平喘胶囊水提取工艺优选研究

王蕊蕊 燕金霞 朱太雷 葛 莉 牛宇东 冯一凡

陕西中医学院2011级研究生（咸阳712046）

平喘胶囊为陕西省中医医院的院内制剂，由丹参、莪术、麻黄、浙贝母、炙黄芪、地龙、白僵蚕等药物组成，具有补益肺肾，降气平喘之功，用于治疗肺肾气虚，痰瘀内阻所致气短气喘，喉间痰鸣，痰粘难咳。其中丹参、莪术、地龙、炙黄芪等药材以水提取入药。为了有效地控制提取工艺，本文参考有关文献［1－6］，采取正交试验法，以丹酚酸B和干膏量为评价指标，确定最佳水提取工艺条件。

1 仪器与试药 1.1 试药 试验所用中药均由本院药剂科提供，经检验均符合《中国药典》2010年版一部的规定；丹酚酸B（中国药品生物制品检定所，批号111562－200807），所用化学试剂为分析纯（西安化学试剂厂）、液相用试剂为色谱纯（美国TEDIA公司）、水为超纯水。

1.2 仪器 高效液相色谱仪（Lab Alliance型恒流泵；Waters966二极管阵列检测器，活德国际贸易（上海）有限公司；Millennium 32色谱工作站）；C18色谱柱（Diamosil 4.6mm×250mm，5μm）、KQ3200型超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）、BP211D型电子分析天平（德国赛多利斯天平有限公司）、超纯水器（Millipore）。

2 方法与结果 2.1水提工艺正交设计 为了确定最佳的提取参数，拟采用正交试验对水提取工艺中所涉及的条件进行优选，通常情况下：提取时间、加水量、提取次数对提取结果影响较大，因此，以提取时间A、加水量B、提取次数C作为影响因素，各选择3个水平，以L9（34）表安排试验，筛选最佳提取工艺条件。因素水平表见表1。

表1 正交试验因素水平表

2.2 评价指标的确定 丹参为方中主药药味之一，丹酚酸B为其主要有效成分之一，且其含量测定有成熟方法，可用HPLC法测定水提取物中丹酚酸B的含量，因此选择以丹酚酸B的含量并结合出膏率作为评价指标。

2.3 样品溶液的制备 按处方比例量称取水提工艺部分的药材共64g，共9份，随机编成①～⑨号，按L9（34）正交表下设计的实验条件以加热回流方式进行提取，合并提取液。将上述提取液浓缩，定容至一定体积，制得样品溶液。

2.4 干膏量测定方法 精密量取上述各试验号提取液50mL，分别置于已恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，残渣于105℃干燥3h，取出，置于干燥器中放置30min，称重，计算干膏得率。

2.5 丹酚酸B的含量测定

2.5.1 色谱条件色谱柱：C18色谱柱（Diamosil 4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈－甲醇－1%甲酸（15：30：55）；流速1.0mL·min－1；检测波长286nm；柱温25℃；进样量10μL。

2.5.2 对照品溶液的制备：精密称取丹酚酸B对照品适量，加75%甲醇制成每1mL含0.44197mg的溶液，摇匀，即得。

2.5.3 供试品溶液的制备：分别精密吸取各提取液7mL，置10mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。

2.5.4 测定法：分别吸取对照品溶液及上述供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定并计算。

2.6 结果及分析 正交实验结果见表2，方差分析结果见表3。

表2 水提L9（34）正交试验表及结果

表3 方差分析表

试验结果表明，影响提取效果因素顺序为提取次数C＞提取时间A＞加水量B；从方差分析可知，提取次数对提取效果有显著影响，提取时间、加水量长短几无影响，以A2B3C3为最佳提取组合，即加水提取3次，加水量依次为12、10、10倍，提取时间依次为1.5、1、1h。

2.7 验证试验 按处方量称取各药材共128g，共3份，按照所选提取条件试验，并测定丹酚酸B含量和干膏量。结果见表4。

表4 验证试验结果

3次验证试验表明，检测指标折算成处方量结果后，接近或者高于正交表中最优值，说明优选的提取条件基本可行。

3 讨 论3.1 在对水提工艺条件进行优选时我们同时考察了丹酚酸B的含量和干膏得率，这比采取单一指标对提取工艺进行评价更加科学和合理。

3.2 根据本实验优选的最佳工艺 经3批验证，结果产品质量稳定，可为大生产提供理论依据。

［1］ 国家药典委员会.中国药典［S］.一部.北京：人民卫生出版社，2010：12.

［2］ 康阿龙，汤迎爽，孙成荣，等.益脑灵胶囊中丹酚酸B的含量测定［J］.医药导报，2010，29（1）：105－106.

［3］ 宋锦锋.舒肝胶囊的质量标准研究 ［J］.湖南中医杂志，2012，28（5）：152－154.

［4］ 苑相爱.高效液相色谱法测定心肌炎颗粒中丹酚酸B含量 ［J］.中国药业，2010，19（3）：21－22.

［5］ 张 蒙，庞来祥，郭 涛，等.正交实验法优选疏胆防石颗粒的提取工艺［J］.西北药学杂志，2011，26（2）：96－97.

［6］ 梅全喜，曾聪彦，周小军.正交法优选鼻咽解毒颗粒的水提工艺［J］.中华中医药学刊，2010，28（7）：1483－1484.