乙酰甲喹对鸡急性亚急性毒性研究

刘迎春，曾振灵

（1.中国农业科学院上海兽医研究所 农业部动物寄生虫学重点实验室，上海 200241;2华南农业大学兽医学院基础兽医药理实验室 广州 510642）

乙酰甲喹 (mequindox)，又名痢菌净，化学名为3-甲基-2-乙酰基-喹噁啉- N1，N4 -二氧化物，为卡巴氧类似物，为中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所最早合成的一类新兽药[1]。临床上乙酰甲喹对仔猪黄、白痢[2]、猪痢疾[3]及禽大肠杆菌病均具有较好的疗效，另外，由于其价格低廉，被广泛用于养殖业疾病的防治。但是在养殖户使用过程中，由于对乙酰甲喹药理学性质了解不是很透，从而导致中毒事件时有发生[4,5]。国内对于乙酰甲喹毒性方面的报道均是根据中毒病例进行分析，关于乙酰甲喹对鸡的急性毒性以及亚急性毒性方面的研究国内外鲜有报告，鉴于同类其他药物及乙酰甲喹对动物存在肝、肾等内脏毒性，且对肾上腺及醛固酮系统有损害[6]，本研究拟测定各脏器系数以及血清中谷草转氨酶、谷丙转氨酶、肌酐等反应肝、肾功能的生化指标，评价乙酰甲喹对鸡的临床毒副作用与不良反应，从而为兽医临床更合理的应用此药提供参考。

1 材料与方法

1.1 仪器魅力1800全自动生化分析仪（美国MDSIN公司）。

1.2 药物乙酰甲喹（含量99.5%，批号20060801，江苏天成保健品有限公司），给鸡灌服前用0.5%羧甲基纤维素钠制成混悬液备用。

1.3 试验动物500只1日龄科宝-500白羽鸡，购自正大康地（东莞）有限公司，饲喂不含任何药物的空白饲料。

1.4 试验设计

1.4.1 急性毒性试验分组 试验鸡饲喂至3 w龄，随机抽取体重相近的10只进行预试验，以确定试验鸡对乙酰甲喹的最大耐受量。饲养至第4 w龄选择体重相近的70只，随机分为7组，每组10只，其中6组剂量组，1组空白对照组，灌服前将乙酰甲喹用0.5%羧甲基纤维素钠配制为最高浓度为240 mg/mL混悬液，并依次倍比稀释至6个浓度，稀释倍数为1.25。然后以最大容许量，不同浓度一次性给鸡灌药，6个剂量组浓度分别为78.6、98.3、122.9、153.6、192.0、240.0 mg/kg 体重，灌药后对其体重、精神状况观察2 w，记录死亡鸡只并剖检。

1.4.2 亚急性毒性试验分组 试验鸡饲养至第7 w龄选取体重相近的250只，随机分为5组，每组50只，其中4组剂量组，1组空白对照组，拌料给药。根据急性毒性试验结果，饲料添加乙酰甲喹浓度依次为 75、150、300、600 mg/kg。其中饲喂至第 5 w，各组均改为空白饲料，观察其恢复情况。

1.4.3 血样采集 亚急性毒理试验分别于给药后第1、2、3、4、5 w采集鸡心血，每组随机取10只，10 mL/只，采血前对每只鸡称重。采集血液静置、分离血清后进行血清生化指标测定。

1.4.4 组织病理学观察及脏器系数测定 对采集血样后的每组10只试验鸡剖检，观察病变并分别取其心、肝、脾、肺、肾及生殖器官称重后，每组取2只鸡脏器用10%中性福尔马林固定，送往本校兽医病理实验室制备病理切片。脏器系数=脏器重（g）/活体重（kg）。

1.4.5 血清生化指标测定及方法 丙氨酸氨基转移酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、白蛋白（ALB）、谷氨酰转肽酶（GGT）、血中尿素氮（BUN）、血糖（GLU）、甘油三酯（TG）、肌酐（GREA）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总蛋白（TP）、总胆红素（TBIL）、总胆固醇（TC）。检测试剂盒均有（默克）公司提供，测定方法均根据试剂盒说明进行。

1.4.6 数据处理 采用SPSS 13.0软件进行差异显著性检验和多重比较。

2 结果与讨论

2.1 临床与组织形态学观察急性毒理试验在高剂量组 240.0 mg/kg 体重，给药第 3 d 便出现鸡只死亡，剖检发现肝脏出现紫红色病变，胆囊充盈，腺胃与肌胃交界处出现弥漫性出血严重者呈黑褐色糜烂、溃疡，肾脏肿大充血，肠道出现鼓气并有出血点，心肌变软。存活鸡只精神沉郁，采食量明显下降，羽毛凌乱，翅膀下垂，扎堆，拉黄绿色稀粪。各组死亡情况见表1。亚急性毒理试验过程中600 mg/kg组在给药第2 w开始出现鸡只死亡。其他剂量组未见鸡只死亡及明显中毒现象。

表1 急性毒性试验各组的死亡率Table1 Mortality in acute toxicity group

2.2 乙酰甲喹对实验鸡脏器系数影响乙酰甲喹对脏器系数的影响结果见表2。从表2可以看出饲喂添加有乙酰甲喹的饲料第1 w与对照组相比除各剂量组肾脏均出现显著性差异（p＜0.05），C组与D组脾脏与对照组差异显著（p＜0.05），各组其他脏器与对照组差异不显著（p＞0.05）；第3 w C组与D组心脏与对照组差异显著（p＜0.05），A组，B组与C组肾脏与对照组差异显著（p＜0.05），C组肺脏与对照组差异显著（p＜0.05）；第4 w与第5 w各组脏器系数与对照组差异均不显著（p＞0.05）。

表2 亚急性毒性试验中乙酰甲喹对鸡脏器系数的影响（平均值±标准误）Table 2 Organ coeffi cient of chickens given mequindox for subacute toxicity （± S .D.）

表2 亚急性毒性试验中乙酰甲喹对鸡脏器系数的影响（平均值±标准误）Table 2 Organ coeffi cient of chickens given mequindox for subacute toxicity （± S .D.）

注 ： * 表明p＜0.05 差异显著 ; ** 表明p＜0.01 差异极显著Notes： * indicates p＜0.05 signifi cant difference; ** indicates p＜0.01 very signifi cant difference

脏器Organs时间Time (d)对照组Control group试验组（mg/kg 饲料）Experiment groups （mg/kg feeds）0 75 (A) 150 (B) 300 (C) 600 (D)7 4.32±0.69 3.27±1.00心14 21 28 35 4.91±1.02 3.91±0.59 5.89±1.27 3.81±0.88 3.84±0.37 4.26±0.41 3.71±0.56 4.96±0.44 3.59±0.27 4.48±0.68 4.49±0.45 4.27±0.75 3.94±0.37*3.64±0.50 4.16±1.81 4.08±0.13 4.88±0.89 4.29±1.29*3.37±0.16 4.23±1.31肝脾肺肾7 14 21 28 35 7 14 21 28 35 7 14 21 28 35 7 14 21 28 35 17.97±2.86 20.33±3.45 24.42±5.02 18.78±2.20 17.33±1.64 0.97±0.24 1.39±0.32 1.56±0.47 1.21±0.32 1.24±0.41 4.79±1.03 4.94±0.57 5.55±1.12 3.91±0.79 5.22±1.80 3.85±1.02 5.21±0.72 5.40±1.34 4.69±0.19 4.76±0.70 20.92±2.95 17.30±1.61 14.09±2.38 18.71±3.93 18.62±5.38 1.36±0.46 1.20±0.23 1.88±0.59 1.30±0.32 1.81±0.98 4.77±0.76 4.62±0.80 4.48±0.33 4.48±1.11 4.12±0.38 5.39±0.59*5.70±1.01 6.11±0.64*5.82±0.77 5.53±0.90 17.74±1.63 20.43±6.12 19.27±2.69 19.47±3.30 18.27±8.17 1.32±0.15*1.31±0.62 0.99±0.24 1.76±1.26 1.14±0.24 3.94±0.86 5.34±1.49 3.67±0.48 4.33±0.59 4.39±0.61 5.80±0.540*6.32±1.10 6.89±1.24*5.89±0.63 5.60±3.61 17.51±0.80 20.26±4.79 22.05±4.28 17.81±2.51 16.94±5.67 1.50±0.50*1.30±0.42 1.39±0.41 1.26±0.38 1.18±0.53 4.05±0.74 4.08±1.04 4.92±0.99*4.24±0.72 4.61±1.68 6.21±0.42*6.31±1.00 7.39±1.46*6.01±0.56 6.58±1.17 18.84±1.85 19.23±4.50 1.26±0.47 1.11±0.28 5.47±1.20 4.09±0.39 6.29±0.67*6.62±0.92 7生殖器官14 21 28 35 0.23±0.07 0.38±0.10 0.47±0.11 0.57±0.56 0.96±1.13 0.27±0.04 1.15±1.43 0.35±0.05 0.77±0.33 0.66±0.35 0.23±0.11 0.37±0.30 0.74±0.57 0.76±0.44 0.30±0.13 0.43±0.21 0.41±0.24 0.44±0.10 1.59±1.39 1.02±0.88 0.20±0.15 0.28±0.12

2.3 乙酰甲喹对实验鸡只体重增重影响实验鸡给药后每组增重情况如图1所示。从图 1可知对照组增重均高于各给药组，说明乙酰甲喹对鸡的生长有不同程度的抑制作用。

图1 亚急性毒性试验中乙酰甲喹对鸡每周增重的影响Fig.1 Weight increasing of chickens given meqindox every week for subacute toxicity test

2.4 乙酰甲喹血液生化指标影响乙酰甲喹对实验鸡血液生化指标影响结果，见表 3。从表中可以看出乙酰甲喹对血液中天门冬氨酸氨基转移酶（AST）与总胆红素（TBIL）有严重影响，第1 w C、D组AST与对照组差异显著（p＜0.05），第1、2 w除A组外其他各组TBIL与对照组差异显著（p＜0.05），第3、4、5 w各给药组AST，TBIL（除A组）与对照组差异均显著（p＜0.05），D组与对照组差异均显著（p＜0.05），丙氨酸氨基转移酶（ALT），碱性磷酸酶（ALP），白蛋白（ALB），谷氨酰转肽酶（GGT），血中尿素氮（BUN），血糖（GLU）、甘油三酯（TG）、肌酐（GREA）与对照组差异均不显著（p＞0.05）；第1 w D组总蛋白（TP）与对照组差异显著（p＜0.05），第2 w B 组、C组与D组总蛋白（TP）与对照组差异显著（p＜0.05）；第1 w B组与C组与对照组差异显著（p＜0.05）；第2 w B组、C组与D组对照组差异显著（p＜0.05）；给药后第2 w A组、B组与C组总胆固醇（TC）与对照组差异显著（p＜0.05），D组差异极显著（p＜0.01）。

表3 亚急性毒性试验中乙酰甲喹对鸡血清生化指标的影响（平均值±标准误）Table 3 Blood biochemistry of chickens given mequindox for subacute toxicity test (± S .D.)

表3 亚急性毒性试验中乙酰甲喹对鸡血清生化指标的影响（平均值±标准误）Table 3 Blood biochemistry of chickens given mequindox for subacute toxicity test (± S .D.)

7 127.95±18.45*204.70±41.51*AST 14 21 28 35 87.16±11.57 263.20±32.59 285.93±26.63 359.60±150.13 340.75±34.39 82.933±33.51 261.22±36.41 199.20±124.23*250.06±94.97*255.72±74.97*92.07±23.81 293.84±14.15 300.30±27.28*256.76±79.02*509.63±321.34*124.60±33.66*261.00±67.52 333.98±64.14*177.33±40.80*223.10±188.99*ALT ALP TP 7 14 21 28 35 7 14 21 28 35 7 14 21 28 35 7.2±2.73 3.54±3.24 4.73±7.26-3.08±5.62 4.93±4.81 1504.34±744.79 1327.76±1226.49 1007.83±647.28 639.74±130.66 1055.03±749.94 51.40±3.69 38.16±19.83 64.90±15.53 58.84±3.63 66.85±17.24 4.40±1.13 0.94±1.79 2.94±2.20 0.28±2.65 4.34±8.16 1432.10±795.69 1249.18±385.27 685.02±484.25 735.70±282.04 782.44±310.17 50.93±4.43 41.76±7.57 56.96±8.88 60.94±11.30 60.72±10.14 5.17±1.33 1.74±1.02 3.80±2.72-0.2±3.96 0.9±3.14 1223.53±304.89 878.70±203.55 849.95±201.62 673.90±336.12 629.63±168.63 55.10±5.93 62.80±3.19*59.38±6.53 53.80±6.60 57.65±27.37 7.80±1.69 1.78±2.16 2.10±0.76-7.45±9.01 2.54±12.18 1006.70±474.18 786.70±259.28 1107.68±529.28 597.20±182.03 795.05±994.88 48.30±6.08 51.86±3.54*58.96±14.62 57.70±11.53 49.95±3.78 4.25±1.20 2.23±0.42 1023.30±442.22 910.3±162.71 42.65±1.91*56.80±7.60*

续表

2.5 本研究发现乙酰甲喹对肉鸡具有较大毒性，急性毒性实验研究表明半数致死量为205.2 mg/kg。亚急性毒性实验研究发现乙酰甲喹对肉鸡肾脏具有严重影响，对鸡的生长有不同程度的抑制作用。饲料拌药浓度为600 mg/kg饲料时，饲喂两周鸡只死亡率达到100%，所以建议治疗用药时，饲料添加浓度不要超过150 mg/kg饲料。

乙酰甲喹对鸡急性毒理性结果表明当给每kg实验鸡一次性灌服240 mg乙酰甲喹时，死亡率到达80.0%，随着剂量减少死亡率明显降低，乙酰甲喹对靶动物鸡的半数致死量为205.21 mg/kg，95%可信限为 185.78～226.46 mg/kg。

乙酰甲喹对鸡增重方面的影响从结果可以看出，给鸡饲喂含有乙酰甲喹的饲料，对其增重有不同程度的抑制作用，添加浓度为600 mg/kg饲料时影响最为严重，临床上推荐饲料添加浓度为50 mg/kg饲料，从鸡只安全角度考虑添加浓度不应超过150 mg/kg饲料。

乙酰甲喹对鸡脏器系数影响从测定脏器系数看，大剂量的乙酰甲喹主要对鸡只肾脏产生严重影响，解剖过程中可发现给药鸡肾脏明显肿大，其次在高浓度组发现肝脏呈紫红色病变，胆囊充盈明显，个别公鸡出现睾丸异常肿大，从动物某些脏器所具有的特异的代偿机能考虑，如果对脏器没有实质性的损害，其脏器系数可能变化不大，脏器的组织形态学变化早于脏器系数与生化指标的变化，因此脏器组织形态学的变化可以做为较为灵敏的方法来检查药物对脏器的影响，从我们所得到的组织切片可以看出乙酰甲喹对肾脏、肝脏以及脾脏都有不同程度的影响。

乙酰甲喹对鸡血液生化指标的影响本试验测定的血清生化指标AST、ALT、ALP、TP、ALB、GGT、TBIL、BUN、CREA、GLU、TG、TC结果表明，乙 酰 甲 喹 对 ALT、ALP、ALB、GGT、BUN、GLU、TG 、GREA指标与空白组差异不显著，但是与空白对照组相比BUN指标具有升高趋势，BUN多因肾功能不全（急性或慢性）、脱水和休克等引起肾血流量减少或伴有肾功能障碍的氮代谢的变化。从血清生化指标测定结果分析乙酰甲喹使AST在血液中含量受到严重影响，天门冬氨酸氨基转移酶广泛分布于体内各个组织器官中，与各个组织细胞进行旺盛的氨基酸代谢相适应，天门冬氨酸氨基转移酶在细胞内主要存在于线粒体和细胞质中。肝脏损伤时天门冬氨酸氨基转移酶很容易释放入血液中，使血液中天门冬氨酸氨基转移酶升高。本实验中通过天门冬氨酸氨基转移酶升高说明乙酰甲喹对实验鸡肝脏有不同程度的损伤。

[1]梁剑平, 卫增泉, 张力, 等.重离子辐照乙酰甲喹对生物活性的影响[J].核农学报, 2000, 14 (3)： 151-156.

[2]郭小清, 唐莉苹, 聂建超, 等.中药防治仔猪黄白痢的临床疗效试验[J].中兽医学杂志, 2005, 3： 6-8.

[3]李锦泉, 赵武, 许力干, 等.猪痢疾的诊断与防制[J].畜牧与兽医, 2002, 134 (14)： 62.

[4]孙展和.鸡痢菌净中毒[J].养禽与禽病防治, 2005, (8)：37.

[5]杨日桓, 苏亚君.肉仔鸡痢菌净中毒的诊疗体会[J].现代畜牧兽医, 2007, (10)： 44.

[6]李世尧, 张俊文.鸡乙酰甲喹中毒的诊断和治疗[J].兽医技术[J].2008, (226)： 75-76.

[7]宋宗好, 提金凤, 李婧, 等.鸡乙酰甲喹中毒的诊断和防制[J].中国家禽[J].2006, 13 (28)： 41-42.