兔膝骨关节炎动物模型的构建

王栋栋，熊健斌（广西柳州市人民医院骨科，广西 柳州 545001）

骨性关节炎（OA）是一个多病因、发病机制复杂的常见病，目前各种OA动物模型制作方法周期长、操作复杂、损伤大[1]。寻找一种理想的造模方法是研究膝OA的关键所在。本实验拟在Hulth模型的基础上，克服其原来缺点，建立更符合临床症状的兔关节炎模型为探讨关节炎的发病机制及骨关节炎软骨修复研究提供了科学的研究平台。

1 资料与方法

1.1 一般资料：新西兰家兔，雌雄各半，体重1.8～2.2 kg，18只，普通级，由广西医科大学大学实验动物中心提供。

1.2 药品和试剂与仪器：HE染液，南京建成；甲醛，天津大茂；无水乙醇，天津大茂；硝酸，天津大茂，其他试剂均为分析纯。倒置相差显微镜，德国Olympus公司。

1.3 实验方法：①实验分组：家兔按体重性别随机分为实验组与对照组，实验组实验方法制备关节炎模型，而对照组家兔不做处理。模型制备：家兔麻醉后，使用剃须刀将关节处处理干净后，消毒处理，取内侧髌旁入路，切断内侧副韧带，打开关节腔，剪断前后交叉韧带，同时去除内侧半月板，手术结束后，止血并缝合伤口。家兔正常饲养于标准家兔饲养笼中，不限制饮食，不固定患肢，可自由活动[2]。②实验指标的测定：造模10周后，处死家兔，观察膝关节积液、滑囊肿胀及软骨的改变。取造模部位股骨端，10%甲醛固定、10%硝酸脱钙、石蜡包埋切片，进行HE染色。

2 结果

对照组家兔滑膜、软骨外观基本正常，呈蓝白色，色泽明亮，无裂纹及软化，滑液量少透明。实验组家兔滑膜部分呈结节样增生，滑液量少但混浊，软骨缺损形成，深达骨质，软骨下骨暴露，骨赘形成。HE染色：对照组关节软骨表面光滑，软骨细胞排列整齐呈柱状，细胞核清晰，染色均匀，潮线完整，软骨基质分布匀称； 实验组兔膝关节滑膜细胞轻度增生，下层疏松纤维姐织增生，胶原化，可见少量散在淋巴浆细胞浸润，部分区域软骨细胞核固缩、裂解、坏死，偏于一侧，钙化层软骨细胞呈簇状堆积，排列紊乱，潮线多不规整或完全消失，甚至软骨下骨质外露、软骨下骨囊性变。

3 讨论

几十年来国内外相继报道了多个动物模型对应于临床，OA有原发性和继发性，故从制作方法上可将OA动物模型分为两大类，其一为诱发模型，即通过各种操作方法如制动、手术、关节内注药、关节内植入软骨碎片或微粒等诱导OA产生；另一类为自发模型，即不用任何外界干预，动物自发OA，如C57黑鼠等[3-5]。最经典的是传统Hulth造模法，但该方法仍具有其局限性，主要表现在切除了膝关节维持静态稳定的主要韧带，造成关节极其不稳，手术创伤大，不同术者造模效果差异较大等。

本研究中在经典模型的基础上加以改进，切断前交叉韧带、切除内侧半月板，其优点主要表现在，创伤不大，且方便取关节液，10周模型可见股骨内骸和胫骨内侧平台软骨缺失骨质暴露及周围明显增生的骨赘，关节的缓冲作用减少，胫股关节面应力局部增大，分布不均；切断前交叉韧带造成膝关节失稳，形成软骨退变的起始环节，加之长期被迫活动进一步加重了软骨损伤而形成OA。10周内可成功复制出膝不骨关节炎，其在外观观察和病理学均和临床观察一致，与病理进展有一定相关性。本研究证实了此种改良方法的可行性，且为利用此动物模型进行骨关节炎的深入研究打下了基础。

[1] 欧云生,安 洪.鼠骨关节炎动物模型建立的现状[J].中国比较医学杂志,2004,14(1):41.

[2] 杨 峰,史宗道.用木瓜蛋白酶建立兔颞颌关节骨关节炎模型的研究[J].华西口腔医学杂志,2002,20(5):330.

[3] 汪青春,沈培芝,王海彬.骨关节炎动物模型的建立及选择[J].中医正骨,1998,10(3):39.

[4] 刘伯龄,刘献祥.骨关节炎动物模型的建立概况[J].福建中医药,2003,34(4):49.

[5] 聂 林,张学义,陈国瑞.骨关节炎的实验模型[J].中华实验外科杂志,1990,20(1):97.