肺动脉血栓栓塞与凝血-纤溶因子关系的临床研究※

黄永存 于 玲 王艳苹 张 敏 孙 华 宋俊兰 邢 建 刘 彤

肺动脉血栓栓塞与凝血-纤溶因子关系的临床研究※

黄永存1于 玲2王艳苹1张 敏1孙 华1宋俊兰1邢 建1刘 彤1

目的探讨肺动脉血栓栓塞患者与组织型纤溶酶原激活物（t-PA）和组织型纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）血浆水平的关系。方法选取2008年6月～2011年6月间在我院进行住院治疗的53例肺动脉血栓栓塞患者，作为观察组，另外选择同期健康体检者57例作为对照组。通过聚合链酶式反应（PCR）来检测肺动脉血栓栓塞患者基因型及其多态性；并通过酶联免疫吸附法进行t-PA和PAI-1血浆水平的检测，比较两组患者的凝血-纤溶因子水平。结果通过PCR检测发现PTE患者主要有三种PAI-1基因型，主要以4G/4G和4G/5G基因型为主，并且该基因型PAI-1水平显著高于5G/5G基因型（P＜0.05）；ELISA法检测显示观察组t-PA水平（53.14±18.24）μg/L显著低于对照组的（70.45 ±20.08）μg/L，（t=4.7207，P＜0.01）；而PAI-1水平（58.74±18.65）μg/L显著高于对照组（48.62±15.60）μg/L（t=3.0948，P＜0.05）。结论肺动脉血栓栓塞患者与健康者相比，显然具备较低的纤溶状态。

肺动脉血栓栓塞；组织型纤溶酶原激活物（t-PA）；组织型纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）；聚合链酶式反应（PCR）

肺动脉血栓栓塞（PTE）是一种具有高发病率、高误诊率和漏诊率、高病死率的常见疾病。组织型纤溶酶原激活物（Tissue plasminogen activator,t-PA）以及它的抑制物-1（Plasminogen activator inhibitor-1, PAI-1）对患者机体纤溶系统活性具有重要的调节功能。PAI-1血浆水平增加往往与人体心脏、血管等疾病严重程度相关[1-2]。本文对2008年6月～2011年6月间在我院进行住院治疗的53例肺动脉血栓患者临床资料进行研究，探讨肺动脉血栓栓塞患者与组织型纤溶酶原激活物（t-PA）和组织型纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）血浆水平的关系。具体报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2008年6月～2011年6月间在我院进行住院治疗的53例肺动脉血栓患者，作为观察组，所有患者均符合中华医学会呼吸病学分会制定的PTE患者诊断标准[3]，其中男30例，女23例，患者年龄在28～73岁，平均年龄为（52.9±8.6）岁，其中合并深静脉血栓患者为32例。另外选择同期健康体检者57例作为对照组，男33例，女24例，年龄在29～71岁，平均年龄（53.6±9.7）岁。对照组均无静脉曲张、近期手术、静脉置管以及肺动脉血栓家族史等。两组患者在年龄、性别等方面均无显著差异，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 DNA的提取和聚合链酶式反应（Polymerase chain reaction, PCR）抽取53例肺动脉血栓患者5ml外周静脉血，枸橼酸钠抗凝处理，4℃条件下3000r/ min冷冻离心12min，分离血细胞和血浆（80℃）保存备用。使用酚-氯仿抽提技术从外周血白细胞中提取基因组DNA。使用PCR仪（TC-98/T/Hca，Bioer Technology）进行PCR，反应体系中所涉及的4条引物为：4G引物：5'-GTCTGGACACGTGGGGA-3'；5G引物：5'-GT-CTGGACACGTGGGGG-3'；上游引物：5'-AAGCTTTTAACCATGGTAACCCCTGGT-3'；下游引物：5'-TGCAGCCAGCCACGTGATTGTCTA G-3'。

PCR反应过程为，首先进行94℃条件下预变性5min，进行94℃变性50s，58℃退火50s，72℃延伸1min，连续进行32个循环，进行72℃延伸10min后4℃水浴1h。接着进行琼脂糖凝胶电泳（质量分数为1%琼脂糖，体积分数0.1%的溴化乙锭）进行恒压（80～120V）条件下电泳40～60min。使用紫外灯进行DNA条带观察，确定纤溶酶原激活物抑制物-1基因型。

1.2.2 酶联免疫吸附法（ELISA）进行t-PA、PAI-1测定将两组患者外周静脉血进行上述低温离心分离的白细胞和血浆细胞，采用ELISA试剂盒进行t-PA、PAI-1的含量水平测定。

1.3 统计学方法所有数据采用SPSS 18.0软件统计包进行分析，计量资料以计量资料以均数±标准差表示，计量资料的组间比较进行t检验，在P＜0.05时，差异显著具有统计学意义。

2 结果

2.1 PTE患者PAI-1基因型分布通过PCR检测发现PTE患者主要有三种PAI-1基因型，其中4G/4G患者26例，占总数的（49.06%），4G/5G基因型为24例，占总数的（45.28%），5G/5G基因型为3例，占总数的（5.66%）。

2.2 两组患者t-PA和PAI-1血浆水平比较经过ELISA法检测两组患者t-PA和PAI-1血浆水平，其中观察组t-PA水平（53.14±18.24）μg/L显著低于对照组，（t=4.7207，P＜0.01）；而PAI-1水平（58.74 ±18.65）μg/L显著高于对照组（t=3.0948，P＜0.05），具体数据详见表1。

表1 两组患者t-PA和PAI-1血浆水平比较[μg/L,(±s)]

表1 两组患者t-PA和PAI-1血浆水平比较[μg/L,(±s)]

注：#与*分别代表观察组相交于对照组（P＜0.01）和（P＜0.05）

组别 n t-PA PAI-1观察组 53 53.14±18.24#58.74±18.65*对照组 57 70.45±20.08 48.62±15.60

2.3PTE患者PAI-1不同基因型与PAI-1水平关系4G/4G患者26例，PAI-1水平为（64.78±19.78）μg/L；4G/5G基因型为24例，PAI-1水平为（54.75±15.72）μg/L；5G/5G基因型为3例，PAI-1水平为（47.68 ±13.25）μg/L；4G/4G和4G/5G基因型PAI-1水平显著高于5G/5G基因型（P＜0.05）。

3 讨论

PET为来自静脉系统或右心的血栓阻塞肺动脉或其分支所致的疾病，肺动脉血栓栓塞的临床以及病理特征主要表现为肺循环和呼吸功能障碍。肺动脉血栓栓塞患者的栓塞主要有单一部位和多部位的形式出现。临床病理检查结果显示，单一部位栓塞相对较少，取而代之的以多部位、双侧性的血栓栓塞为主要形式[4]。肺动脉右侧以及下肺叶比较容易发生栓塞，栓塞发生后得不到及时治疗可局部继发形成血栓，最终导致疾病的发生。肺动脉及其分支在遭受栓子阻塞情况上升到一定程度后，产生的机械阻塞作用联合神经体液因素、低氧情况致使患者肺动脉收缩，肺循环阻力以及肺动脉高压提高；右心室后负荷增高、右心室壁张力增高严重时导致急性肺源性心脏病形成，右心室扩大则会导致右心功能不全，最终因为回心血量不足形成静脉系统瘀血；右心扩大致室间隔左移，使左心室功能受损，导致心排出量下降，进而可引起体循环低血压或休克[5]。

神经-体液及循环内分泌激素在调节PTE的病理生理过程中起到非常重要的作用，组织型纤溶酶原激活物（t-PA）就是一种纤溶酶原生理性激活剂[6]，在血栓纤溶过程中起到关键性的启动作用。而t-PA的作用要受到t-PA抑制物PAI的控制与调节，PAI活性较高或者含量过高则是主要导致血栓形成的原因之一，若出现活性或水平过低则容易导致出血。PAI-1则是PAI中最重要的一种t-PA抑制物，PAI-1对t-PA抑制作用约为整个血浆中PAI抑制作用的六成[7]。在对PAI-1血浆水平与心、肺疾病的相关关系研究发现，PAI-1的血浆水平增加与很多心、肺疾病严重程度相关，并且发现PAI-1也可以帮助PTE的诊断[8]。同时有研究证实PTE患者合并DVT存在纤溶活性失调，PAI-1水平性对于正常水平出现升高[9]。文中观察组53例肺动脉血栓患者中，32例并深静脉血栓，观察组t-PA水平（53.14±18.24）μg/L显著低于对照组的（70.45±20.08）μg/L，（t=4.7207，P＜0.01）；而PAI-1水平（58.74±18.65）μg/L显著高于对照组48.62±15.60）μg/L（t=3.0948，P＜0.05）。在对肺动脉血栓患者PAI-1基因型研究发现，患者主要以4G/4G基因型、4G/5G基因型为主。同时发现4G/4G和4G/5G基因型PAI-1水平显著高于5G/5G基因型（P＜0.05）。

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R563.5

A

1673-5846(2013)04-0308-03

1牡丹江医学院红旗医院一分院检验科，黑龙江牡丹江 157000

2牡丹江市第二人民医院脑科医院，黑龙江牡丹江 157000

黑龙江省教育厅科学技术研究项目，项目编号：12521587