科技进展

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实验性感染猪源H1N1流感病毒引发疾病

2009年全球大规模暴发H 1N 1流感病毒后，这种新型的病毒传播到了猪群。猪成为了该病毒的宿主，并且为流感病毒的基因突变提供了空间。从2009年的大流行中演变的重组毒株，在全球很多国家的猪群中都有发现，其中包括泰国。这一疾病的发现，使得针对这种病毒的病原学研究得以广泛开展以防控人和猪的疾病。

将从泰国的猪体内分离出的2009流行性H 1N 1病毒（pH1N1） 和其重组毒株（rH1N1） 分别注射到两组3周龄的猪体内，每组9只，一组注射pH1N1，另一组注射rH1N1，同时设置阴性对照组（3只）。观察并比较各组猪只的临床症状、病毒分布和病理变化，分别在注射病毒后2、4、12天对两试验组和对照组猪只进行动态病理学观察（图1），注射病毒组每次观察3只，阴性对照组每次观察1只。

试验结果显示，感染病毒的两组猪只均呈现不同程度的典型流感样临床症状和组织病理学变化，在注射病毒后1～4天，出现较温和的肺部症状。但是，直至注射病毒后第12天，才能够从试验组的鼻拭子中检测到病毒的R N A。本试验从自然感染的猪只中分离鉴定了pH1N1和rH1N1流感病毒，在注射到猪体内后，会引发严重的呼吸性疾病。尽管感染rH1N1的猪群有较多的猪只感染，并显示出更为严重的临床症状，且rH1N1能够导致肺部组织严重病变和肺脏病原增加，但与感染pH1N1组比较，在统计学意义上的差异不显著，两个试验组在试验后期均能从鼻拭子中检测到两种病毒的遗传物质。和猪的其他流感病毒相似，pH1N1和rH1N1引发疾病的临床症状和病例损失仅限于呼吸道。（祝文琪编译，译自《病毒学杂志》）

译自：Charoenvis al N,Keawcharoen J , Sreta D,et al.Experimental infection with a Thai reas sortant swine influenza virus of pandemic H1N1 origin induced dis eas e.Virology Journal, 2013,10:88.

同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒的多重PCR技术

本试验设计了一种多重聚合酶链反应（PCR）技术，可用于同时检测与猪繁殖和呼吸衰竭相关的3种病毒——猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）和猪圆环病毒2型（PCV2）。根据3种病毒的靶序列设计引物，分别扩增出大小为718b p（PRRSV）、288b p（CSFV）和466b p（PCV2）的片段。以含有病毒片段的重组质粒为模板，进行此PCR方法的灵敏度实验，分别可检测出2.0×104（PRRSV）、2.5×103（CSFV） 和 6.0×102（PCV2） 拷贝数的病毒量。当使用其他病毒、细菌和P K-15/Marc-145细胞进行此多重PCR技术的特异性分析时，没有观察到非特异性条带。对来自福建的82个临床样本进行检测，PRRSV和CSFV混合感染的为12.19%，PRRSV和PCV2混合感染的为21.95%，CSFV和PCV2混合感染的为13.41%，3种病毒混合感染的为3.66%。总之，此多重PCR技术适用于常规的分子诊断和流行病学诊断，可有效地检测出上述3种病毒的单一感染或混合感染。（陈舒楠编译，译自《分子与细胞探测》）

译自：Liu JK, Wei CH, Yang XY, et al. Multiplex PCR for the s imultaneous detection of porcine reproductive and res -piratory syndrome virus , clas s ical swine fever virus , and porcine circovirus in pigs . Molecular and Cellular Probes ,2013. [Epub ahead of print]

猪圆环病毒2型ORF2和猪γ干扰素基因重组腺病毒的构建及其免疫原性研究

由ORF2基因编码的猪圆环病毒2型衣壳结构蛋白是诱导广泛保护性免疫的关键。根据ORF2基因编码的衣壳结构蛋白和猪γ干扰素(IFN-γ)的构造及其特征，将此重组腺病毒命名为重组腺病毒(r A d)-ORF2-猪γ干扰素。经限制性内切酶酶切法、PCR法、测序及转染鉴定，进一步证实了该重组腺病毒的结构。将重组腺病毒接种于SPF级雌性BALB/c小鼠，用E L I S A抗体检测试剂盒检测特异性抗体水平。值得注意的是，该重组腺病毒比单独重组腺病毒-ORF2或腺病毒本身可以诱导出更好的ORF2-特异性抗体应答。显然，猪γ干扰素大大提升了ORF2的免疫原性。结果表明，该重组腺病毒可能会成为一种有吸引力的用于防治与PCV2感染相关疾病的候选疫苗。（陈舒楠编译，译自《疫苗》）

译自：LIU G M, LUO M L, CHEN R A, et al. Cons truction and immunogenicity of recombinant adenovirus expres s ing ORF2 of PCV2 and porcine IFN- gamma. Vaccine,2011(29): 8677- 8682.

红景天多糖对猪卵母细胞体外成熟及其发育潜力的影响

本试验旨在探讨红景天多糖（Rhodiolasachalinensis polysaccaride，RSP）对猪卵母细胞体外成熟及发育潜力的影响。在猪卵母细胞成熟液中添加不同浓度的RSP，以排出第一极体作为核成熟的标志，观察卵母细胞核成熟情况，统计孤雌激活（PA） 及体外受精（IVF） 后胚胎的卵裂率和囊胚率，并检测卵母细胞内谷胱甘肽（GSH）的浓度及活性氧（ROS） 水平。结果表明：与对照组（83.50%±1.00%） 相比，添加0.6、6.0和60.0mg/L的R S P均能提高其核成熟率，但差异不显著（P>0.05）；6.0和60.0mg/L的R S P组能显著提高卵母细胞内G S H含量（P<0.05），随着R S P浓度的增加可以降低ROS水平，但是各组之间差异不显著（P>0.05）；孤雌激活中，60.0mg/LR S P组的卵裂率（88.44%±5.06%） 和6.0mg/LR S P的囊胚率（40.94%±8.23%） 最高，且显著高于对照组 （72.16%±7.38%和24.06%±5.16%，P<0.05）；与对照组（33.52%±4.05%） 相比，0.6、6.0和60.0mg/LR S P组体外受精卵裂率均显著提高（P<0.05），60.0mg/LR S P组的囊胚率达（19.20%±3.13%），显著高于对照组的（9.60%±0.65%，P<0.05）。由此可见，在猪卵母细胞成熟过程中添加适当浓度的R S P，能提高其核成熟率，促进胞质成熟，从而提高其孤雌激活和体外受精后的胚胎发育能力。

本刊摘自：徐利，戴建军，张廷宇，等.红景天多糖对猪卵母细胞体外成熟及其发育潜力的影响.畜牧兽医学报，2013，44（4）：557-561.

替代的异源5'非翻译区可以保持2型猪繁殖与呼吸综合征病毒的全部活动功能

基因组5'非翻译区（untranslate dregion，UTR） 被认为在猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）基因组RNA复制、亚基因组mRNA转录和蛋白翻译过程中发挥关键作用，然而其主要的作用机制仍不为人知。本试验确定了病毒复制和感染的顺式作用元件，基于两种不同的基因型的全长感染性c DNA克隆pAPRRS和pSHE骨架，构建了5'UTR交换嵌合克隆pTLV8和pSHSP5。在这两者中间，vTLV8可从pTLV8逃逸出来，并且具有与vAPRRS类似的病毒学特征，如表型特征和RNA的合成水平。然而，没有证据表明pSHSP5具有传染性。综上所述，1型PRRSV的5'UTR并没有影响2型PRRSV在体外的感染和复制，2型PRRSV的5'UTR可以在功能上被1型PRRSV所取代。（陈舒楠编译，译自《病毒学》）

译自：GAO F, YAO H C, LU J Q, et al. Replacement of the heterologous 5’ untrans lated region allows preservation of the fully functional activities of type 2 porcine reproductive and respiratory syndrome virus . Virology, 2013, 439(1): 1- 12.

稀释液成分对猪精液碱性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的影响

以猪精液稀释液主要成分为效应物，研究其对杜洛克猪精液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶Ⅱ活力的影响。结果表明：在一定浓度下青霉素钾和硫酸链霉素对酶活力没有影响；E D T A·2N a和维生素C对酶活力有显著的激活作用；葡萄糖和蔗糖对酶活力有先扬后抑的作用；果糖、柠檬酸三钠、三羟甲基氨基甲烷、碳酸氢钠对酶活力则有不同程度的抑制作用；其中，三羟甲基氨基甲烷表现为可逆的非竞争性抑制，抑制常数K1为9.81mmo l/L；碳酸氢钠则表现为可逆的混合型抑制，抑制常数K1和K1S分别为111.18mmo l/L和26.61mmo l/L。

本刊摘自：林心宇，胡崇伟，章文，等.稀释液成分对猪精液碱性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的影响.中国兽医学报，2012，32（11）：1730-1735.