病死猪肉快速检测试纸研究

朱珍珍，贾杏林，李晓云，聂 培，黄 林，吴昌奇

（湖南农业大学动物医学院，湖南长沙 410128）

随着畜牧业的快速发展和工业化进程的加快，疫病种类不断增加，社会上私自屠宰病死猪，病死猪肉逃避检疫进入市场的情况时常发生[1-3]。同时，随着人们生活质量的提高和消费保健意识的不断增强，人们对肉品质量要求越来越高，因而对病死猪肉的检测越来越受到关注。目前检验病死猪肉的方法主要为肉眼观察和实验室检测[4-5]。肉眼观察需要丰富的经验，主观性强，因此常出现病死猪肉漏检的现象。实验室主要检测方法有硫酸铜肉浸液法、过氧化物酶试剂法、PH试纸法，这些方法繁琐，难以满足当前市场病死猪肉现场快速大范围检疫的需要。因而，急需一种快速、简便、灵敏、高效的试纸检测方法来识别病死猪肉。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 肉样来源 湖南省16个猪场送检病死猪临床样53份。市场购买猪肉130份，其中包括长沙市某超市30份，某品牌猪肉40份，集贸市场60份。将所有肉样置于-20 ℃的冰柜中冷冻保存。

1.1.2 猪肉肉浸液的提取 取猪肉50 g，除去脂肪和结缔组织，剪碎研匀，置容器中，加3倍肉样量的蒸馏水，玻璃棒不时搅拌，浸渍10 min用滤纸过滤，滤液置4 ℃冰箱备用。

1.1.3 试剂 5%～10%硫酸铜溶液；PH5.4-7.0精密试纸条；TMB（北京索莱宝生物科技有限公司），用无水乙醇配制成2.0 g/L原液；过氧化脲（Sigma，204-701-4）1.0 g，用蒸馏水配制10 g/L原液；蒸馏水。

1.1.4 器材及设备：剪刀；镊子；试管；小滴管；电子天平；微型绞肉机。

1.2 实验方法

1.2.1 TMB过氧化物酶试纸法

TMB与过氧化脲以1:5的浓度比例分别用定性滤纸浸泡，37 ℃烘干。将TMB试纸条与过氧化脲试纸条叠放在一起，处理后的肉浸液滴于试纸上，3～5 min后观察结果。试纸呈为蓝色判为健康肉，试纸颜色无变化为病死猪肉。

1.2.2 硫酸铜肉浸液法[5]

向试管中分别加被检肉样和健康肉样的肉浸液2 mL，再分别滴加3～5滴5%～10%硫酸铜溶液，5～10 min判断结果。健康新鲜猪肉，溶液澄清透明，无絮片状或颗粒状凝聚物。病死猪肉，溶液中出现明显浑浊、絮片状、颗粒状凝聚物或呈胶冻状。

1.2.3 PH试纸法[5-6]

取肉浸液滴于PH5.4-7.0精密试纸条一端，数秒后与标准比色板比较，几秒钟后可出结果。病死猪肉，PH>6.5，健康猪肉通常在5.8-6.5之间。

1.2.4 过氧化物酶试剂法[6]

取2 mL肉浸液注入试管内，加入3滴1%过氧化氢溶液，再加入3滴0.2%的TMB溶液，混匀溶液，3～5 min内观察溶液颜色变化。健康猪肉，肉浸液出现蓝色或蓝绿色变化。病死猪肉肉浸液不出现上述变化，或1～3 min后出现淡青色。

2 实验结果与分析

本文用上述四种方法分别对53份死猪肉和130份市场肉样进行检测，检测结果见表1。从表1可知，这四种方法对病死猪肉样品的检测符合率均在90%以上，但是TMB过氧化物酶试纸法以及试剂法对病死猪肉的检测符合率、市场未知样品的检出率都高于硫酸铜肉浸液和PH试纸法。

表 1 四种快速检测方法结果统计（符合率）

3 讨论

国内对鉴别病死猪肉方法的研究只是将TMB检测法与其它检测法对比，并在小范围内调整TMB浓度和过氧化脲浓度[7]。而本实验对过氧化脲的浓度做了大范围呈线性的变化调整，并且通过对TMB和过氧化脲浓度的梯形设计试验，筛选两者不同的浓度比例，初步得出检测率最高的TMB和过氧化脲的浓度比例为1:5。同时，对试纸条材质的以及干燥方法进行筛选，确定最适反应条件，后期还进行了试纸的保质期试验，采用多种方法对检测试纸进行保存，定期检测试纸的灵敏度。

该试纸对健康猪肉和临床实验猪肉、市场送检未知猪肉样进行检测，扩大了样品的范围，验证了试纸对猪肉检测的普遍适用性。并且，从实验过程可知，硫酸铜肉浸法实验过程繁琐；PH试纸法灵敏度低，只有在猪肉腐败的情况下才能检测，易受光线、环境、人员差异等外界因素影响；TMB过氧化物酶试剂法的检测试剂不易保存，操作不便。本实验研究的试纸是针对任何时期的猪肉检测都可行，并且经实验证明符合率高，操作及携带简便，成本低廉、环保无毒，且保存期可达到半年以上，适合市场上检疫工作人员大批量大范围的初查。相比于目前常用的的病死猪肉的检测方法，不论是从检测的范围性以及灵敏度来说，该试纸都具有明显的优势。

最后，试纸中TMB和过氧化脲的浓度比例，所选择试纸的材质均有可能影响试纸检测的灵敏度，为了避免病死猪肉漏检现象，必须辅以感官检测、微生物检验和其他理化检验方法进行综合判断。

[1]钟伟，梁会龙.一起查处收购死猪肉加工腊肉案件反思[J].江西畜牧兽医杂志，2007，25（5）：47-47.

[2]詹文格.查处一起非法加工病死猪肉案件的反思[J].江西畜牧兽医杂志，2008，26（3）：49-49.

[3]张荣森，管艳平.一起经营病死猪肉案的查处[J].中国动物检疫，2006，23（4）：7-7.

[4]孔宪琴，梁航，黄素珍.病死猪肉的快速检验与处理[J].肉类研究，2008，21（1）：59-62.

[5]何叶仙，代启鹏，徐双才.病死猪肉的几种快速检测方法[J].肉品卫生，2005，23（3）：24-25.

[6]黎志荣，蔡彬，王秀君.用过氧化物酶反应对一起疑似病死猪肉的检验过程[J].中国动物检疫，2007，24（6）：31.

[7]栗绍文，孟宪荣，邓猛，等.TMB过氧化物酶试管法用于病健猪肉的鉴别检验[J].中国兽医杂志，2008，44（8）：70-72.