产生[1，2]。为确保药品质量，建立了同时测定帕托珠利中可能含有的残留溶剂的顶空气相色谱方法[3]。

1 仪器与试剂

Agilent 6890N气相色谱仪，氢火焰离子化检测器（FID），Agilent G1888顶空进样器，6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷毛细管柱（DB-624）（美国安捷伦公司），N，N-二甲基甲酰胺、乙醇均为色谱纯，帕托珠利（批号：0813、0814、0815）为课题组自制。

图 1 专属性试验气相色谱图

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：DB-624 （30 m×0.32 mm，1.8 μm）；程序升温：起始温度40℃，保持6 min，再以30℃/min的速率升温至200℃，保持5 min；载气为高纯氮气，载气压力为55 kPa（1 kPa=7.5 mmHg）；进样口温度：200 ℃；检测器（FID）温度：250℃；顶空瓶平衡温度：100℃，平衡时间30 min；进样量：1 ml；进样方式为分流进样，分流比为 15∶1。

2.2 溶液的制备

2.2.1 供试品溶液 取帕托珠利0.2 g，精密称定，置顶空瓶中，精密加N,N-二甲基甲酰胺2 ml使溶解，密封，作为供试品溶液。

2.2.2 对照品储备液 精密称取乙醇125 mg，置25 ml量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。

2.2.3 对照品溶液 精密量取对照品储备液1.0 ml，置10 ml量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取对照品溶液2.0 ml，置顶空瓶中，密封。

2.3 专属性试验 精密量取对照品溶液2 ml加入至装有供试品溶液的顶空瓶中，分别将空白溶液、对照品溶液、供试品溶液、对照品和供试品混合溶液顶空进样，得气相色谱图。由气相色谱图可得各成分之间的分离度均符合要求，表明专属性良好（图 1）。

2.4 检出限和定量限 取对照品溶液，逐级稀释，按拟定色谱条件测定，记录色谱图。按《中国药典》2010版（二部）附录ⅪⅩ项[4]规定，一般以信噪比为3∶1时相应浓度作为该物质的检出限，以信噪比为10∶1时相应浓度作为该物质的定量限；计算得乙醇的检出限为0.01 mg/ml；丙酮、乙醇的定量限为0.025 mg/ml。

2.5 线性和范围试验 精密量取对照品储备液0.5、0.75、1.0、1.25、1.5 ml，分别置 10 ml量瓶中，加 N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，分别精密量取上述溶液2.0 ml置顶空瓶中，密封，按拟定色谱条件测定，记录色谱图。以乙醇的浓度为横坐标（mg/ml），以测得的峰面积为纵坐标（A）进行线性回归，得回归方程：

乙醇回归方程：Y=752.8X-53，r=0.9988

表明乙醇在0.25~0.75 mg/ml范围内浓度与峰面积的线性关系良好。

2.6 重复性 取批号为0813的样品，按2.2.1项下方法配制6份供试品溶液，按拟定的色谱条件进样，记录色谱图。均未检出乙醇。

2.7 精密度 按2.2.3项下方法配制对照品溶液，按拟定的色谱条件重复进样6次，记录色谱图，计算乙醇峰面积的RSD为2.12%。

2.8 稳定性试验 按2.2.3项下方法配制对照品溶液，在室温下放置，分别在0、4、8、12 h按拟定的色谱条件进样测定，记录色谱图，计算得乙醇峰面积的RSD为1.77%，表明对照品溶液在12 h内稳定。

2.9 回收率试验 称取9份帕托珠利样品，各1 g，精密称定，分别置10 ml量瓶中，3份一组，分别精密加入适量对照品储备溶液，加N,N-二甲基甲酰胺定容至刻度，摇匀，制成乙醇的浓度分别为限量的80%、100%、120%，分别精密量取2 ml置顶空瓶中，密封，按拟定的色谱条件测定，记录色谱图。计算乙醇的回收率。结果见表1。

2.10 样品的测定 取三批供试品，批号分别为0813、0814、0815按2.2.1项下方法，配制供试品溶液，按拟定的色谱条件进样测定，记录色谱图，均未检出乙醇。

表 1 回收率试验结果（n=9）

3 讨论

残留溶剂的选择是按照《中国药典》2010年版附录Ⅷ P“残留溶剂测定法”项[5]：药品中的残留溶剂系指在原料药或辅料的生产过程中，以及在制剂制备过程中使用的，但在工艺过程中未能完全去除的有机溶剂。本次实验根据此项原则和生产工艺确定需要检测的残留溶剂为乙醇。

考虑到帕托珠利原料药和需要检测的残留溶剂的溶解性，本次实验使用N,N-二甲基甲酰胺作为溶剂；并对建立的方法进行专属性、精密度、准确度、线性和范围等方面的试验验证，结果表明，本文建立的方法简便、快速、准确，可有效检测帕托珠利中的残留溶剂。

[1]杨 慧，潘保良幸，汪 明.抗球虫新药帕托珠利的研究[A].第二届京津冀畜牧兽医科技创新论坛暨第六届新思想、新方法、新观点“首农杯”论坛论文集[C].2010.76.

[2]施祖灏，葛庆联，陆俊贤，等.同时检测2种均三嗪类抗球虫药物残留的样品前处理方法的比较[J].色谱，2009，27（3）：303-307.

[3]戴正琳，陶 志，章平荣.顶空毛细管气相色谱法测定阿折地平中的溶剂残留[J]. 中国药师，2012，15（2）：197-198.

[4]中华人民共和国药典委员会.中国药典（二部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010.附录194-195.

[5]中华人民共和国药典委员会.中国药典（二部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010.附录61-63.