酶免疫分析处理系统对110例乙肝免疫五项复检样本分析

张国良

荆州市中心医院 检验医学部，湖北 荆州 434020

0 前言

中国是乙肝病毒感染的高危区，尽管乙肝疫苗的广泛接种已经有效地控制了乙肝病毒的传播，但是仍有非常庞大的感染群体，据估计全国有1.2亿人长期携带乙肝病毒，其中慢性乙肝病人2000万。乙肝病毒感染严重危害了人类的健康，同时也引发了一系列社会和经济问题，是中国现阶段最为突出的公共卫生问题之一[1]。乙肝的预防、诊断与疗效等主要依赖患者血清学指标的检测,其中包含乙肝免疫五项检测。本文拟对本实验室近期出现的110例乙肝免疫五项复检样本进行分析，旨在剖析本实验室乙肝免疫五项复检的意义及乙肝检测的注意事项。

1 材料和方法

1.1 仪器

中文LIS处理系统；瑞士生产的GENESES RSP 100（RSP 100）样品分配系统，其工作原理是通过LOGIC软件控制分配质控物和待测样品至测定微孔板,再转至BEP III全自动酶免疫分析系统完成检测。在检测过程中需及时处理报警提示信息；德国生产的DADE BEHRING（BEPⅢ）酶免疫分析处理系统，其工作原理是通过软件控制流程自动完成加酶、孵育、清洗、显色、测量过程，并自动计算判断样本结果。在检测过程中需及时处理“错误报告（Logbook）”提示信息；德国生产的Roche e 601电化学发光仪，其工作原理是样本中的抗原或抗体与生物素化微粒、钌（Ru）标记的抗体或抗原结合形成抗原抗体复合物，加入链霉亲和素包被的微粒，使形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，检测物浓度与光量子数成正比（夹心法）或反比（竞争法）。在检测过程中需及时处理“报警（ALARM）”提示信息。根据ISO15189：2007的要求，在本室定期实施以上3种仪器的校准计划并进行性能验证，确保检验结果满足免疫学检验室内质量控制要求。

1.2 试剂及质控物

乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎表面抗体（HBsAb）、乙型肝炎e抗原（HBeAg）、乙型肝炎e抗体（HBeAb）、乙型肝炎核心抗体（HBcAb）5项试剂均来自北京万泰生物药业股份有限公司的试剂盒，5项质控物均为北京康彻思坦生物技术有限公司提供的弱阳性质控物。

1.3 样本

均为本室日常门诊、住院病人及体检人员的样本。

1.4 方法

样本离心后，先在RSP 100上进行微板加样，然后转至BEP Ⅲ上进行全自动加酶、孵育、洗板、显色及数据处理。待数据传输至中文LIS处理系统后，按照本室的作业指导书，进行结果审核，并筛选出应复查样本。次日将样本再行离心后进行复查，若两次结果一致，则可发出报告；若两次结果不一致，则将不一致的项目在Roche e 601电化学发光仪上进行检测，取结果一致者发出报告。几次检查结果均在本室的“乙肝样本复查记录表”上进行登记，以最终发送报告为基准，计算结果复检符合率。本室针对“ELISA法定性试验结果分析与控制”规定如下：① 出现“灰区”值须对检测结果进行综合评估，包括乙肝全套单项“灰区”结果及复合阳性标本的“灰区”结果；② 乙肝全套的单项阳性结果（HBsAb除外）；③ 抗原抗体同时阳性结果时，复检。

2 结果

（1）为方便描述，本文将HBsAg设为1，HBsAb设为2，HBeAg设为3，HBeAb设为4，HBcAb设为5，5项全阴设为0。

（2）本次研究的110例乙肝免疫五项复检样本中需复检的HBV结果模式，见图1。

图1 需复检的HBV结果模式

（3）复检后两次结果的比较及符合率，见表1。

表1 复检后两次结果的比较及符合率

3 讨论

目前我国临床实验室最常用的检测方法是酶联免疫吸附试验（ELISA）。本次研究的110例复查标本来自于申请乙肝三系检测的6679例受检对象中，需要复检的比例近2%。据ISO15189:2007的要求，我室为评估同一检测项目在不同检测系统间检验结果的一致性，特规范了免疫室不同仪器系统间的比对过程，即在BEP III和Roche e 601两个检测系统间每年进行1次常规比对，仪器大修或临床服务对象对同一仪器所检测同一项目检验结果质疑3次等情况时，随时进行临时比对，以确保检验质量。

我科早在2002年就已引进了全自动的样品分配系统和酶免疫分析处理系统，这2套系统的引进大大避免了我们在做ELISA分析时人为因素引起的误差。2005年，我科完成了关于ELISA检测影响因素的研究，并制定了乙肝检测的复查标准。本次实验中，HBsAg介于灰区但模式常见的复检标本中，复查后符合率较高（85%）。HBsAg的灰区问题一直是大家关注的焦点[2-4]。不难看出，HBsAg在乙肝免疫五项的复检中占很大比例，而HBsAg在乙肝的判断和治疗方面扮演着一个重要角色[1]。在临床检验中，ELISA试验由于本身的一些特点，会不可避免地出现一些误差。一般情况下，可以说对临床标本的检测结果，首次测定阴性的基本可以确定为真阴性，而阳性反应者不一定为真阳性[5]。本次实验中，两次检查结果不符的5例HBsAg介于灰区的样本，一方面可能由于每次检测的客观环境无法达到完全一致，如每块微板的灵敏度可能不同、RSP 100每次加样的灌注量可能不同、加好样后的微板在BEP Ⅲ上的布板时间无法完全相同等，这些都会导致HBsAg的S/CO值出现差异；另一方面，即使严格按照SOP文件来执行，也仍然无法解决乙肝窗口期的问题。

单项阳性（HBsAb除外）的复检标本中，复查后符合率仅为20%，其中以HBsAg及HBeAg单项阳性常见，且复检后符合率低。笔者认为造成假阳性的主要原因为样本离心不完全。样本离心不完全，血液未完全凝固或血清未完全析出就进行样本检测，致使检测反应孔出现凝血现象或残留细胞成分干扰，出现假阳性。HOOK效应（钩状效应）是进行ELISA检测必须注意的问题。在本次实验中，出现了1例由模式3变成了模式1，3，即出现了常见的后带现象[6]，此例标本通过原样及梯度稀释后得到确定。

抗原抗体同时存在的复检标本中，多以HBsAg和HBsAb同时存在为多见，复查后符合率为41%。若标本中存在高浓度的类风湿因子[7]，或标本是经过药物治疗后已产生基因突变，或变异株刺激机体产生了不同亚型的病毒株，从而出现抗原抗体同时存在[8]等因素，都可引起乙肝免疫五项检测结果出现不同形式的少见模式。

针对上述情况，每个实验室都需建立一套适合本实验室的完整的质量控制体系及复检标准[9]，实验室工作者应遵循本室的SOP文件，严格的进行复检并做好记录，必要时给临床及患者适当的建议信息，为临床及病人负责，同时也保护了自己。

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