枣庄市市中区奶牛结核病流行病学调查

陈 萍 孟 巍 许瑞利 张忠花 （山东省枣庄市市中区畜牧兽医局 277100）

刘 华 （山东省枣庄市市中区永安乡政府）

枣庄市市中区奶牛结核病流行病学调查

陈 萍 孟 巍 许瑞利 张忠花 （山东省枣庄市市中区畜牧兽医局 277100）

刘 华 （山东省枣庄市市中区永安乡政府）

为全面了解枣庄市市中区奶牛结核病的发生现状，采用发放调查问卷和进行牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验相结合的方式，对市中区6个乡镇奶牛进行结核病流行情况调查，共发放调查问卷41份，检测奶牛333头。调查结果显示：被调查的养殖户有48.78%对结核病有所了解，有51.22%不了解甚至不知道；本次调查检测的所有奶牛牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验均为阴性；但市中区目前存在牛结核病传入风险。

牛结核病是由牛分枝杆菌(Mycobacterium.bovis)引起的一种人兽共患的慢性消耗性传染病[1]，该病因其易传染，一年四季均可发生，呈世界性流行，且能通过奶制品传染给人和犊牛，危害严重，被世界动物卫生组织(OI E)定为B类动物传染病，我国将其列为二类动物疫病[2]。

目前，国内外用于诊断牛结核病的检测方法大体上可分为三类：第一类是细菌学检查法，如涂片染色镜检、细菌培养等。涂片染色操作方法简便，是较为普遍应用于发现和防治结核病传染源的重要诊断依据。但由于此法检出的细菌只能说明有抗酸杆菌, 而不能准确地鉴定出结核分枝杆菌和非典型分枝杆菌，因此缺乏特异性[3]；结核菌培养法，由于结核生长缓慢，一般需要10～30d才能看到菌落[4]且有10%～20%的病例结核菌培养失败[5-6]，种种条件影响，致使结核菌培养率较难提高，在临床诊断中不易展开推广。第二类是免疫学方法，如皮内变态反应、胶体金和ELISA等方法。这些方法已经被广泛应用于结核病的临床诊断。胶体金和ELISA检测虽然简单易行，但目前试剂价格昂贵，大规模实施成本过高。第三类是分子生物学方法。分子生物学方法具有敏感、特异等特点，但由于需要特殊的仪器设备，技术相对复杂，对实验室条件和操作人员的要求比较高，只适用于实验室研究，还不能够用于基层的推广应用。迄今为止，皮内变态反应诊断仍被世界各国广泛使用，是世界动物卫生组织推荐的诊断牛结核病的唯一方法[7]。

1 调查方法

发放奶牛结核病流行病学调查问卷41份，涉及全区6个乡镇共计41户奶牛养殖场户。进行PPD皮内变态反应试验。

2 结果与分析

本次奶牛结核病流行病学调查问卷结果汇总见表1。

表1 牛结核病流行病学调查问卷结果汇总

由表1可知，本次调查的所有奶牛养殖场户均有3年以上的养殖经验，但只有48.78%对结核病有所了解，其余51.22%不了解甚至不知道。有19.51%发现过自家奶牛出现消瘦、咳嗽的症状。在本次调查中，有63.41%是从外地引购奶牛，其中60.98%购买的奶牛有检疫证。有31.71%是雇人挤奶。92.68%养殖场户对饲养场进行定期消毒，7.32%养殖场户从不消毒。仅有36.58%养殖场户进行过实验室检测。调查中70.73%养殖场户愿意配合并接受相关部门的检测。

2.1 牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验

2.1.1 试验材料 结核菌素：哈药集团生物疫苗有限公司生产，批准文号兽药生字(2006)080078024。游标卡尺(精度为0.02mm)、毛剪、酒精棉、1ml注射器、工作服、一次性帽子、一次性口罩、胶靴、记录表等。实验牛群：市中区所有奶牛场户100%进行抽样，根据场户的规模大小计算抽样数量。具体抽样数量见表2。

表2 市中区奶牛场户抽样数量 (头)

2.1.2 试验方法 （1）操作方法：注射部位及术前处理：将牛只编号后在颈侧中部上1/3处剪毛(或提前1d剃毛)，3个月以内的犊牛，也可在肩胛部进行，直径约10cm。用卡尺测量术部中央皮皱厚度，作好记录。注意术部应无明显的病变。注射剂量：不论大小牛只，一律皮内注射0.1ml(含2000IU)。即将牛型结核分枝杆菌PPD稀释成每毫升含2万IU后，皮内注射0.1ml。冻干PPD稀释后当天用完。注射方法：先以75%酒精消毒术部，然后皮内注射定量的牛型结核分枝杆菌PPD，注射后局部应出现小疱，如对注射有疑问时，应另选15cm以外的部位或对侧重做。注射次数和观察反应：皮内注射后经72h判定，仔细观察局部有无热痛、肿胀等炎性反应，并以卡尺测量皮皱厚度，作好详细记录。对疑似反应牛应立即在另一侧以同一批PPD同一剂量进行第二回皮内注射，再经72h观察反应结果。对 阴性牛和疑似反应牛，于注射后96h和120h再分别观察1次，以防个别牛出现较晚的迟发型变态反应。②结果判定：阳性反应：局部有明显的炎性反应，皮厚差大于或等于4.0mm；疑似反应：局部炎性反应不明显，皮厚差大于或等于2.0mm、小于4.0mm；阴性反应：无炎性反应。皮厚差在2.0mm以下。但只要有一定炎性肿胀，即使皮厚差在2.mm以下仍应判为可疑。凡判定为疑似反应的牛，于第一次检疫60d后进行复检，其结果仍为疑似反应时，经60d再复检，如仍为疑似反应应判为阳性。

2.2 奶牛结核病初检及可疑病例复检结果

见表3。

表3 奶牛结核病初检及可疑病例复检结果 (头)

从表3可以看出，对于初检结果可疑的5头奶牛，间隔60d做复查，结果5头均判定为阴性。根据GB/T18645-2002动物结核病诊断技术相关判定标准可判定，最终对可疑牛只的复查结果为阴性。

2.2.3 奶牛结核病调查统计结果

见表4。

表4 奶牛结核病调查统计结果 (户、头、%)

从表4可以看出，本次检测的全区6个乡镇41户333头奶牛，未出现结核阳性病例。

3 讨论

（1）通过本次发放奶牛结核病调查问卷发现，奶牛养殖场户对结核病防治知识了解少，自我防护能力差，被调查者中，仅有48.78%的养殖户听说过该病，多数不了解结核病相关防治知识，必须提高养殖场户对布解结核病危害的认识，加大结核防治知识的宣传力度，使养殖场户具备自我防范结核病的自觉性。（2）本次检测的所有奶牛牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验均为阴性，但从外地购买奶牛、购买奶牛无检疫证以及雇人挤奶，这些都使市中区存在结核病传入风险，下一步要加强调入管理，防止疫病传入，严格执行跨省调入动物审批制度，坚决杜绝从疫区调入奶牛。调入的奶牛必须要经调出地动物卫生监督机构检测合格，调到本地后，要采取完善的隔离措施，隔离饲养45d后方可混群饲养；要加强检疫督查，对牲畜交易市场、农贸市场加大检疫督查力度，严禁未经检疫牲畜及产品进入市场，将传入风险降至最低。（3）接受调查的养殖场户中，有少部分场户从不消毒，下一步要监督健全市中区防疫制度，严格卫生消毒，科学防控。（4）市中区在结核病在监测等防控方面还存在不足，未来要坚持定期检测。

[1] Ahmed N,Mohanty A K,Mukhopadhyay U, et al.PCR-based rapid detection of Mycobacterium tuberculosis in blood from immunocompetent patients with pulmonary tuberculosis[J]. Journal of Clinical Microbiology, 1998, 36(10)∶ 3094-3095.

[2] 王忠仁. 牛结核病与人结核病的相互关系[J]. 中国防痨杂志，2005, 27(2)∶ 123-125.

[3] 王云霞, 于三科, 翟军军. 牛结核病的现状及诊断研究进展[J]. 动物医学进展, 2006, 27(6)∶ 38-41.

[4] 陆承平. 兽医微生物学(第3版)[M]. 北京∶ 中国农业出版社, 2001.

[5] 何萍, 李旭东. 结核杆菌的检验方法进展[J]. 中华现代临床医药杂志, 2004, 5(4)∶ 79-80.

[6] LaBombardi V J. Comparison of the ESP and BACTEC systems for testing susceptibilities of Mycobacterium tuber culosis complex isolates to pyrazinamide[J]. J Clin Microbiol,2002,40(6)∶2238-2239.

[7] 李金岭, 郭宏军, 王丽艳等. 国内外牛结核病的防制现状及检测手段[J]. 兽医导刊, 2007, 124(12)∶ 18.

S858.23

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1007-1733(2013)10-0073-02

2013–07–17）