PTTG和p27Kipl在肝癌中的表达及其临床意义

蔡建平周湘鸿*

（1 河南省人民医院肝胆外科，河南 郑州 450014；2 河南省人民医院心血管内科，河南 郑州 450014）

PTTG和p27Kipl在肝癌中的表达及其临床意义

蔡建平1周湘鸿2*

（1 河南省人民医院肝胆外科，河南 郑州 450014；2 河南省人民医院心血管内科，河南 郑州 450014）

目的 分析垂体肿瘤转化基因（PTTG）和p27Kipl基因在原发性肝细胞性肝癌（HCC）中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组化S-P法检测48例HCC及癌旁肝癌组织中PTTG蛋白、p27Kipl蛋白的表达情况。结果 HCC、癌旁和正常肝组织的PTTG蛋白阳性表达率分别是70.8%（34/48）、91.7% （44/48），二者之间的差异有统计学意义（P＜0.05），且PTTG蛋白在癌旁中的表达明显高于在HCC中的表达（P＜0.05）；HCC、癌旁组织的p27kip1蛋白阳性表达率分别是20.8%（10/48） 83.3%（ 40/48），二者之间的差异有统计学意义（P＜0.05）。34例PTTG表达阳性组织中有10例见p27kip1表达阳性，而14例PTTG表达阴性组织中有9例见p27kip1阳性表达，二者比较差异有显著性意义（P＜0.05）。结论 PTTG和p27Kipl异常表达与HCC的发展密切相关，在HCC的发展过程中起重要的作用。

肝肿瘤；垂体肿瘤转化基因（PTTG）；p27Kipl基因；免疫组织化学

1 资料与方法

1.1 标本来源

收集河南省人民医院2006年12月至2013年6月手术患者经病理学检查证实为肝细胞癌标本48例，所有标本术前均未结受化疗、放疗，有完整病理学资料。男35例，女13例，年龄在28～80岁，平均62.5岁，18例有门脉癌栓，30例有完整包膜，18例包膜不完整或无包膜；小肝癌（≤5cm）28例，大肝癌（＞5cm）20例；术前肝内转移32例，无肝内转移16例。

1.2 主要试剂

兔抗人PTTG和鼠抗人p27kip1多克隆抗体，购自北京中杉金桥生物试剂有限公司。

1.3 实验方法

采用免疫组织化学链霉卵白素-生物素-辣根过氧化物酶复合物（streptavidin peroxidase conjugated method，SP）法检测PTTG、P27kip1蛋白表达，以试剂盒中已知阳性切片为阳性对照，以PBS液（pH=7.4）代替一抗为阴性对照。抗PTTG抗体稀释度为 1∶20，抗p27kip1抗体稀释度为1∶50，操作按试剂盒说明书要求步骤进行。

1.4 PTTG和P27kip1蛋白阳性表达的判定

用双盲法对染色结果进行评估，PTTG以肿瘤细胞胞质内出现棕色颗粒为阳性细胞，P27kip1以细胞核出现棕黄色颗粒为阳性细胞，分别在400倍、200倍光镜下至少观察5个视野，计数100个细胞中肿瘤阳性细胞＞10%定义为阳性表达，≤5%为阴性表达。

1.5 统计方法

计量数据表示为均数±标准差（ ±s）表示，采用χ2检验及相关分析。数据用 SPSS 11.0统计软件包进行处理。检验水准α=0.05。

2 结 果

2.1 PTTG蛋白在HCC 及癌旁肝组织中的表达

48例HCC癌组织PTTG蛋白阳性34例，阳性率70.8 %，癌旁组织中阳性44例，阳性率为91.7%，后者高于前者，差异有显著性（P＜0.05）。癌组织中阳性细胞呈弥漫性、小巢状或散在分布。在胞质内PTTG蛋白主要呈弥漫性全浆分布，有的呈包涵体状，透明细胞性肝癌细胞中分布于胞膜下。

2.2 p27kip1蛋白在HCC 及癌旁肝组织中的表达

p27kip1蛋白阳性表达在20.8%（10/48）的肝癌组织内见到，阳性表达颗粒主要位于细胞核，在同一组织标本中p27kip1表达呈均一性，且随着肿瘤恶性程度的增高，肝癌组织中p27kip1蛋白的表达明显降低，而癌旁组织内为83.3%（40/48），其表达显著高于肿瘤组织（P＜0.05）。

2.3 PTTG蛋白及P27kip1蛋白表达与肝癌患者临床病理学参数之间的关系

见表1。

2.4 PTTG蛋白及p27kip1蛋白表达在HCC中的相关性

表1 临床病理学参数与PTTG蛋白及P27kip1蛋白表达间的关系

34例PTTG表达阳性组织中有10例见P27kip1表达阳性（29.4%），而14例PTTG表达阴性组织中有9例见P27kip1阳性表达（64.3%），二者比较差异有显著性意义（P＜0.05）。 经四格表pearson等级相关分析，肝癌组织中二者表达的列联系数r=-0.308，说明二者有明显负相关性（P＜0.05）。

3 讨 论

1997年，Lin Pei等[1]利用差异显示PCR、Northern Blot、DNA测序等分子生物学技术分离出垂体瘤转化基因（PTTG），PTTG是一种强有力的肿瘤转化基因，在多种肿瘤细胞及肿瘤组织中均有高表达。可通过多种机制参与肿瘤的形成与发展: 阻止姐妹染色体分离；诱导细胞转化；促进其他原癌基因及促瘤因子的表达；促进b-FGF 参与的肿瘤血管生成等[2-6]。金中元等[6]利用免疫组织化学SP法和原位杂交技术检测61例原发性肝细胞癌中PTTGG蛋白和mRNA的表达。结果发现，原发性肝细胞癌组织中阳性率为70.8%，明显低于癌旁组织中阳性表达率91.7%，与原发性肝细胞癌的病理分级无关。另外 PTTG1 参与凋亡的调控并诱导染色体非整倍体形成等[6]。本实验中PTTG 蛋白在HCC中阳性表达率为72.0%，显著高于正常对照组（P＜0.01）。与患者性别、年龄、肿块直径及是否伴门静脉癌栓无关，与是否伴肝内转移有关。高频率过度表达表明PTTG 蛋白在人肝组织癌变过程中可能起重要作用，这与金中元等研究结果相符[6]。

p27kip1是细胞周期负性调控因子，主要抑制Cy-clinE-CDK2和cyclind-CDK4等G1期激酶复合物，阻滞细胞于G1期，防止细胞过度增殖并与细胞凋亡有着密切的关系，是公认的抑癌基因[7]。Wang等[8]研究发现p27kipl通过磷酸化Statl抑制Ras系统信号转导而抑制CDK，进而抑制细胞从G1期到S期的转变。p27kip1丝氨酸10的磷酸化还与细胞运动相关，Wang等[9]体外研究证明p27ser10的磷酸化在恶性胶质瘤细胞的迁移中起重要作用。Katayose 等[10]报道，p27kip1的过度表达可以诱导细胞凋亡，认为p27Kipl可能在HCC发生早期起负调控作用。我们的结果显示，p27Kipl在肝癌组织中的阳性表达率为20.8%，而在癌旁组织中的阳性表达率为80%，二者比较差异有统计学意义（P＜0.05）。与患者性别及年龄无关，而与肿块直径、门静脉癌栓及是否伴肝内转移有关。可以说明，p27Kipl蛋白低表达，对肝癌细胞的负调控作用减弱，促进肿瘤细胞生长。

PTTG和p27Kipl在肿瘤的发生、发展、浸润和转移等有密切关系，并且在肿瘤的增值和凋亡机制中起着关键作用。在人类多种恶性肿瘤中均可以检测到PTTG和p27Kipl蛋白的异常表达，PTTG和p27Kipl的异常表达可能共同促进肿瘤的发生和进展。但是PTTG和 p27Kipl在HCC组织中表达的研究相对较少。本研究的结果显示：经配对四格表Spearsman等级相关分析，肝癌组织中二者表达的列联系数r=-0.308，说明PTTG和p27Kipl在肝癌中的表达有明显负相关性（P＜0.05），推测二者可能共同参与肝癌的发生发展，联合检测PTTG和p27Kipl蛋白的表达对于预测HCC的恶性潜能、判断预后和为肝癌的治疗有望提供新的靶点，有一定的临床价值和现实意义。

参考译文

[1] Hershko D.Oncogenic Properties and Prognostic implications of the ubiquitin ligase Skp2 in cancer[J].cancer,2008,112(7):1415-1424.

[2] Ish ikawa H,Heaney AP,Yu R,et al.Hum an p itu itary tum or tran sform ing gene induces angiogensis[J].J Clin Endocrinol Metab,2 001,86(14):867-874.

[3] Genkai N,Homma J,Sano M,et al.Increased expression of pituitary tumor-transforming gene (PTTG)-1 is correlated with poor prognosis in glioma patients[J].Oncol Rep,2006,15(6): 1569-1574.

[4] FujiiT,NomotoS,KoshikawaK,et al.Overexpression of pituitary tumor transforming gene 1 in HCC is associated forming gene 1 in HCC is associated with angiogenesis and poor prognosis[J]. Hepatology,2006,43(6): 1267-1275.

[5] Kim DS,Franklyn JA,Smith VE,et al.Securin induces genetic instability in colorectal cancer by inhibiting double-stranded DNA repair activity[J].Carcinogenesis,2007,28(3):749-759.

[6] 金中元,郑长黎,郑晖.PTTG 蛋白和c-m yc 蛋白在原发性肝细胞癌中的表达[J].中国现代医学杂志,2002,17(12):11-13.

[7] Solbach C,Roller M,Fellbaum C,et al.PTTG mRNA expression in primary breast cancer: a prognostic marker for lymph node invasion and tumor recurrence[J].Breast,2004,13(1): 80-81.

[8] Wang S,Raven JF,Durbin JE,et a1.Statl phosphorylation determines Ras oncogenicity by regulating p27kip1[J]. PlosOne,2008,3(10):3476.

[9] Wang D,He F,Zhang L,et al.The role of p27 (Kip1) phosphorylation at serine 10 in the migration of malignant glioma cells in vitro [J].Neoplasma,2011,58(1):65-73.

[10] Katayose Y,Kim M,Rakkar AN,et a1.Promoting apoptosis: A novel activity associated with the cyclin-dependent kinase inhibitor p27 [J].Cancer Res,1997,57(24):5441-5445.

Expression of PTTG and p27Kipl Protein in Hepatocellular Carcinoma and Its Significance

CAI Jian-ping1, Zhou Xiang-hong2
(1 Department of Hepatobiliary Surgery, Henan Provincial People’s Hospital, Zhengzhou 451000, China; 2 Department of Cardiology, Henan Provincial People’s Hospital, Zhengzhou 451000, China)

Objective To investihate the expression of PTTG and p27Kipl protein in primary hepatocellular carcinoma(HCC). Methods The expression of PTTG and Survivin in 48 cases with HCC and their neighboring noncancerous tissues were obtained. Immunohistochemistry was used to detect protein expressions of PTTG and P27kip1.Results The positive rate of PTTG in cancer tissues and their neighboring noncancerous tissues was 70.8%(34/48),91.7 %(44/48) respectively, with significant difference (P＜0.05). The expression of PTTG in cirrhosis tissue was higher than that in cancer tissue(P＜0.05). The positive rate of p27kip1 in cancer tissue and their neighboring noncancerous tissues was20.8%( 10/48),83.3%(40/48)respectively,with significant difference among them (P＜0.05). The expression of p27kip1 in their neighboring noncancerous tissues was higher than that in cancer tissue and normal tissue(P＜0.05). Conclusion The malexpression of PTTG and p27kip1 is closely associated with the development of HCC.

Liver neoplasms; PTTG; p27Kipl; Immunhistochemistry

R735.7

B

1671-8194（2013）29-0031-02

*通讯作者:E-mail: zhouxianghongsuc@163.com