紫外分光光度法测定纳米药物递送系统中卡铂含量

刘岩?张英鸽　孙岚?姚红娟

摘 要 目的 建立纳米药物递送系统中卡铂含量的测定方法。方法 采用紫外分光光度法，起始波长：800nm，终止波长：190nm，扫描间隔：1.0nm，参比溶剂：5%葡萄糖注射液。测定卡铂/ 5%葡萄糖溶液的紫外吸收谱，对浓度与吸光度值间的线性关系、方法的精密度、重复性以及样品的稳定性、回收率进行考察，对C60 /卡铂纳米药物递送系统中的卡铂含量进行测定。结果 卡铂/ 5%葡萄糖溶液在229nm处出现最大吸收峰；在浓度范围0.64 ～64 ?g/mL内，吸光度值与卡铂浓度具有良好的线性关系，线性回归方程为A=0.0105C+0.0082（R2=0.9984），方法具有良好的精密度（n=6，RSD=0.13%）与重复性（n=6 RSD=1.69%），样品性质稳定，在室温避光条件下保存无显著降解（n=5，RSD=0.63%），日内回收率95.96%～96.93%，日间回收率95.68%～97.53%；C60 /卡铂纳米药物递送系统中，卡铂的含量为50.57%。结论 该方法可用于对纳米药物递送系统中卡铂的含量进行测定，具有良好的精密度与重复性，操作简单，有较好的实用性。

关键词 卡铂 紫外分光光度法 纳米药物递送系统

卡铂（Carboplatin，CBP）的化学名称为顺-二氨-1，1-环丁酸烷铂，是继顺铂之后的第二代铂类抗癌药物，对肺癌、卵巢癌等多种癌症具有良好的治疗效果[1～3]，相对于顺铂具有更小的肾、胃肠毒性[4，5]。

无机纳米材料C60作为抗癌药物载体具有载药量大、控释性好、组织靶向性强的特点，建立C60 /卡铂纳米药物递送系统可以增强卡铂对肿瘤组织的靶向性、提高肿瘤细胞外周与胞内的药物浓度，从而达到提高药效，降低毒副作用的目的。

目前，卡铂的检测方法主要采用高效液相色谱[6～8]和原子吸收光谱[9，10]，这2种方法具有良好的灵敏度和较强的专属性，但仪器价格昂贵、重现性欠佳。还有报道采用二阶导数光谱法[11]、络合分光光度法[12，13]、电感耦合等离子质谱/发射光谱法[14]对卡铂含量进行测定，但这些方法因样品预处理过程复杂、样品耗量大、检测时间长等问题而没有被广泛采用。纳米药物递送系统中卡铂含量的测定不仅要求方法灵敏、准确、专属，还要考虑C60本身的吸附性可能对仪器造成的损害和背景干扰问题。紫外分光光度法具有操作简单、迅速、经济的特点，准确性和重复性良好，吸附于比色池中的C60易于去除不会对仪器造成严重损害，同时C60在紫外光区内无强吸收，不会对卡铂的测定造成干扰。本文采用紫外分光光度计建立一种快速、准确的卡铂分析方法，以用于测定卡铂在纳米药物递送系统中的含量，为卡铂的药物开发打下基础。

1 仪器与试剂

UNIC2800紫外可见分光光度计（上海尤尼柯仪器有限公司），KQ-500DE数控超声清洗器（昆山超声仪器有限公司），AC-120S精密电子分析天平（德国Sartorius公司），卡铂（北京偶合科技有限公司，纯度≥98%），C60（濮阳市永新富勒烯科技有限公司，纯度99.9%），5%葡萄糖注射液（石家庄四药集团）。

2 实验方法与结果

2.1 检测条件

起始波长：800nm，终止波长：190nm，扫描间隔：1.0nm，参比溶剂：5%葡萄糖注射液。图1为卡铂在5%葡萄糖溶液中的紫外吸收光谱，最大吸收峰位置为229nm。

2.2 线性关系考察

精确称取卡铂样品2.8mg，用25mL 5%葡萄糖注射液定溶，超声10min使卡铂充分溶解，得到浓度为112?g/mL样品，作为母液备用。配制浓度为64?g/mL、32?g/mL、25.6?g/mL、19.2?g/mL、12.8?g/mL、6.4?g/mL、3.2?g/mL、1.6?g/mL、0.64?g/mL的待测样品，分别取上述样品3mL于比色池中，在229nm处测定吸光度值，每个样品平行测定3次。以样品浓度（C， ?g/mL）为横坐标，吸光度值（A）为纵坐标，做线性回归，得到标准曲线方程A=0.0105C+0.0082（R2=0.9984），结果表明在0.64～64 ?g/mL范围内，卡铂浓度与吸光度值呈良好的线性关系。

2.3精密度测定

精确称取1.2mg卡铂，用30mL 5%葡萄糖注射液溶解，配制浓度为40?g/mL的待测样品，在229nm处连续平行测定6次，记录吸光度值。结果：6次测定的吸光度值RSD=0.13%，表明方法精密度良好。

2.4 稳定性测定

取2.3中所配浓度为40?g/mL的溶液，室温条件下避光保存，每天测定一次，连续测定5天。5天检测结果的RSD=0.63%，说明在卡铂在5%葡萄糖溶液中室温条件下避光保存较为稳定，未出现显著降解。

2.5 重复性测定

重新称取6份质量为1.2mg的卡铂样品，如2.3所述方法配制浓度为40?g/mL的待测样，测定6份样品的吸光度值，分析批内变异情况。结果RSD=1.69%，表明方法的重复性良好。

2.6 回收率测定

精确称取卡铂2.0mg，按高、中、低水平配成浓度为80?g/mL、40?g/mL、20?g/mL的待测样品，每日测定3次，连续检测3天，根据吸光度值和2.2项所得标准曲线计算回收率，见表1。实验结果表明，卡铂的日内回收率为95.96%～96.93%，日间回收率为95.68%～97.53%，说明回收率良好。

2.7 载药量测定

精确称取C60 10.0mg、卡铂24mg于锥形瓶中，加入5%葡萄糖注射液20mL，避光搅拌24h，以16000r/min离心8min，收集上清液并稀释10倍，在229nm处测定吸光度值，按照公式：

（m游离药量 =C×稀释倍数×稀释体积，C为测定吸光度值代入2.2项标准曲线方程计算结果）。实验结果（见表2）。

3 讨论

以C60为药物载体对化疗药物卡铂进行吸附，可以实现提高药效、降低毒副作用的目的。因C60经长时间搅拌将有少量形成稳定存在于水中的纳米晶颗粒[15]，所以在收集到的游离药液中存在C60，如果按照中国药典中所采用的高效液相色谱法[16]对C60/卡铂药物递送系统中的卡铂含量进行测定，则可能遇到2点问题：（1）测定样品中存在的C60在色谱中高保留，造成色谱柱污染；（2）谱峰不佳。而其它检测方法如电感耦合等离子质谱/发射光谱法、络合分光度法则需要对样品进行预处理，既增加了操作的复杂性又不利于回收样品，还可能因预处理不当影响结果的准确性。采用紫外分光光度法对纳米药物递送系统中卡铂的含量进行测定，可以实现方便、快速、准确的定量，同时避免C60的干扰，操作简单，是一种良好的分析方法。

参考文献

[1] Smith IE， Harland SJ， Robinson BA， et al. Carboplatin： a very active new cisplatin in the treatment of small cell lung cancer [J]. Cancer Treatm Rep， 1985， 69（1）： 43-46.

[2] Zatloukal P， Petruzelka L. Gemcitabine/carboplatin in advanced non-small cell lung cancer [J]. Lung Cancer， 2002， 38（2）： S33-S36.

[3] Scalliet P， Pooter C De， Hellemans PWJ， et al. Interactions entre le carboplatine， le cisplatine et les rayonnements ionisants dans une lignée cellulaire humaine de cancer ovarien [J]. Cancer/Radiothérapie， 1999， 33（1） ： 30-38.

[4] Duffull SB， Robinson BA. Clinnical pharmacokinetics and dose optimization of carboplatin [J]. Clinnical pharmacokinet.， 1997， 33： 161-183.

[5] 杨一坤，普绍平，高文贵. 顺铂的应用及铂金属抗癌药物的研究进展 [J]. 中国新药杂志，1999，8：797-800.

[6] Rochard E. Simultaneous high performance liquid chromatographic analysis of carboplatin and cisplatin in infusion fluids [J]. J Liq Chromatogr， 1993， 16（7）： 1506-1516.

[7] Duncan G F， et al. Liquid-chromatographic procedure for the quantitative analysis of carboplatin in beagle dog plasma ultrafiltrate [J]. J Pharm Sci， 1988，77（3）： 273-276.

[8] 黄卫平，刘放. RP-HPLC法测定卡铂及其制剂的含量 [J]. 华西药学杂志，1997，12（2）：112-114.

[9] 张相林，任家佩，张道平等. 国产卡铂和顺铂在兔体内的药物动力学 [J]. 中国医院药学杂志，1992，12（9）：387-389.

[10] 倪俊，王元和，王强等. 白蛋白对大鼠腹腔内卡铂分布的影响 [J]. 中国医院药学杂志，1996，16（6）：246-248.

[11] 宋璟政. 二阶导数分光光度法预测注射用卡波铂稳定性及其影响因素的研究 [J]. 中国医药工业杂志， 1991， 22（ 12） ：538-549.

[12] 王皓，蒋雪涛，杨悦武等. 白蛋白微球中卡铂的络合分光光度法测定 [J]. 药物分析杂志，1995，15（1）：41.

[13] 孔维涵，赵博，陈启蒙等. 络合分光光度法测定卡铂抗肿瘤膜剂中卡铂含量[J]. 天津药学，2005，17（5）：17-18.

[14] 徐风华，欧阳荔，刘雅琼. 感耦等离子体质谱法和发射光谱法测定卡铂一乳酸/ 轻基乙酸共聚物微球中卡铂含量的研究 [J]. 药物分析杂志，2006，26（6）：790-792.

[15] Deguchi S， Alargova RG， Tsujii K. Stable dispersions of fullerenes， C60 and C70， in water. Preparation and characterization [J]. Langmuir， 2001， 17：6013-6017.

[16] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典 [S]. 2000年版. 二部. 北京化学工业出版社，2000，136-137.