文│刘英姿 王宏军 董筱萍 程迪 周铁忠(辽宁医学院畜牧兽医学院)
孟祥飞(辽宁省锦州义县动物疫病预防控制中心)
于丽玲(辽宁省瓦房店市九龙动物卫生监督所)
近年来,我国养猪业发展迅速,已成为世界养猪大国。养猪模式也从散养向规模化、标准化转变,规模化养猪模式便于集中实施生物安全措施,便于疫病控制。但由于规模化猪场在条件建设、育种和猪病防治等技术上还处于初级阶段,猪场病原微生物污染和疫病发生还很严重,所以规模化养猪场应在各方面加强病原微生物的监测和控制,保证猪群健康水平,从而保证规模化猪场的经济效益和稳定发展。为此,笔者在辽宁省多家规模化种猪场开展了猪主要疫病病原学调查,共调查17种主要疫病(病原),包括猪瘟(CSFV)、猪蓝耳病(PRRSV)、猪圆环病毒病(PCV2)、猪伪狂犬病(PRV)、猪血凝性脑脊髓炎(HEV)、猪细小病毒病(PPV)、猪传染性胃肠炎(TGEV)、猪流行性腹泻(PEDV)、猪附红细胞体病、猪链球菌病、猪副伤寒病、猪大肠杆菌病、猪巴氏杆菌病、副猪嗜血杆菌病(HPS)、猪传染性胸膜肺炎、猪喘气病、猪丹毒。在病原调查的基础上,制定了相应生物安全控制措施,并对控制效果跟踪评价。本文就辽宁省辽西某规模化种猪场实施案例报道如下。
1.材料。
(1)检测样品。采自辽宁省某规模化种猪场。该种猪场有后备种猪903头,可繁母猪706头,种公猪53头,二元母猪1083头,优良商品猪8870头。采集不同生长阶段猪血清共928份,其中仔猪血清218份、保育猪血清230份、育肥猪血清310份、后备母猪血清90份、种母猪血清70份、种公猪血清10份。仔猪为1~30日龄,保育猪为31~70日龄,育肥猪为71日龄~出栏,后备母猪为71日龄~首次配种。采集发病猪的肺脏、脾脏、淋巴结和肝脏等病料56例,采样同时记录所采病料的动物临床特征资料。上述样品采集时间为2012年1月至2013年3月。
(2)检测试剂。PCR检测试剂:RNA 提取试剂、RNA 酶抑制剂;PCR试剂;引物序列由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。细菌学检验试剂均由本实验室配制。
(3)实验动物。SPF级Balb/c小鼠,雄性,6~8周龄,体重(20±2)克,购于吉林大学基础医学院实验动物中心,合格证号:SCXK(吉2003-0002)。
2.方法。
(1)病毒检测。病毒核酸PCR检测。猪蓝耳病采用自主建立的可区分经典毒株和高致病性变异毒株的PCR诊断方法。抗原检测。猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻应用猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻抗原检测免疫金标试纸条进行检测。
(2)病原菌检测。PCR检测。副猪嗜血杆菌,采集被检猪血液,或心包液、胸腹腔渗出液、心血、肝脏、脾脏和淋巴结等病料经TSA培养基培养的菌落作为被检病料,自行设计引物进行PCR方法检测。细菌学检验。具体方法按细菌学检验常规方法进行,包括直接涂片染色镜检、分离培养和形态观察、生化试验和动物实验。其中猪喘气病运用ELISA诊断试剂盒检测抗体。动物实验。用待测细菌培养物接种小鼠,每种待测细菌培养物接种小鼠10只,每只腹腔接种0.1毫升(含菌量约为2.0×1010细菌群落总数/毫升),同时取2只小鼠作对照,腹腔接种0.1毫升生理盐水,接种后观察小鼠24~72小时发病死亡情况,剖取死亡小鼠组织涂片镜检观察菌体。
3.生物安全管理措施。针对病原学调查结果,制定了规模化种猪场生物安全管理措施,包括猪场环境控制、饲料营养和饲养管理、卫生消毒、药物保健、免疫接种和疫病监测技术规程。
4.统计学方法。所得数据采用SPSS13.0软件进行卡方检验。
1.猪血清样品病原检测结果。928份血清样品进行17种病原检测,共检测检出阳性的病原6种,其中阳性率最高的是大肠杆菌,阳性率达到23.7%,猪附红细胞体次之,达到12.39%,猪瘟最低为1.3%。检出的PRRSV为猪蓝耳病美洲型经典毒株,阳性率达到6.5%,本场应用武汉科前动物生物制品有限公司生产的猪蓝耳病经典株弱毒疫苗免疫接种,接种后的猪也可能检出病原阳性。
2.病料样品病原检测结果。对病料样品进行17种病原检测,共检出阳性的病原11种,包括5种病毒,6种细菌;其中阳性率最高的是猪链球菌,阳性率达到36.5%,其次是大肠杆菌,达35.4%,最低的是猪细小病毒,2.1%;猪瘟和猪蓝耳病阳性率分别为3.1%和7.3%(见表1)。
表1 猪场病料样品病原检测结果统计
3.不同猪群病原分布情况。对不同猪群病原检出情况统计结果显示,仔猪群大肠杆菌阳性率所占比例最高,达到51.6%,未检出猪瘟、沙门氏菌和副猪嗜血杆菌。保育猪猪流行性腹泻、传染性胃肠炎、猪链球菌、沙门氏菌、肺炎支原体、附红细胞体和猪蓝耳病均较高,所占比例超过25%。育肥猪猪瘟、猪蓝耳病、猪链球菌和肺炎支原体所占比例较高,超过10%。后备猪猪蓝耳病和沙门氏菌所占比例超过了10%。猪瘟主要在育肥猪所占比例最高,猪细小病毒均在种猪群检出,猪蓝耳病在各阶段均有检出,其中保育猪、育肥猪检出比例最高,种猪群检出比例也较高(见表2)。
4.生物安全控制前后病原检测结果。对该种猪场制定和严格执行生物安全管理控制措施,经过半年后按同样比例和方法采集血清和病料样品,检测上述17种病原体。结果共检出4种病原体,比控制前病原体种类减少了7种;检出的4种病原体包括副猪嗜血杆菌、大肠杆菌、肺炎支原体和附红细胞体,其阳性率大幅度降低,分别降低了83.7%、93.4%、88.1%和74.5%(见表3)。
根据对该种猪场的病原学检测结果,检出了11种病原体,而且阳性率较高,说明该种猪场污染较重,与该场没有制定和执行严格的生物安全管理控制措施有直接关系。如引入种猪缺乏病原检测,平时也没有病原学监测环节;免疫程序的制定比较盲目,如该猪场原免疫接种的疫病只有猪瘟、猪蓝耳病、猪口蹄疫、猪伪狂犬病、猪肺疫和猪副伤寒。所以,猪传染性胃肠炎、流行性腹泻、猪链球菌、副猪嗜血杆菌、猪肺炎支原体等病原体污染较重。
开展病原学监测后,根据检出的病原种类,重新制定了免疫程序,增加了猪细小病毒、猪传染性胃肠炎、流行性腹泻、猪链球菌、副猪嗜血杆菌、猪肺炎支原体、猪大肠杆菌的免疫接种。同时严格执行环境控制、卫生消毒、疫病监控等技术规程,结果使猪场污染的病原得到了逐步净化,病原感染的种类和感染阳性率均大幅度降低,疫病病原感染控制效果十分显著。
规模化养猪场养猪数量多,运行环节复杂,一旦发生病原微生物感染,经济损失重大,而且有些病原微生物不易清除,会给养猪场带来长久的危害。因此,必须制定完善可行的生物安全措施,严格执行管理,才能保证养猪场健康稳定发展。根据长期的实践经验和研究结果,制定了包括环境控制、饲料营养和饲养管理、卫生消毒、药物保健、免疫接种和疫病监测技术规程的生物安全管理措施,并针对免疫抑制性疾病应用了自主开发的复合免疫增强剂,取得了显著的效果。该生物安全综合配套措施经过各地规模化猪场推广应用,产生了显著的经济和社会效益。
表2 不同猪群病原分布情况统计
表3 生物安全控制前后病原检测结果统计