4-氨基安替比邻和乙醇在金鱼体内积聚量的温度和表面活性依赖

孔令辰(天津师范大学)

实验部分

材料：4-氨基安替比邻，乙醇，缓血酸胺和聚山梨酸酯。乙醇溶于蒸馏水中并在4℃保存。

准备工作：金鱼，1-3g，置于含有0.075%氯化钠溶液并且不断搅拌混合的容积为48升矩形玻璃缸中。而这个玻璃缸悬在温度维持在10℃-35℃的变温水槽中。所有实验用鱼均来自同一批鱼苗，以排除不同种群鱼的差异性。

预备实验可以证明吸收率在温度变化调整后快速稳定。用于实验的金鱼至少在实验条件温度下观察适应24个小时。然后他们被分别至于含有100ml的4-氨基安替比邻溶液（1.5mg/ml）和75ml乙醇溶液（1.0%），并分别以0.05M缓血酸胺为缓冲溶液使溶液pH稳定在7.0。实验操作过程中，聚山梨酸酯作为表面活性剂，在溶液中浓度为0.01%。所有实验溶液均在当天制备。在将金鱼浸入药物溶液的各个不同实验阶段，金鱼都用蒸馏水漂洗后裹上棉纸称重。金鱼从水缸中取出后，要立即进行实验或者冷冻备用。

实验方法：将金鱼浸泡在15ml的0.05M缓血酸胺为缓冲溶液使溶液pH稳定在7.0的4-氨基安替比邻溶液中，然后在氯仿中分散为混合均液。然后用离心机分离，并除去5.0ml的氯仿，然后加入10ml的0.01MHCl溶液并搅拌20分钟。从水相中取2ml，加入7ml水和2ml二甲氨基苯甲醛试剂。在430nm测量其吸光度并按每克鱼衡量其4-氨基安替比邻的含量。

为测量4-氨基安替比邻到鱼体表面的吸附量，将金鱼置于实验药液中30秒后，对4-氨基安替比邻含量进行分析。在对之前准备的空白液和浸泡实验鱼后的实验溶液的吸光度之间进行比较，并没有发现显著的不同。而没有浸入金鱼的空白实验溶液，也在相同实验条件下操作，仅作为参考对比。

为了确定乙醇的吸收量，每条实验鱼都用5ml的蒸馏水润洗后，均浆用离心机分离。将0.5ml上清液转移到闪烁管中，混合10ml的闪烁液进行计算，直到收集到最小10000的计数。甲苯用做内标来更正猝熄，计数系统的效率大概是75%。

结果与讨论

分布容量表明金鱼体内积聚药物的能力。4-氨基安替比邻的分布容量随着温度的升高而增加，较乙醇相比表现为温度依赖。结果表明4-氨基安替比邻的分布容量是热敏平衡的，这大概是由于与血浆蛋白结合而到转移到非水相导致的。而乙醇的分布容量没有呈现温度依赖，表明它有限地分布在金鱼体内的水相中。在对这两种药物的实验中，聚山梨酸酯都没有影响到分布容量值。

对于这两种药物，吸收的间隙常量对于温度都相当敏感。这两个吸收反应的能垒均涉及扩散，因此他们的吸收常量都符合阿伦尼乌斯公式。对于4-氨基安替比邻吸收行为的活化能缺乏表面活性作用，通过图中的斜率就可以确定。而相对于物质在水中的扩散行为，吸收的活化能相当大，4-氨基安替比邻吸收的速控步骤应该是穿过生物膜的扩散行为而不是水滞留层。相似的小分子穿过细胞膜的被动运输的活化能也有过报道[4-5]。例如，尿素和安替比邻穿过兔胆囊上皮细胞膜的活化能分别是13.0和9.3kcal/mol。

Fig.1 乙醇根据乙醇浓度的吸收量

Fig.2 4-氨基安替比邻在不同温度下根据时间的吸附量

Fig.3 4-氨基安替比邻和乙醇根据温度的分布容量

结论

实验证明金鱼体内乙醇的分布量不受温度和表面活性剂的影响。而4-氨基安替比邻的分布量同样不受表面活性剂影响，但确随温度的升高而显著增加。金鱼对这两种药物吸收的间隙常量都是温度依赖的。大概是因为4-氨基安替比邻与血浆蛋白结合而到转移到非水相，而乙醇有限地分布在金鱼体内的水相中所导致。

[1]N.A.HallandW.L.Hayton,J.Pharm.Sci.,56,304(2007).

[2]M.Gibaldi and C.H.Nightingale,ibid.,57,226(2008).

[3]A.R.DiSanto and J.G.Wagner,ibid.,58,1077(2009).

[4]C.Brun,J.Lab.Clin.Med.,37,955(2011).

[5]B.E.Cohen,J.Membr.Riol.,20,205(2005)