HPLC法测定缩泉胶囊中尿囊素的含量

李厚洋蔡其辉田宏现吴开慧

（1 常德市第一人民医院药剂科，湖南 常德 415000；2 吉首大学生物资源与环境科学学院，湖南 吉首 416000）

HPLC法测定缩泉胶囊中尿囊素的含量

李厚洋1蔡其辉2田宏现2吴开慧1

（1 常德市第一人民医院药剂科，湖南 常德 415000；2 吉首大学生物资源与环境科学学院，湖南 吉首 416000）

目的 建立缩泉胶囊中尿囊素的含量测定。方法 采用Shimadzu-pack-ODS（250×4.6mm）；以乙腈-0.01mol/L磷酸二氢钾（10∶90）为流动相；流速为1.0mL/min；柱温25℃；检测波长为224nm。结果 尿囊素的线性范围在25.0～125.0μg/mL；r=0.9998；平均回收率为98.84%，RSD为1.13%。结论 本法简便，准确，可靠，可用于控制缩泉胶囊的质量。

缩泉胶囊；尿囊素；高效液相色谱法

山药（Dioscorea opposeta Thunb）为薯蓣科植物薯蓣的干燥根茎，其功能主治为补脾养胃，生津益肺，补肾涩精。用于脾虚食少，久泻不止，肺虚遗精，带下，尿频，虚热消渴[1,2]。其主要化学成分含有皂苷、尿囊素等多种活性成分[3,4]。而尿囊素具有抗刺激物，麻醉镇痛，促进上皮生长，消炎抑菌等作用[5]；由山药、益智仁、乌药3味药组成的复方制剂缩泉胶囊，具有补肾缩尿。用于肾虚之小便频有频数，夜卧遗尿[6,7]，因此，本实验建立了HPLC法测定缩泉胶囊中尿囊素的含量，能更好地对该制剂进行质量控制，确保产品疗效。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Shimadzu LC-10AT泵（日本岛津公司），Shimadzu SPD-10A紫外检测器（日本岛津公司）；Rheodyne 7125六通进样阀（loop=20μL）（日本岛津公司）；Shimadzu Pack-ODS柱，250×4.6mm（日本岛津公司）；N3000色谱工作站+forWindows2000（浙江大学智能研究所）；FA-2004电子分析天平（上海天平仪器厂）；KQ-250E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药

尿囊素对照品（中国药品生物制品检定所，111501-200202）。缩泉胶囊（湖南汉森制药有限公司生产，规格：每粒装0.3g，本医院药剂科提供）。乙腈（湖南师大化学试剂厂，色谱纯），乙醇（湖南师大化学试剂厂，分析纯）；磷酸二氢钾（湖南师大化学试剂厂，分析纯）；水为二次重蒸馏水（自制）。

2 方法与结果

图1 尿囊素对照品（A）、空白（B）、缩泉胶囊（C）的HPLC图谱

2.1 色谱条件

色谱柱：Shimadzu-Pack-ODS柱（250×4.6mm），流动相：乙腈-0.01mol/L磷酸二氢钾（10∶90）为流动相；流速为1.0mL/min；柱温25℃；检测波长为224nm；进样量：20μL；尿囊素在此色谱条件下的保留时间约为9min。色谱图见图1：A和C。对照品溶液的配制：取尿囊素对照品适量，放入五氧化二磷减压干燥器中干燥36h，精密称定，加入50%乙醇制成每1mL含0.50mg的溶液，即得。

2.2 供试品溶液的制备

取装量差异项下的内容，精密称定本品约0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加50%乙醇25mL，密塞，轻轻振摇，称定重量，超声处理（100W，50kHz）3次，每次10min，放冷后，再超声，取出，放冷，再称定重量，用50%的乙醇补足减失的重量，充分振摇，滤过，取续滤液，即得。作为供试品溶液。

3.注重突破节约资源和环境保护方面的技术瓶颈。加大投资力度，由政府直接引进或者制定政策扶持企业引进节能减排先进技术，如能源领域的节能减排、燃料电池、太阳能、风能、生物质能等新能源技术，如生活方面的节水和资源综合利用的技术，如建筑方面建筑节能、绿色照明、节能监测和技术服务体系建设等，积极引导支持企业和全社会提高能源资源利用效率，减少排放。根据东营本地的资源环境、产业体系、污染状况，有针对性地资助或者联合开发本地需求的节能环保技术。如针对石油石化、橡胶轮胎产业的能量梯级利用技术、区域热电联产、余热余压利用、废料回收利用等技术，如符合东营需要的盐碱地改造、耐盐植物选育推广等技术。

2.3 空白试验

按本制剂质量标准和处方比例，制备缺味（山药）中药的阴性样品制剂，按2.3项下供试品溶液操作方法进行样品处理，所得空白试验。精密吸取20μL注入液相色谱仪，测定分析，结果显示无干扰。色谱图见图1 B。

2.4 线性关系考察

精密量取对照品溶液，各0.5mL，1.0mL，1.5mL，2.0mL，2.5mL，3.0mL置10mL量瓶中，加50%乙醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取20μL注入液相色谱仪，以峰面积（Y）为纵坐标，尿囊素浓度（X）为横坐标，进行线性回归，得回归方程Y=2845.2X+154.8，r=0.9998。结果表明尿囊素在25～150.0μg/mL，线性关系良好。

2.5 精密度试验

精密吸取对照品溶液（80μg/mL），精密吸取20μL注入色谱仪，重复进样5次，计算尿囊素峰面积RSD分别为1.63%，说明仪器性能良好。

2.6 稳定性试验

取同一批号样品溶液（批号为080201，含量为0.43mg/粒），在常温放置12h，每2h进样一次，共测定6次，每次20μL，结果尿囊素含量RSD为2.89%，表明样品溶液在12h内稳定性良好。

取同一批号样品（批号为050101），量取样品6份，按2.3项下样品溶液的制备方法，制备样品，平行测定，结果：尿囊素的含量平均值为0.33mg/mL，RSD为0.92%（n=6），说明方法重现性较为良好。

2.8 回收率试验

取装量差异下的缩泉胶囊（批号为080201，含量为0.43mg/粒）6份，每份0.5g，精密称定，再分别加入尿囊素对照品溶液（0.05mg/ mL）5mL，按供试品溶液制备方法操作，制备加样回收试验样，精密吸取20μL注入液相色谱仪，测定分析，计算回收率，结果平均回收率为98.84%，RSD=1.13%（n=6）。见表1。

2.9 样品测定

取不同批号的缩泉胶囊，按2.3项下供试品溶液方法制备，制备样品，分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各20μL，注入色谱仪，按外标法计算含量，结果见表2。

表1 样品加标回收率测定结果（n=6）

表2 缩泉胶囊中尿囊素含量（n=5）

2.10 色谱条件的选择

本试验，对流动相乙腈和磷酸二氢钾水溶液，考察过0.005mol/L、0.01mol/L、0.05mol/L、0.1mol/L等比例磷酸二氢钾水溶液；最后经试验确定，以0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液的流动相，获得较好的峰形，呈正态分布，分离度＞1.5。

3 结 论

3.1 样品处理

本实验采用超声处理方式，因为尿囊素对热不稳定[7]，加热回流对产品的质量的影响，故本试验采用超声处理方法。

3.2 提取次数的考察

3.3 采用50%乙醇为萃取溶媒，对萃取不同的次数所得尿囊素含量进行了考察，结果萃取3次后含量不再变化，故本实验选择萃取3次。

3.4 本实验采用HPLC法测定缩泉胶囊中尿囊素的含量，其提取方法简便，分析快速，较薄层扫描相比，影响系数少，精密度高，重现性好，且空白无干扰，可用于缩泉胶囊的质量。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社,2005:27.

[2] 赵宏,谢晓玲,万全志,等.山药的化学成分及药理研究进展[J].今日药学,2009,19(3):49-52 .

[3] 姜芳婷,李明静,史会齐.山药的研究[J].河南大学学报,2004,23 (3):4.

[4] 李志浩,李鹏,孙建新,等.HPLC法测定小儿健脾颗粒中尿囊素的含量[J].中国药师,2010,1(13):55-56.

[5] 周心如,曹京宜.山药中尿囊素的高效液相色谱分析方法研究[J].色谱,1996,14(2):129-131.

[6] 国家药品监督管理局标准(试行)WS3-654(Z-130)-2003(Z)[S]. 2003.

[7] 张军,秦雪梅,薛黎明,等.HPLC-ELSD法测定山药中尿囊素含量的研究[J].药物分析杂志,2008,28(10):1648.

HPLC Determination of Allantoin in Suoquan Capsules

LI Hou-yang1, CAI Qi-hui2, TIAN Hong-xian2, WU Kai-hui1
(1 Department of Pharmacy, First People's Hospital of the Changde, Changde 41500, China; 2 Biological Resources and Environment Science College, Jishou University, Jishou 416000, China)

Objective HPLC methods were established for the determination allantoin of Suoquan capsules. Methods The separation was performed on a Shimadzu-pack-ODS（250×4.6mm）;The mobile phase was composed of methanol-water-diethlamine（10∶90）;The flowrate was 1.0mL/min;The detection wavelenth was 224nm. Results There is a good linear relationship within the rang of 25.0～125.0μg/mL（r=0.9998）;The average recovery was 98.84%; RSD=1.13%. Conclusions The method is convenient accurate，reliable and suitable for the quality control of Suoquan capsules.

Suoquan; Capsules; Allantoin; HPLC

R914

B

1671-8194（2013）27-0020-02