HPLC法测定金振口服液中大黄素和大黄酚含量

曹云飞?吴小峰　蔡芳?殷黎霞

摘 要 目的 高效液相色谱法测定金振口服液中大黄素和大黄酚的含量。方法 色谱柱：Symmetry C18柱（3.9 mm ×150mm，5μm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸85：15；流速：1mL/min；紫外检测波长：254nm[2]；柱温：30℃；进样量：1 0μL。结果 本法可用来测定金振口服液中大黄素和大黄酚的含量。分别在0.0100～0.1045μg和0.0253～0.2783μg范围内成线性关系，平均回收率分别为98.81%和98.24%。结论 该方法简便，准确，可作为金振口服液质量控制的方法。

关键词 金振口服液 液相色谱法 大黄素 大黄酚

金振口服液主要由羚羊角、平贝母、大黄、黄芩等组方而成，具有清热解毒，祛痰止咳。主要用于小儿痰热蕴肺所致的发热、咳嗽、咳吐黄痰、咳吐不爽、舌质红、苔黄腻；小儿急性支气管炎等症状，临床应用较为广泛。《国家药典》2010年版一部[1]中通过控制黄芩中黄芩苷的含量以控制金振口服液的质量。由于本品中大黄含量较多，而大黄中主要含有大黄素、大黄酚、大黄酸等成分，大黄素别名朱砂莲甲素，化学名为1，3，8-三羟基-6-甲基蒽醌，分子式为C15H10O5，来源于蓼科植物虎杖的干燥根茎和根，具有抗菌、止咳、抗肿瘤、降血压等作用；大黄酚又名大黄根酸，化学名为1，8-二羟基-3-甲基蒽醌，分子式为C15H10O4，有明显的止咳作用。测定金振口服液中大黄素、大黄酚的含量有助于判断药用效力。本文参照文献[2，3]本文采用HPLC法同时对金振口服液中大黄素和大黄酚的含量进行测定，该法简便，稳定性和重现性好。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

Agilent1100高效液相色谱仪、工作站（美国安杰仑公司）。

1.2 试剂

大黄素对照品（中国食品药品检定研究院，批号110756-200110）；大黄酚对照品（中国食品药品检定研究院，批号110796-200615）；甲醇（国药集团色谱纯）；其余试剂为国药集团分析纯；金振口服液（江苏康缘药业股份有限公司，批号120401，120901，121201）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Symmetry C18柱（3.9 mm ×150mm，5μm）[4]；流动相：甲醇-0.1%磷酸85：15；流速：1.0ml/min；紫外检测波长：254nm[5]；柱温：30℃；进样量：1 0μL；在此条件下大黄素峰的理论塔板数为7502，大黄酚峰的理论塔板数为8020；大黄素与大黄酚峰的分离度为6.23。

2.2 标准曲线的制备

分别精密称取大黄素和大黄酚对照品适量，加无水乙醇—醋酸乙酯（2：1）适应溶解并定量稀释成含大黄素95.0μg /mL和大黄酚210.8μg /mL的贮备液。分别精密量取大黄素贮备液5mL，大黄酚贮备液6mL，用无水乙醇—醋酸乙酯（2：1）定量稀释至50mL，制成对照品的在上述色谱条件下进样分析，测定峰面积值（A），并以A对进样浓度（C）进行回归，绘制标准曲线。大黄素线性关系见表1，大黄酚线性关系见表2，色谱图见图1。

2.3 供试品溶液的制备

取本品2 mL，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷[6，7]，再称重量，用甲醇补减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液15mL，置烧瓶中，水浴蒸干，加30%乙醇—盐酸（10：1）溶液15mL，置水浴中加热水解1h，立即冷却，用氯仿强力振摇提取4次，每次15mL，合并氯仿液，在水浴上蒸干，残渣用无水乙醇—醋酸乙酯（2：1）溶解，移至20mL容量瓶中，稀释至刻度，即得。

2.4 稳定性试验

取对照品溶液（含大黄素9.50μg /mL和大黄酚25.30μg /mL），分别于0，4，8，12h在上述色谱条件下测定，峰面积基本不变。其中，大黄素的RSD为0.33%，大黄酚的RSD为0.35%。

2.5 精密度实验

取对照品溶液（含大黄素9.50μg /mL和大黄酚25.30μg /mL），在上述色谱条件下连续测定5次，大黄素RSD为0.1%，大黄酚的RSD为0.1%。

2.6 重复性试验

按照拟订的含量测定方法，取同批号样品5份，分别制备样品供试液，在上述色谱条件下测定5次，大黄素的RSD为0.7%，大黄酚的RSD为1.1 %。

2.7 回收率试验

取6份已知含量的样品，分别加入大黄素和大黄酚对照品贮备液1ml，按2.3中所述方法操作，在上述色谱条件下测定，结果见表3，表4。

2.8 空白试验

按处方比例称取除了大黄以外的其它几味药[8]，按制备工艺制成供试液，照样品测定法测定，在主成分出峰处无干扰，结果见图2。

2.9 样品测定

对同一厂家不同批号样品的含量测定结果见表5，色谱图见图3。

3 结论与讨论

采用高效液相色谱法测定金振口服液中大黄素和大黄酚的含量，在0.0100～0.1045μg和0.0253～0.2783μg范围内成线性关系，平均回收率分别为98.81%和98.24%。该方法简便，准确，可作为金振口服液质量控制的方法。

在制备供试品溶液时，参考《中国药典》2010年版一部中大黄的药材处理方法。笔者还曾分别采用超声30min，处理样品，结果所测含量与本实验结果相比，含量较低。

通常大黄蒽醌类的检测波长为254 nm，选用该波长测定，其它组分及辅料无干扰。

实验过程中曾尝试乙腈-甲醇- 0.1%磷酸（44：46：33） [9] ，乙腈-水-冰醋酸（60：40：1） ，甲醇-0.2%磷酸（80：20）为流动相，经比较得知选用甲醇-0.1%磷酸（85：15），比例最佳，峰形及柱效较好。

参考文献

[1] 中华人民共和国药典一部[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010.22-23.

[2] 陈敬然，谢飞，尹晓飞，等.高效液相色谱法测定牛黄解毒滴丸中大黄素和大黄酚含量[J].医药导报，2011，04（1）：2-3.

[3] 窦金凤.HPLC法同时测定女金胶囊中黄芩苷和丹皮酚的含量[J].中国药师，2012，03（5）：40-42.

[4] 窦金凤，曹云飞.HPLC法测定肾衰宁胶囊中大黄素和大黄酚的含量[J].黑龙江中医药，2007，10（10）：52-54.

[5] 倪晓霓，杨燕飞.HPLC测定牛黄解毒片中大黄素和大黄酚的含量[J].中成药，2005，05：（25）：35-37.

[6] 倪晓霓，杨燕飞.反相高效液相色谱法测定感特灵胶囊中黄芩苷的含量[J].江苏大学学报（医学版），2004，08（30）：30-32.

[7] 杨水清，张尚斌，洪志勇.HPLC法测定保肝宁颗粒中大黄素的含量[J].中国中医药科技，2007，03（20）：23-24.

[8] 谭朝阳，尤昭玲. HPLC法测定化癥回生口服液中大黄素和大黄酚的含量[J].湖南中医药导报，2004，6（52）：92-93.

[9] 原永芳，刘爱波，金山丛，等.新脂康口服液中大黄素和大黄酚的HPLC法定量分析[J].中国药师，2004，12（12）：940-942.