自制药敏片体外筛选鸡大肠杆菌敏感药物的试验

黄名英，傅安静，靳新刚

（1.成都农业科技职业学院，四川 成都 611130；2.河北省保定冀中药业有限公司，河北 保定 071000）

鸡大肠杆菌病是鸡场常发病，针对该病的治疗药物，当前市售的多是不清楚具体成分的复方药。再加之大肠杆菌易产生耐药性，若将这些药物一一试过后来看效果，则有可能造成很大的经济损失，而采用药敏试验体外筛选敏感药物确实是一种快捷有效的方法。另外，用市售药敏片获得药敏试验结果后，却很难购买到成分和药效与之相同的药物。故用自制药敏片定期进行体外敏感药物的筛选就成了临床上值得推广的方法。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料 在四川省2个不同地方刚发病的鸡场（A鸡场、B鸡场），无菌采取临床表现为典型大肠杆菌病的鸡肝脏、脾脏组织。

1.1.2 培养基及生化试剂 普通琼脂培养基、伊红美蓝琼脂培养基、麦康凯培养基，均购自杭州天和微生物试剂有限公司；酵母提取物（OXOID）、胰蛋白胨（OXOID）、肠杆菌科细菌生化编码鉴定管，购自杭州微生物试剂有限公司。

1.1.3 药品 5%盐酸多西环素（康迪瑞恩，批号:20120626）、5%硫酸新霉素可溶性粉（金力克，批号:20120827）、0.5%氧氟沙星（杆菌迪克，批号:20120506）、4%氧氟沙星溶液（易达，批号:20110517），由河北保定某药业有限公司提供。另外还有2%氧氟沙星、5%氟苯尼考粉、20%氟苯尼考粉、3%硫酸安普霉素、5%硫酸粘菌素等为主的复方药。

1.2 方法

1.2.1 细菌的分离培养与鉴定 将细菌病料接种于普通琼脂培养基上，37℃培养18～24h。挑取典型单个菌落分别接种在伊红美蓝琼脂培养基、麦康凯培养基和LB液体培养基上，经37℃培养18～24h后观察结果。然后进行革兰氏染色镜检和生化鉴定管培养鉴定。不同鸡场、不同大小的病鸡菌液分开保存，备用。

1.2.2 药敏片制作 用定性滤纸做成6mm直径的圆形纸片，将做好的纸片进行高压灭菌烘干备用。将1.1.3的药品按治疗量的5倍稀释。取1mL稀释药液浸泡50片药敏纸片30～60min后，置于干净的青霉素瓶内在37℃温箱中烘干。将做好的药敏片密封，4℃保存。

1.2.3 药敏试验及结果判定 吸取纯培养菌液100μL，均匀涂布在培养基上，再将药敏片贴于有菌液的平板上，待药敏片吸湿贴紧培养基约10min后，倒置于37℃恒温培养箱培养16～18h，观察结果。同时做2个重复。根据抑菌圈直径的大小来判定结果。若菌液浓度合适、涂布均匀，则抑菌圈规则，细菌呈融合生长；如果出现单个菌落，说明接种量小，需重做。

表1 药敏试验判断标准

1.2.4 体外筛选药物的临床试验 筛选抑菌圈直径大的药物用于临床预防和治疗，并观察疗效。

2 试验结果

2.1 细菌培养与鉴定结果 在伊红美蓝琼脂培养基上形成紫黑色带金属光泽的菌落，在麦康凯培养基上形成粉红色菌落；革兰氏染色镜检呈红色、中等大小的阴性杆菌；能发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇，产酸；MR试验呈阳性，VP试验呈阴性，不产生尿素酶和硫化氢。以上特征符合大肠杆菌的生化特性，确定两鸡场分离的细菌均为大肠杆菌。

2.2 体外药敏试验结果 本次试验共选取了两个鸡场不同生长阶段的鸡大肠杆菌进行体外药敏试验，结果见表2、表3。表中数据显示:A鸡场大肠杆菌抑菌圈平均值较大的分别是大鸡对4%氧氟沙星、5%硫酸粘菌素极度敏感；小鸡对4%氧氟沙星、5%硫酸粘菌素高度敏感。

B鸡场大肠杆菌抑菌圈平均值较大的分别是大鸡对4%氧氟沙星、5%硫酸粘菌素高度敏感；中鸡对5%盐酸多西环素、3%硫酸安普霉素、5%氟苯尼考粉中度敏感；小鸡对3%硫酸安普霉素高度敏感。

表2 A鸡场大肠杆菌体外药敏试验抑菌圈结果（平均值） mm

表3 B鸡场大肠杆菌体外药敏试验抑菌圈结果（平均值） mm

2.3 体外筛选药物的临床用法与效果观察

2.3.1 临床用药方法 A鸡场:大鸡和小鸡均采用4%氧氟沙星进行治疗。B鸡场:大鸡采用4%氧氟沙星和5%硫酸粘菌素进行联合治疗；中鸡采用5%盐酸多西环素和3%硫酸安普霉素联合治疗；小鸡采用3%硫酸安普霉素和5%氟苯尼考粉联合治疗。

2.3.2 临床效果观察 A鸡场:大鸡治愈率达97.5%，小鸡治愈率为93%。B鸡场:大鸡治愈率达96%，中鸡治愈率达96%，小鸡治愈率为92%。

3 讨论

3.1 鸡大肠杆菌血清型较多,且易产生耐药性，建议不同地方、不同鸡群都应定期进行药敏监测试验，选择对大肠杆菌敏感的药物进行预防和治疗。

3.2 药敏片上的药物应均匀分布，且要防止药敏片在浸泡过程中重叠。

3.3 药敏试验的抑菌圈大小受多种因素影响，如菌液浓度、药物扩散性、培养基质量、药敏片保存时间等，试验应尽量减少误差。

3.4 在药敏试验完后进行药物筛选时，应首选抑菌圈较大且抑菌圈内无杂菌的高敏药物进行防治，也可选择两种药物进行联合或交替用药；其次还应考虑给药方式、药物成本、配伍禁忌、应激等其他因素。

3.5 鸡大肠杆菌病易与其他病混合感染，所以在用药治疗时要全面考虑，并采取综合防治措施。

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