穴位埋线对衰老模型大鼠慢性应激行为学及大脑皮质的影响*

★ 边心会 张 宏（1.广东省广州市番禺区中医院 番禺 511400；2.广州中医院大学 广州 511400）

人体进入老年阶段以后，由于生理功能、机体代谢和组织形态变化，机体各系统都会出现不同程度的衰老征象，在形体外观、行为学和大脑功能方面均出现一系列衰退变化。应激是机体受到强烈刺激后出现的一系列神经内分泌免疫反应，以及由此而引起的各种机能和代谢的改变。研究发现长期强烈的身心应激可引起神经内分泌免疫功能的紊乱，严重影响人类的身心健康，加速机体的衰老过程[1-3]。本文旨在观察慢性应激对衰老机体行为学和大脑皮质方面的影响及穴位埋线的调节作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物与分组

健康3月龄SD雄性大鼠48只，SPF级，体重200-250g，由广州中医药大学实验动物中心提供。大鼠按体重随机分为4组：空白对照组（A组）、模型组（B组）、模型+应激组（C组）、模型+应激+埋线组（D组），每组12只。大鼠均饲养于SPF级动物实验室，分笼饲养，每笼4只，饲养温度21-24℃，光照时间为12小时左右，国家标准固体混合饲料喂养，自由饮食。

1.2 主要试剂与仪器

D-半乳糖（D-Galactose）由厦门兴隆达化学试剂有限公司提供；制动应激器为有机玻璃制成，由河南省新乡县实验动物设备厂提供；医用羊肠线为可吸收性外科缝线3-0铬制，上海浦东金环医疗用品有限公司生产；DT-2000型电子天平：江苏常熟双杰测试仪器厂；光学显微镜由上海齐跃生物科技有限公司生产，型号：A-1。

1.3 模型制备

本实验过程共8周。B组、C组与D组连续8周给予腹腔注射5%D-半乳糖溶液（生理盐水配制，120mg·kg-1·天-1），每天1次，A组每天给予腹腔注射等量生理盐水；C组与D组从第5周开始给予制动应激，应激工具为由大鼠固定仪改制而成的限制活动筒。将造模大鼠置于应激装置中，应激装置以完全限制大鼠活动为度，应激每天1次，连续应激4周，并通过循序延长制动时间增加应激强度。应激时间分别为d1-d4：60分钟/天；d5-d8：90分钟/天；d9-d12：120 分 钟/天 ；d13-d16：150 分 钟/天 ；d17-d20：180 分 钟/天 ；d21-d24：210 分 钟/天 ；d25-d28：240分钟/天。每天应激时间安排在上午9：00-12：00。

1.4 埋线取穴与方法

D组从第1周开始给予穴位埋线，选取“肾俞双”、“肝俞双”、“百会”、“内关双”作为穴位埋线处方。“肾俞”和“百会一组，”“肝俞”和“内关”一组，2组交替埋线。穴位定位参照《实验针灸学》（李忠仁主编，2003年中国中医药出版社）。将大鼠在清醒状态下俯卧固定于大鼠固定架上，将医用羊肠线剪成0.4-0.6cm数小段，用镊子将其传入7号注射针针头中，然后将预先剪去针尖的2寸针灸针作为针芯缓慢插入注射针头管中，组成一套。埋线时，穴位皮肤局部消毒后，将注射针头刺入穴位，抵住毫针针尾，缓慢将针头内羊肠线推入穴位内，待觉指下有空虚感后方可出针，并确认羊肠线已埋入穴位内，然后用消毒干棉球按压针孔1分钟。穴位埋线每周1次，共埋线8次。

1.5 行为学测定

（1）实验过程中观察各组大鼠的毛发、精神、活动、饮食、体重等一般状态。所有大鼠每天计量饮食量和饮水量，每3天称重1次。

（2）open-field法测定行为：本实验所用敞箱为立柱体，高40cm，长宽均80cm，周壁为黑色，底面由面积相等的25个方块组成，以大鼠穿越底面块数为水平格数，大鼠的直立次数为垂直次数，以大鼠的理毛次数作为修饰次数，通过记录大鼠在3分钟内的水平格数、垂直次数和修饰次数来比较不同组大鼠在新异环境中自发行为表现的差异。在实验结束后第1天进行敞箱实验。

1.6 标本采集与制备

各组大鼠于第8周实验结束后进行称重取材。所有大鼠腹腔注射麻醉（6%水合氯醛0.3mL/100g）后迅速断头，于冰盘中迅速开颅取右侧大脑半球，称重后放于甲醛溶液中固定24小时，取大脑颞叶部分常规石蜡包埋、冠状切片（片厚约4μm）、HE染色，光镜下观察大脑皮质形态学变化。

1.7 统计学分析

2 结果

2.1 一般情况

B组大鼠与A组大鼠相比，出现了精神倦怠、动作迟缓、反应迟钝、毛发无光泽、饮食量减少和体重增长缓慢（P＜0.05）等表现；C组大鼠老化表现更加明显（P＜0.01），部分大鼠甚至出现了便溏、尿频、体重减轻等现象；D组大鼠的老化表现不明显（P＜0.05）；体重增长差与A组之间比较无显著性差异。详见表1、图1。

表1 体重增长差

图1 各组大鼠体重增长情况比较

2.2 自发行为

与A组相比，B组、C组大鼠的水平活动次数、垂直活动次数和修饰次数都有明显减少（P＜0.05，P＜0.01）；D组大鼠水平活动次数、垂直活动次数和修饰次数较C组有明显增多（P＜0.05）。详见表2、图2。

表2 open-field法行为测定比较

图2 各组大鼠open-field法行为评定得分比较

2.3 大脑皮质光镜观察（HE染色10×40）

光镜下可见A组大脑皮质细胞排列密集，细胞形态正常，胞核、核膜、核仁清晰可见；B组大脑皮质细胞排列较稀疏，部分细胞出现固缩，体积减小；C组大脑皮质细胞明显减少，细胞排列稀疏，细胞固缩严重，细胞间隙增大，甚至出现细胞核膜、核仁消失，体积减小，成均质一片；而D组与C组相比，大脑皮质细胞排列较密集，细胞形态有所改善。

3 讨论

衰老是多基因（不变因素）和环境影响（可变因素）相互作用的亚临床病理过程，这个过程的显著变化之一就是生理功能减退和脑老化[4]。一方面，中医学认为，“有诸于内，必形于外”，年老以后由于五脏衰退，气血亏虚，可出现发白齿槁、耳聋目花、皮肤干枯、反应迟钝、行动缓慢等外在行为的衰老表现，正如《内经》指出：“肾气衰，发堕齿槁”、“精脱者耳聋”、“气脱则目不明”。另一方面，大脑是人体的中枢器官，对生命活动有着极其重要的调控作用。脑为髓海，肾主藏精，肝主藏血，肾精肝血充足，脑髓得以充养，脑功能正常。然而随着年龄的增长，人的大脑会出现生理性老化或病理性功能衰退，脑髓空虚，智力减退，亦在活动能力、思维能力、认知能力、协调能力和兴趣爱好等自主行为能力方面出现减退。临床上表现出健忘、反应迟钝、动作不协调等症状，甚至丧失社会活动能力，生活不能自理，这是因为脑在形态和功能上发生了退行性变化。

同时，老年机体由于生理功能出现退化，很难适应各种超越平常状态的内外界的变化，即会出现应激能力的下降。因此当各种慢性应激作用于老年个体后，就会加重老年个体在外貌特征、行为学、生理功能等方面的衰老变化和脑老化。有研究证明[5]，慢性应激对大鼠的体重和行为有重要影响，不仅可抑制大鼠体重增长，还造成大鼠排便、排尿增多，活动频繁，恐惧、焦虑情绪增高。

中医理论认为，慢性应激主要通过影响人的心、肝、肾、脑等功能，使机体出现气血流通不畅，脏腑功能紊乱，阴阳失调，加速机体的衰老。本实验选取肾俞、肝俞、内关、百会作穴位埋线治疗。因为肝俞和肾俞为肝肾两脏的背俞穴，是脏腑气血的汇聚地，能补肾疏肝、理气和血、调节阴阳、强腰健骨。内关为手厥阴心包经络穴，有益气养心、安神除烦、宽胸理气等作用。百会为督脉穴位，为三阳五会，与脑髓关系尤为密切，具有协调百脉之功。穴位埋线四穴，可疏通经络、调节平衡、益智复聪，提高抵抗力，改善学习记忆力。穴位埋线疗法，是一种简便易行的，融多种疗法、多种效应于一体的复合治疗方法[6]。具有省时方便、作用柔和持久的特点。穴位埋线通过对穴位的刺激可以增强脏腑功能，调节衰老机体的整体功能状态，提高抗应激能力，从而起到延缓机体衰老的作用。

[1]Seckl JR.Gucocorticoids.ageing and nerve cell damage[J].JNeuroendocrinol，2000，12（8）：709-710.

[2]王晓英，包天桐.应激与衰老的实验研究[J].中国自然医学杂志，2001，3（4）：199-202.

[3]韩娟.慢性应激对大鼠下丘脑神经递质的影响及中药的调节作用[J].吉林中医药，2002，22（4）：54-55.

[4]赵刚，蔡定芳.应激糖皮质激素和海马老化[J].国外医学·老年医学分册，2002，23（3）：125.

[5]郑晖，杨权，吴彩茹.慢性应激对大鼠行为和体重的影响[J].四川精神卫生，2004，17（2）：71-72.

[6]尹改珍，霍新慧.穴位埋线疗法现代临床应用[J].针灸临床杂志，2006，22（10）：58.