自拟心脑宁片对亚急性衰老模型小鼠血浆及肝脑匀浆MDA水平的影响

王希东，吕宏迪，马珍珍，郝少君，孙建华

心脑宁片，由人参、当归、川芎等组成，具有活血化瘀，益气安神，用于冠心病、脑血栓形成等，亦可用于记忆力减退，具有抗衰老等作用。针对其抗衰老作用笔者进行了心脑宁片对D-半乳糖致小鼠亚急性衰老模型血浆、肝、脑匀浆MDA水平影响的实验研究。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料及仪器

1.1.1 药品 心脑宁片，由人参、当归、川芎等组成，具有活血化瘀，益气安神，用于冠心病，脑血栓形成等，亦可用于记忆力减退，抗衰老等作用，由解放军第371医院制剂室提供，批号20110606；尼莫地平片，山东新华制药股份有限公司生产，批号

1105036；脑安片，哈药集团三精制药四厂有限公司生产，批号201109002；D-半乳糖，北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司，批号18Q10260；氯化钠注射液，郑州永和制药有限公司，批号11103065；PVP络合碘消毒剂，洛阳市洁康消毒剂厂，批号110903；甲醛，烟台市双双化工有限公司，批号20111101；冰醋酸，天津市恒兴化学试剂制造有限公司，批号20110113；总超氧化物歧化酶（T-SOD）测试盒，南京建成生物工程研究所，批号20120316；过氧化氢酶（Catalase CAT）试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号20120315；谷胱甘肽过氧化物酶 （GSHPX）测试盒，南京建成生物工程研究所，批号20120316；丙二醛（MDA）试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号20120316；考马斯亮兰蛋白测定试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号20120317；羧甲基纤维素钠，天津恒兴化学试剂制造有限公司，批号20090723。

1.1.2 实验动物 小鼠72只，体重 18～21 g，清洁级，昆明种，河北省动物实验中心提供，合格证号1202041。

1.1.3 实验仪器 U电子称，余姚记铭称重校验设备有限公司生产，型号JM 1000；离心机，上海安亭科学仪器厂，型号TDL-40B；电子天平，河南中良科学仪器有限公司，型号JA1103N；电子天平，上海精天电子仪器厂，型号JT6001；高速冷冻离心机，科大创新股份有限公司中佳分公司，型号KDC-160HR；电子恒温水浴锅，北京永光明医疗仪器厂，型号DZKW-4；紫外可见分光光度计，日本岛津公司，型号 UV-2201； 酶标仪 （Model 680;made by BIORAD Laboratories）；电动玻璃匀浆机，宁波新芝生物科技有限公司生产，型号DY89-1；可调式移液器，上海雷勃分析仪器有限公司生产。

1.2 实验方法 取体重18～21 g小鼠72只，雌雄各半，随机分为6组，每组12只（雌雄各半），其中5组造D-半乳糖亚急性衰老模型，每天颈背部皮下注射D－半乳糖 （生理盐水配成5%，注射量为0.25 ml/10 g），造模 1 次/d，连续 40 d；另 1 组为空白对照组，每天颈背部皮下注射同体积生理盐水。从第11天开始，造模型5组分别灌服大、中、小剂量心脑宁片混悬液 （2.24、1.12、0.56 g/kg，112、56、28 mg/ml，0.2 ml/10 g，相当于临床剂量的 30、15、7.5倍）、脑安片混悬液（0.53 g/kg，26.5 mg/ml，0.2 ml/10 g，相当于临床用量的15倍）及同体积的生理盐水；空白对照组灌服同体积的生理盐水。给药1次/d，连续30 d。称体重1次/3 d，根据体重调整D-半乳糖和相应药物用量。于用药第40天，各组小鼠均禁食不禁水12 h，于给D-半乳糖和灌胃2 h后，小鼠眼眶取血，肝素抗凝，按试剂盒说明书分别测定血超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱苷肽（GSH）的活力；处死小鼠，解剖，取小鼠肝、脑，用冰生理盐水制备肝匀浆、脑匀浆，冰藏备用，按试剂盒说明书分别测定血浆、肝匀浆和脑匀浆中丙二醛（MDA）含量；然后取脑、胸腺、脾脏，甲醛固定，石蜡包埋，切片，HE 染色，光镜观察脑、胸腺、脾脏组织形态的变化。

计算公式：

蛋白含量（g/L）=测定管OD值-空白管OD值标准管OD值-空白管OD值×标准管浓度（g/L）

表 1 各组小鼠血浆、肝匀浆和脑匀浆MDA水平（±s，nmol/mg）

表 1 各组小鼠血浆、肝匀浆和脑匀浆MDA水平（±s，nmol/mg）

注：与模型组比，*P<0.05；与模型组比，#P<0.01

组别 动物（只） 剂量（g/kg） 血浆 肝匀浆 脑匀浆空白对照组 12 9.690±4.938# 4.713±3.406# 13.137±2.650#模型组 12 19.726±7.874 9.010±1.702 18.821±4.769脑安片组 12 0.53 g 12.690±6.063* 7.003±2.557* 13.245±3.998#大剂量心脑宁片组 12 2.24 10.452±5.888# 4.344±2.347# 14.869±4.716*中剂量心脑宁片组 12 1.12 15.571±9.949 5.782±3.193# 13.127±5.953*小剂量心脑宁片组 12 0.56 14.869±9.165 5.337±3.244# 15.950±6.171

2 结果

对D-半乳糖致小鼠亚急性衰老模型血浆、肝匀浆和脑匀浆MDA水平的影响，见表1。

从表1可看出，与空白对照组比，模型组血浆、肝匀浆和脑匀浆MDA水平水平均显著升高 （P<0.01），说明造小鼠D-半乳糖衰老模型成功。与模型组比，大剂量心脑宁片组可显著降低血浆MDA水平（P<0.01）、脑安片组可明显降低血浆MDA水平（P<0.05）；大、中、小剂量心脑宁片组均可显著降低肝匀浆MDA水平（P<0.01）、脑安片组可明显降低肝匀浆MDA水平（P<0.05）；大、中剂量心脑宁片组可明显降低脑匀浆MDA水平（P<0.05）、脑安片组可显著降低脑匀浆MDA水平（P<0.01）；以大、中剂量心脑宁片组对小鼠D-半乳糖衰老模型血浆、肝匀浆和脑匀浆MDA水平的降低作用为优。

3 讨论

本实验采用D-半乳糖致小鼠衰老模型，观察了心脑宁片对D-半乳糖致小鼠亚急性衰老模型血浆、肝、脑匀浆MDA水平影响的实验，与空白对照组比，模型组血浆、肝匀浆和脑匀浆MDA水平均显著升高（P<0.01），说明造小鼠D-半乳糖衰老模型成功。心脑宁片是根据中医理论和现代药理研究成果拟定的院内协定处方。方中以人参为君药，调中，止消渴，通血脉，破坚疾，令人不忘，以其主补五脏，安精神，定魂魄；黄芪，补中益气，为臣药。当归，活血养血；川芎，其性善降结气，以走肝经，气中之血药，通行十二经，具有理气、活血化瘀的作用为佐药。诸药合用，集活血化瘀、抗血栓、益气之功于一体，既重视疏通脉管，以改善脏器供血，又注意改善人体整体功能及代谢，达到扶正祛邪之目的。实验结果显示：大剂量心脑宁片组可显著降低血浆MDA水平（P<0.01），大、中、小剂量心脑宁片组均可显著降低肝匀浆MDA水平（P<0.01），大、中剂量心脑宁片组可明显降低脑匀浆MDA水平（P<0.05），以大、中剂量心脑宁片组对小鼠D-半乳糖衰老模型血浆、肝匀浆和脑匀浆MDA水平的降低作用为优。

心脑宁片临床疗效确切，且药理实验表明其具有很好的抗衰老的作用，为临床提供了实验依据和临床基础。志谢 本实验在河南中医学院苗明三教授指导下完成，特此致谢

[1]苗明三，方晓艳．芦荟多糖对衰老模型小鼠的影响[J]．中国现代应用药学杂志，2005，22（3）：181-184.

[2]苗明三，顾丽亚，方晓燕，等．阿胶益寿颗粒对小鼠衰老模型的影响[J]．中国中药杂志，2004，29（8）：817-818.