妊娠期肝内胆汁淤积症患者胎盘组织中HO-1的表达变化及意义

李红霞，刘伯锋，姚珍薇，邵 勇

(1延安大学附属医院，陕西延安716000;2延安大学医学院;3重庆医科大学第一附属医院)

妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)是妊娠期特有的疾病，可导致早产、胎儿窘迫及突然胎死宫内，使围产儿及新生儿病死率增高，但ICP发病机制至今仍未完全明了。血红素氧化酶(HO)是进化上高度保守的一族微粒体酶，在调节机体铁离子稳定、抗氧化防御机制中有重要作用。HO有三种同工酶，HO-1为诱导型，其与妊娠期高血压疾病和胎儿宫内发育迟缓的关系屡有报道［1，2］，但 HO-1与 ICP 关系的研究报道较少。2010年6月～2011年12月，我们采用免疫组织化学及图像分析的方法检测了HO-1在不同程度ICP胎盘组织中的表达，旨在为进一步探讨ICP的病因及临床防治提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料 60例ICP患者(ICP组)，年龄(27.53±2.43)岁。均为初产妇，单胎，胎次(2.59±1.29)次，孕周(37.24±1.48)周。均符合《中华妇产科学》［3］ICP诊断标准，其中临床分度为轻度(胆酸20～50 μmol/L，ALT 50～100 U，AST 50～100 U，3 项指标只要有两项达到即符合标准)、中度(胆酸50～100 μmol/L，ALT 101～150 U，AST 101～150 U，3项指标只要有两项达到即符合标准)、重度(胆酸＞100 μmol/L，ALT＞150 U，AST＞150 U，3项指标只要有两项达到即符合标准)各20例。另选择30例晚期妊娠住院正常孕妇为对照组，年龄(26.23±2.01)岁，胎次(2.51±1.26)次，孕周(38.52±0.53)周。无妊娠期高血压疾病、慢性高血压、糖尿病及其他心血管等内科疾病，无皮肤瘙痒及黄疸，肝肾功能正常。

1.2 HO-1检测方法 胎盘娩出后迅速避开钙化点，取母体面中央区约1.0cm×1.0cm组织，置于4%多聚甲醛中固定、石蜡包埋。使用SP免疫组化法检测HO-1表达。一抗使用多克隆兔抗人血红素氧合酶-1(HO-1)抗体(Sigma公司)，稀释度为1∶100，二抗采用生物素标记的羊抗兔IgG(1∶100)(武汉博士德公司)。3，3-二氨基苯联胺染色，镜下检查细胞质或胞膜呈棕黄色或黄色颗粒为阳性。用图像分析仪对HO-1表达进行定量分析，以平均光密度(OD)值表示着色强度。OD值越大表示抗原含量越高。

1.3 统计学方法 采用SAS8.2统计软件，计量资料用±s表示，两两比较用q检验，P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

HO-1表达于胞质或胞膜，对照组整个绒毛实质均有着色，且为明显棕黄色(见图1)。重度ICP者仅部分滋养细胞着色，绒毛基质内的毛细血管内皮细胞着色少或无(见图2)，中度ICP者少数绒毛部分着色(见图3)，而轻度ICP者整个绒毛实质几乎均有着色，且为明显棕黄色(见图4)。对照组胎盘组织中HO-1表达的OD值为1.512 6±0.102 4，轻、中、重度ICP胎盘组织中HO-1表达的OD值分别为1.253 6±0.112 5、1.130 7±0.106 4、0.721 8±0.105 9，对照组与轻度 ICP者比较，P＜0.05，与中度ICP者比较，P＜0.01，轻、中度ICP与重度比较，P 均 ＜0.05。

图1 HO-1在正常胎盘组织中强阳性表达(SABC×400)

图2 HO-1在重度ICP妊娠胎盘组织中弱阳性表达(SABC×400)

图3 HO-1在中度ICP妊娠胎盘组织中阳性表达(SABC×400)

图4 HO-1在轻度ICP胎盘组织中阳性表达(SABC×400)

3 讨论

ICP是妊娠期特有的并发症，目前病因不明。有学者对 ICP 胎盘的形态学［4］、组织计量学［5］、血流动力学［6］及胎盘膜对氧的扩散能力［7］等进行研究，结果提示ICP胎盘改变可能仅引起胎盘氧储备力下降，胎盘自身因素可能并非ICP胎儿缺氧及死亡的确切原因。

近年研究提示HO-1具有抗炎、抗凋亡、抗增生效应，并且在相关病症如动脉硬化、脑缺血、器官移植排斥反应中具有细胞保护作用。因此，HO-1的生物学活性及其在临床众多疾病中的保护作用已受到诸多学者的关注。HO的抗氧化作用有最佳表达阈值［8］，HO适量表达，可以减少细胞死亡、蛋白质氧化及脂质过氧化，促进细胞增殖;表达量过高，则可能破坏细胞的完整性;表达降低，保护作用下降，细胞易受各种有害因素的侵袭。Makino等［9］认为HO-1降低血管张力的作用主要通过内源性一氧化碳(CO)的作用而实现。CO可以调节子宫胎盘血流动力学，参与滋养细胞分化与浸润、胎盘血管的功能调控，使循环血管保持一定程度的松弛，以适应妊娠的需要，保证子宫胎盘的血流灌注［10～12］。据报道，HO表达增多能增加胎盘血管和舒张，且与CO的生成量呈正相关［10］。国外学者研究表明，正常妊娠时大鼠和人类胎盘均有大量HO-1表达，且妊娠大鼠HO-1水平显著高于其非孕时肝和脾中的HO水平［11］。随妊娠进展需要较多的CO维持胎儿的发育。HO是血红素降解生成CO的限速酶，随妊娠进展HO需要量亦增加。HO-1蛋白主要定位于胎盘合体滋养细胞及绒毛间质细胞，胎盘干绒毛动脉血管周围基质亦有阳性表达［12］。本研究结果与此一致。HO-1的作用可能有利于滋养细胞从母血中摄取更多营养物质、调节绒毛血管的发育。研究发现，将人类HO-1基因转染至冠状动脉内皮细胞，能加速细胞的生长和血管生成［10］。对妊娠的大鼠转染HO-1基因后，鼠仔的体质量明显增加，且转染组胎盘组织中VEGF、IGF-1及其受体表达相应增加，提示HO-1及其催化产物不仅能直接增加胎儿胎盘循环血流，还能通过信号转导系统，加强胎盘生长因子的表达和激活，进一步改善胎盘循环和胎儿生长发育［2］。若HO的表达不足，可能与病理妊娠有关。

本实验发现HO-1在不同程度ICP患者胎盘组织中均有表达，并且随着ICP患者病情加重表达减弱。经图像分析重度ICP者HO-1表达水平比轻度和中度者明显下降。HO-1在ICP胎盘组织中表达下调，此可能是ICP的发病原因之一。Ahmed等［13］亦有类似的结果。提示妊娠期胎盘部位表达的HO-1可能作为内源性保护系统，保护胎盘组织免受氧化损伤及调控胎盘血管舒张，对正常妊娠维持起重要作用。故推测HO-1表达的异常是造成ICP及胎儿不良预后的原因之一，并且与疾病的严重程度有关。临床监测HO-1对于确定疾病分度、疗效观察及胎儿预后均有积极意义。

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