2013年怀化市H7N9禽流感检测情况与分析

舒晓亮，李 杰，杨爱梅，丁美月

（湖南省怀化市畜牧水产局，湖南怀化418100）

H7N9型禽流感是一种新型禽流感，于2013年3月底在上海和安徽两地率先发现。随后在北京、江苏、浙江、山东、河南、台湾、福建、河北等地陆续出现H7N9患者[1]。截至2013年7月20日，全国内地共报告人感染H7N9禽流感病例134例，死亡37人。

H7N9禽流感病毒属于甲型流感病毒，其中“H”是指流感病毒血凝素蛋白（HA），可分为1～16种亚型，“N”是指病毒神经氨酸酶蛋白（NA），可分为1～9种亚型，HA不同亚型可以与N A的不同亚型相互组合形成不同的流感病毒[2]。

截至2013年5月22日，全国各级兽医实验室共检测完成899758份样品，其中，血清学样品702369份，病原学样品197389份。样品覆盖全国31个省份和新疆生产建设兵团的42250个监测采样场点。各地没有从家禽养殖场分离到H7N9禽流感病毒，也未发现猪感染该病毒[3]。

2013年4～5月份，我们通过对怀化地区105个检测点采样1462份进行检测，初步掌握了我市H7N9禽流感的感染情况，为我市H7N9禽流感的防控提供依据。

1 材料与方法

1.1 主要材料

1.1.1 样品主要来源

对怀化市1 3个县（市、区）的部分活禽交易市场和养禽场（村）采集禽血清、咽喉和泄殖腔拭子，编号一一对应。具体见表1。

1.1.2 主要试剂

?

H 7亚型血凝抑制试验检测试剂盒购自哈尔滨维科生物技术有限公司（生产批号：2013003）；H5N1血凝抑制试验检测试剂盒购自哈尔滨维科生物技术有限公司（生产批号：2013001）；H7N9RT-PCR检测试剂盒购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司（生产批号：AIVH720130418P）；采集两只未免疫公鸡红细胞配成1%鸡红细胞悬液，现配现用。

1.2 血清学检测方法

采用血凝抑制（H I）试验，检测血清中H 7亚型禽流感病毒血凝素抗体。具体操作参照《高致病性禽流感诊断技术》（GB/T18936-2003）中 H I试验进行[4]。

共检测血清样品1462份，其中鸡血清样品820份、鸭血清样品390份、鹅血清样品220份、鹌鹑血清样品32份。HI试验检测抗体水平≥24，结果判定为阳性。对结果呈阳性的样品，取对应编号的咽喉和泄殖腔拭子进行RT-PCR检测。

1.3 H7N9 RT-PCR检测方法

采用农业部推荐的RT-PCR检测方法，取H7亚型禽流感病毒血凝素抗体结果呈阳性的30份样品对应编号的咽喉和泄殖腔拭子做R T-P C R检测。具体操作按照推荐试剂（盒）的使用说明进行。

1.4 H7N9与H5N1抗体效价比较试验

采用H I试验，同时检测血清中H 7和H 5亚型禽流感病毒血凝素抗体。具体操作参照《高致病性禽流感诊断技术》（GB/T18936-2003）中HI试验进行。共检测血清样品30份，全部为H7亚型禽流感抗体检测阳性血清，其中鸡血清样品22份、鸭血清样品8份。检测H7N9抗体效价高低是否与H5N1抗体效价存在关联。

2 结果

2.1 H7N9血清学检测结果

通过H7N9HI试验，检测出活禽交易市场鸡血清样品阳性率为1.15%，鸭血清样品阳性率为1.54%；鸡养殖场（村）血清样品阳性率为3.39%；鸭养殖场（村）血清样品阳性率为2.31%；鹅养殖场（村）和鹌鹑养殖场（村）均未检出阳性。其中鸡血清样品平均阳性率为2.68%，鸭血清样品平均阳性率为2.05%。具体见表2。

2.2 H7N9 RT-PCR检测结果

取H7亚型禽流感病毒血凝素抗体结果呈阳性的3 0份样品对应编号的咽喉和泄殖腔拭子做R T-PCR检测，结果全部为阴性。阳性对照在634bp出现明显条带。详见图1。

?

2.3 H7N9与H5N1抗体效价比较结果

H7N9与H5N1抗体效价比较结果见表3。从图2可以看出，30份H7N9抗体阳性血清检测H 5 N 1抗体均为阳性，且效价大部分均在Log7以上。且H5N1抗体效价越高，H7N9抗体效价就越高。

3 分析与讨论

通过H7N9血清学检测可以从市场和养殖场血清样品中检测出H 7亚型禽流感病毒血凝素抗体阳性样品。但不能确定禽群已经感染H7N9禽流感病毒。根据《农业部印发H7N9禽流感紧急监测方案及应急处置指南》文件要求，H7亚型禽流感病毒血凝素抗体阳性样品需要进一步通过H7N9RT-PCR或荧光RT-PCR检测才能确定为疑似阳性。通过H 7N9RT-PCR检测发现，30份血清学检测呈阳性的拭子样品检测结果全部为阴性，说明并未感染H7N9禽流感病毒。H7亚型禽流感病毒血凝素抗体阳性样品可能是由感染其他H7亚型禽流感病毒引起的。说明怀化市暂时未发现有H7N9禽流感流行，初步掌握了怀化市H7N9禽流感的流行情况。

从图2可以看出，H5N1抗体效价越高，H7N9抗体效价就越高，说明H5N1和H7N9禽流感病毒存在一定的抗原交叉反应，具体情况还有待进一步的研究分析。从表2可以看出，规模养殖场血清样品H7N9禽流感阳性率明显高于活禽交易市场（规模鸡场：3.3 9%>1.1 5%；规模鸭场：2.3 1%>1.5 4%,），这也与规模养殖场能很好地进行H5N1禽流感免疫有关，另外，规模鸡场比规模鸭场血清样品H7N9禽流感阳性率要高也能说明这一点（3.3 9%>2.3 1%）。

尽管目前H7N9在人群中流行已经减弱，但我们对禽流感病毒检测和监测工作不能放松。新近研究表明，H7N9在哺乳动物貂和猪中具有一定的传染性[5]，另外，7月20日，在河北省新确诊一例人感染H7N9禽流感病例，都提示我们应该进一步加强H7N9禽流感病毒监测工作。按照农业部新出台的农医发 [2013]28号文件要求，新一轮关于H7N9禽流感病毒的监测工作正在开展，将进一步对怀化市H7N9禽流感病毒的流行情况进行调查，为广大养殖户对H7N9禽流感病毒的防控提供依据。

[1]张 宝，黄克勇，郭劲松，等.H7N9病毒的来源和重组模式[J].J South Med Univ,2013,33(7):1017-1021.

[2]朱闻斐，高荣保，王大燕，杨磊，朱云，舒跃龙.H7亚型禽流感病毒概述[J].病毒学报，2013,29:245-249.

[3]H7N9禽流感监测工作完成未从家禽养殖场分离到H7N9禽流感病毒[N].中华人民共和国农业部办公室,2013-05-23.http://www.moa.gov.cn/zwllm/zwdt/201305/t20130523_3471497.htm

[4]GB/T 18936-2003，高致病性禽流感诊断技术[S].

[5]Zhu H,Wang D,Kelvin DJ,et al.Infectivity,transmission,and pathology of human H7N9 influenza in ferrets and Pigs[J].Science,2013,PMID:23704376.