甘寒养阴药抗小鼠光老化损伤的实验研究

王 秋

甘寒养阴药抗小鼠光老化损伤的实验研究

王 秋

光老化；甘寒养阴药；抗衰老

皮肤光老化是由日光尤其是紫外线导致的一种皮肤慢性损伤，临床表现如色斑、皱纹、皮肤干燥、发黄及红血丝等。中药治疗是常用的一种治疗手段。甘寒养阴药是指药性甘寒之品以生津养阴，主要是治疗肺胃阴虚证的一种“养阴”方法，属于八法中的“补法”范畴。国内外对甘寒生津药进行了大量研究，认为甘寒生津药不仅可以扶正，而且还有一定的祛邪作用。甘寒养阴药是否能有效预防或治疗皮肤光老化，相关的实验研究尚不多[1]。本实验选择麦冬、玉竹、石斛三味甘寒养阴药作为代表药物，旨在观察其对光老化模型小鼠的拮抗效应。研究报道如下。

1 材料和方法

1.1 材料麦冬、玉竹、石斛均购自南京市药材公司，经中国药科大学中药鉴定教研室鉴定为正品（麦冬为百合科植物麦冬Ophiopogonjaponicas(Thunb.) Ker-Gawt.的块根，玉竹为百合科植物玉竹Polygonatumodoratum(Mill.) Druce的干燥根茎，石斛为兰科植物金钗石斛DendrobiumnobileLindl.的干燥茎。药材粉碎后，分别称取麦冬、玉竹和石斛各100g，加水煎煮2次，合并滤液，浓缩至100ml，水煎液浓度1g/ml。实验动物采用昆明种小白鼠50只，体重20～24g，雌雄各半，由中国药科大学动物实验中心提供。

1.2 方法

1.2.1 动物分组和处理实验室温度控制在23～25℃，全价颗粒饲料喂养。随机分为麦冬组、石斛组、玉竹组、空白组及模型组，共五组，每组各10只。各组小鼠背部剃毛，面积3cm×3cm，以后在每次紫外线照射前重复剃毛；各中药组小鼠中药服药量以临床常用量为标准，按李仪奎《中药药理实验方法学》[2]加大给药量公式换算出小鼠中药饲喂量，每天2次灌胃饲药；空白组和模型组给予等量生理盐水，每天2次灌胃，直至实验结束。

1.2.2 光老化皮肤损伤小鼠造模方法除空白组外，各组小鼠在首次灌胃后，从第2周起进行紫外线照射。照射时将小鼠用固定器固定，头部区遮光，置于SS-04P型光疗仪下照射，光疗仪紫外灯管以UVA/320～420nm加UVB/280～320nm模拟日光组合配置。用紫外线辐照计监控辐照强度，UVA辐照强度1.12mW/cm2，UVB 辐照强度0.118mW/cm2。辐照时间以小鼠开始出现皮肤轻度泛红为准。每天照射一次，连续12周。

1.2.3 指标测定最后一次紫外线照射后24h，断颈处死小鼠，立即取下小鼠背部脱毛处全层皮肤（去除去皮下脂肪组织），再用6mm皮肤活检钻孔器，在处理好的脱毛区皮肤相对应位置钻取8片相等面积的皮肤组织。测定方法详细参照试剂盒说明书，分别测定SOD、GSH-Px活性和MDA、HYP含量[3]。

1.3 统计学分析采用SPSS 15.0统计软件包，结果以（±s）表示，组间按方差分析进行显著性检验，P＜0.05为有显著差异，P＜0.01为有极显著差异。

2 结果

麦冬组SOD、GSH-Px的表达有极显著性差异（P＜0.01），MDA、HYP表达有显著性差异（P＜0.05）；石斛组SOD、GSH-Px、MDA、HYP的表达均有极显著性差异（P＜0.01）；玉竹组SOD、GSH-Px的表达有极显著性差异（P＜0.01），MDA、HYP表达有显著性差异（P＜0.05）。见表1。

表1 麦冬、石斛、玉竹对UV慢性光损伤小鼠皮肤组织SOD、GSH-Px活性和MDA、HYP含量的影响(±s,n=10)

表1 麦冬、石斛、玉竹对UV慢性光损伤小鼠皮肤组织SOD、GSH-Px活性和MDA、HYP含量的影响(±s,n=10)

注：与模型组比较，*P＜0.01，**P＜0.05；与空白对照组比较，#P＜0.01

组别 SOD (U/mg prot) GSH-Px (U/mg prot) MDA (nmol/mg prot) HYP (ug/mg prot)麦冬组石斛组玉竹组空白组模型组245.00±14.93*246.20±28.09*236.67±18.98*158.55±21.23 268.63±19.88#17.44±3.12*18.76±1.45*16.33±2.14*21.89±2.69 9.93±1.78#8.99±1.21**8.03±0.95*9.12±1.34**6.45±0.88 11.35±0.69#0.52±0.04**0.43±0.05*0.55±0.06**0.39±0.03 0.61±0.05#

3 讨论

皮肤老化包括自然老化和光老化，皮肤光老化是在自然老化的基础上，由于长期紫外线照射所致的皮肤结构和功能的特征性改变。日光中的UVA和UVB是引起光老化最重要的因素。目前认为紫外线照射皮肤后可致高度反应的氧自由基形成，这些自由基通过与各种细胞内结构相互作用，破坏皮肤的抗氧化系统，从而使皮肤细胞抗氧化酶活性降低（如超氧化物歧化酶和谷胱甘肽氧化酶）[4-5]，脂质过氧化反应产物如丙二醛（MDA）含量明显升高。长时间的紫外线照射，可导致真皮胶原合成受到明显抑制；此外，过氧化脂质或丙二醛（MDA）又能加速胶原蛋白的老化[6-7]，羟脯氨酸（HYP）是胶原蛋白特有的氨基酸之一，它的含量可以反映出真皮内胶原蛋白的含量变化，而胶原含量又可反应出皮肤的衰老程度。现代研究表明中草药及其提取物有改善组织结构，清除体内自由基，增强机体抗氧化酶活性，提高机体皮肤免疫功能等作用，故中药是拮抗皮肤光老化的一种有效手段[8]。甘寒生津药是指药性甘寒之品以生津养阴，主要是治疗肺胃阴虚证的一种“养阴”方法，属于八法中的“补法”范畴。国内外对甘寒生津药进行了大量研究，认为甘寒生津药不仅可以扶正，而且还有一定的祛邪作用，实验研究，甘寒生津药多方面的药理作用，如补充水电解质及各种营养成分、解热抗炎、改善血液流变学、清除自由基等；但对于抗皮肤光老化的研究却缺少系统性、深入性。本课题即在前人研究的基础上，以传统中医基础理论为指导，以动物实验方法为主，系统深入地研究甘寒生津药的作用机理。有人认为正虚是邪实是皮肤光老化的主要病理[9]，“邪之所凑，其气必虚”，正虚即是阴津亏损，不能滋养濡润皮毛腠理，以致风、热、光毒等邪侵袭，光毒之邪性质属阳，阳邪伤阴，故光毒伤人，灼伤阴津，阴津亏损，无以制火，则邪热更盛；“津液被火灼竭，则血行愈滞”，从而引发津亏热盛血瘀即正虚邪实的病理变化，损伤机体的皮肤组织而导致光老化。光毒热邪必需借助于充足的阴津方可制胜，甘寒养阴药既可生津增液，又可清热，也可活血，滋而不腻，清而不燥，即传统中医学“壮水制火”、“沃焦救焚”、“增水行舟”。故甘寒生津药用于皮肤光老化是可行的，实验也证实了甘寒养阴药对小鼠皮肤光老化有一定拮抗作用，如降低光老化小鼠皮肤中的丙二醛，增加羟脯氨酸含量，使超氧化物歧化酶和谷胱甘肽氧化酶活性增加。研究结果将拓展皮肤光老化临床治疗的新思路，扩大甘寒养阴药的临床应用，为临床用药提供新的理论指导，指导新药开发。

[1]何黎.美容皮肤科学[M].2版.北京：人民卫生出版社,2011：58.

[2]李仪奎.中药药理实验方法学[M].2版.上海：上海科学技术出版社,2006：562.

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1673-5846(2013)08-0275-02

中国药科大学中药学院，江苏南京 211198