产ESBLs酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药性分析

黄育敏

（海南省妇幼保健院检验中心，海南海口570206）

产ESBLs酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药性分析

黄育敏

（海南省妇幼保健院检验中心，海南海口570206）

目的了解下呼吸道感染产ESBLs酶大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的耐药特性，为临床抗菌药物合理使用提供依据。方法采用VITEK-32对大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌进行菌株鉴定，采用K-B法进行药敏试验及采用确证试验进行ESBLs测定。结果我院下呼吸道产ESBLs大肠埃希菌阳性率为27.1%，产ESBLs肺炎克雷伯菌阳性率为40.5%；这两种菌对亚胺培南和美罗培南显示100%敏感，对头孢西丁、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星也有较高的敏感性。对其余的抗菌药物耐药率均较高，相同药物中产ESBLs菌的耐药率均比非产ESBLs的高。结论根据我院的药敏结果分析，建议对大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌临床经验用药可选用碳青霉烯类抗生素。

大肠埃希菌；肺炎克雷伯菌；耐药性；ESBLs

产超广谱β-内酰胺酶（Extended-spectrum β-lacta-mases，ESBLs）的大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌是下呼吸道感染的主要病原菌，同时也是医院感染中最常见的条件致病菌。随着头孢菌素类抗生素广泛应用，导致产ESBLs发生率逐年升高，给临床治疗带来极大的困难。为此对海南省妇幼保健院2012年1月至6月儿科下呼吸道感染患儿痰标本分离出的非重复肺炎克雷伯菌111株及大肠埃希菌59株耐药性进行回顾性分析，以期为临床更有针对性地选择抗菌药物提供参考和帮助。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株来源2012年1月至6月，我院儿科送检的下呼吸道感染患儿标本中分离出的非重复肺炎克雷伯菌111株及大肠埃希菌59株。

1.1.2 仪器与试剂VITEK-32鉴定仪、GNI+鉴定卡购自法国生物梅里埃公司。血琼脂平板培养基、M-H药敏平板购自安图公司。

1.1.3 药敏纸片氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢唑啉、头孢噻肟(30µg)、头孢噻肟/克拉维酸(30µg/10µg)、头孢他啶(30µg)、头孢他啶/克拉维酸(30µg/10µg)、头孢呋辛、头孢哌酮/舒巴坦、头孢吡肟、头孢西丁、亚胺培南、美洛培南、庆大霉素、阿米卡星、环丙沙星、复方新诺明、左氧氟沙星等抗生素纸片购自英国Oxoid公司。

1.2 方法

1.2.1 菌株鉴定将检验合格的痰标本接种于血平板及中国兰平板，35℃培养18～24 h。可疑菌落进行分纯，纯化后的菌落用GNI+鉴定卡在VITEK-32鉴定仪上进行菌株鉴定。

1.2.2药敏试验采用K-B纸片扩散法，按照CLSI 2008 M100-S18相关标准判断。

1.2.3 ESBLs检测参照CLSI推荐的确证试验进行：头孢噻肟与头孢噻肟/克拉维酸组合；头孢他啶与头孢他啶/克拉维酸组合，任一组药物的抑菌圈的直径差≥5 mm时，判定为ESBLs阳性株。大肠埃希杆菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC700603为阳性质控。

2 结果

2.1 阳性率在大肠埃希菌中产ESBLs阳性率为27.1%(16/59)，肺炎克雷伯菌中产ESBLs阳性率为28.8%(32/111)，总阳性率为28.2%(48/170)。

2.2 耐药情况大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类药物亚胺培南、美罗培南的敏感性均为100%，其次对阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、头孢西丁的敏感率也较高，除头胞西丁外，对其他头孢类药物耐药率均较高。对同种药物，产SEBLs菌对抗生素的耐药性均高于非产SEBLs菌，见表1。

表1 大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对常用抗菌药物的耐药率（%）

3 讨论

超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)于1983年在德国发现后，医学领域专家对于该酶耐药性方面的研究持续增温。近年来由于临床对抗菌药物的不合理使用，尤其是第三代头孢的大量使用，导致产ESBLs菌的耐药性逐年增加。

ESBLs是由质粒介导的一类水解酶[1]，可通过质粒在细菌中传播，是肠杆菌科细菌对β-内酰胺类药物产生耐药的主要原因之一，具有水解含氧亚氨基β-内酰胺类抗生素的能力，它能分解一、二、三代头孢菌素和青霉素类抗生素，甚至可以分解第四代头孢类抗菌药物。

本研究对2012年1月至6月我院儿科送检的下呼吸道感染患儿痰标本中分离出的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌进行耐药性分析，产ESBLs菌株总阳性率为28.2%(48/170)，低于刘成伟等[2]报道的35.8%，与孟祥红等[3]报道的28.14%接近，高于郭绪平等[4]报道的18.0%。产ESBLs大肠埃希菌阳性率为27.1% (16/59)，低于朱德妹等[5]报道的56.2%、蒋冬香等[6]报道的50.1%。产ESBLs肺炎克雷伯菌阳性率为28.8% (32/111)，低于朱德妹等[5]报道的43.6%、蒋冬香等[6]报道的37.2%。差异可能与各地收集的标本类型不同，也可能与各地习惯性用药不同有关。

由表1可见，产ESBLs菌株对头孢菌素、单环β-内酰胺类抗生素均呈高度耐药，但对碳青霉烯类药物均敏感，对阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、头孢西丁亦有较高的敏感性。在同种药物中产SEBLs菌株对抗菌药物的耐药性均高于非产SEBLs菌株，其中产ESBLs菌对氨苄西林的耐药率高达100%，除对头孢西丁的耐药率较低外(12.5%～18.7%)，对二、三代头孢菌素的耐药率达71.8%～100%，但对含酶抑制剂的抗生素（如：哌拉西林/他唑巴坦）其耐药率也仅为12.5%～21.9%。本研究还显示产ESBLs菌株对左氧氟沙星、环丙沙星、复方新诺明、庆大霉素亦存在较高的耐药率，这可能与产ESBLs菌不仅携带ESBLs质粒，同时还携带有对氨基糖甙类和喹诺酮类抗菌药物的耐药基因有关。

鉴于近年大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的耐药性逐年增加，临床对产ESBLs菌感染经验性用药时应避免使用头孢类抗生素以及氨基糖甙类和喹诺酮类，应使用敏感率高的碳青霉烯类抗生素。产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌是医院感染的主要病原菌，除了应加强监测与合理使用抗菌药物外，还应加强医院内的隔离和消毒措施，减少医院内交叉感染的发生。

[1]Bish Jacoby GA,Medeinos AA.A functional classification scheme for β-lacatamases and its correlateion with molecular structure[J]. An-timicrobAgents Chemother,1995,39:1211.

[2]刘成伟,李文桂,郑行萍,等.产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌和肺炎克雷伯菌的分布及耐药性分析[J].中国病原生物杂志,2006, 12:404-406.

[3]孟祥红,肖漓.产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌和肺炎克雷伯菌的耐药性研究[J].中国实验诊断学,2006,1:55-57.

[4]郭绪平,李阳.产超广谱β-内酰胺酶肠杆菌的分布及耐药性分析[J].重庆医学,2007,27(7):566-567.

[5]朱德妹,汪复,胡付品,等.2010年中国CHINET细菌耐药性监测[J].中国化疗与感染杂志,2011,9(20):321-329.

[6]蒋冬香,陈刚,王玉春,等.产ESBLs,大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌的临床分布与耐药性[J].中华医院感染学杂志,2011,21(2): 371-373.

Drug resistance analysis of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae producing extended spectru beta-lactamases

HUANG Yu-min.Hainan Provincial Maternity and Infant Health Hospital,Haikou 570206,Hainan, CHINA

ObjectiveTo investigate the drug resistance of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae producing extended-spectrum β-lactamases(ESBLs),and then provide bases for clinical control and treatment of ESBLs bacteria infection.MethodsThe bacterial identification of E.coli and K.pneumoniae were performed on VITEK-32, antimicrobial susceptibility was tested by disc diffusion test(K-B method),and ESBLs was detected by confirmatory test.ResultsThe positive rate of E.coli producing ESBLs was 27.1%,and the positive rate of K.pneumoniae producing ESBLs was 40.5%,E.coli and K.pneumoniae had 100%susceptible rate to imipenem and meropenem,and they were susceptible to cefoxitin,piperacillin/tazobactam,amikacin,but to other antimicrobials,the resistance rate of them were high.To the same antimicrobial,ESBLs positive strains had higher resistance rate than ESBLs negative ESBLs strains.ConclusionAccord to the result of drug sensitive test,carbapenem antibiotics could be the best choice to control the infection due to E.coli and K.pneumoniae.

Escherichia coli;Klebsiella pneumoniae;Drug resistance;Extended-spectrum β-lactamases(ESBLs)

R378.2

A

1003—6350（2013）06—0858—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2013.06.0366

2012-10-09)

黄育敏。E-mail：hnhym20000@126.com