性控精液人工授精试验

李同豹，殷元虎

(黑龙江省畜牧研究所，黑龙江 齐齐哈尔161005)

目前，我国奶业和养牛业发展速度较快，但随之而来的奶牛饲养问题和弊病也相应出现很多。其中最为突出的现象是为追求高生产力而使奶牛日粮精料饲喂比例过高，造成奶牛的繁殖疾患较多、繁殖效率下降较大，以及盲目追求快速发展而只注重数量不注重质量所导致的高产奶牛数量相对较少、良种牛比例较低、奶牛遗传素质总体水平不高。因此，当前在提高奶牛生产性能的同时，进一步提高奶牛的繁殖效率和增加良种奶牛的饲养比例及数量是急需解决的问题。自然状态下，受性别比率的制约，1 头奶牛终生只能提供3 ～4 头母犊，获得优质高产奶牛数量是有限的，这使优良奶牛种群扩繁受到很大的限制。性控精液人工授精的母犊出生比率达90%以上，可近乎成倍提高奶牛的繁殖效率、加快良种奶牛的扩繁速度，不仅使奶牛的繁殖在性别上实现了人为控制而且使奶牛繁殖的数量和质量也实现了人为控制，既可以提高养殖效益，又可以进一步地缩短世代间隔、满足育种选择强度的需要，其市场前景普遍看好。但性控精液因单位剂量有效精子数量较少、活力较低、在体内存活时间较短，人工授精受胎率较低，影响了其人工授精的应用效果，需要改进和优化输精方法、提高输精效率。

本试验通过对人工授精方法的改进和优化、母牛子宫环境的改善、人为激素调节、日粮蛋白质营养水平调控及同期发情等试验研究，观察比较各项措施对性控精液人工授精情期受胎率的影响，对提高奶牛性控精液人工授精的情期受胎率和输精效率进行了探讨。

1 材料与方法

1.1 试验时间与地点

2009 ～2012年分别在黑龙江省齐梅奶牛场、依安县三兴镇东安村振安奶牛场进行奶牛性控精液人工授精试验。

1.2 受配奶牛

选择体况良好、生殖系统与发情周期正常的大于16月龄的育成牛，无流产、难产记录、生殖系统及子宫内环境优良的经产母牛，且各项试验的试验牛尽量选择年龄、体重、胎次、泌乳阶段、泌乳量等生理情况相近的牛只。

1.3 精液与药品

性控冻精来源于黑龙江省大庆市田丰生物工程有限公司，为流式细胞分离仪分离后冷冻保存的X 精子。性控冻精的规格为0.25 mL/支，有效精子数2 ×106，活力＞0.3，X 精子含量≥90%。

促排3 号(LHRH-A3) 为宁波第二激素厂生产，规格为25 mg/支; 用于子宫净化的药物为医用盐酸环丙沙星注射液，规格为50 ml/瓶; 氯前列醇钠为宁波市激素制品有限公司生产，0.5 mg/支。

1.4 输精

加强对受配奶牛的发情观察，以静立接受爬跨的奶牛判断为发情。输精前，对发情奶牛进行直肠检查，判断出卵泡为何侧发育。从液氮罐中取出冻精细管，立即置于39 ～40℃水浴10 ～20 s 解冻。擦干后剪去一端，取1 滴精液滴于载玻片上，盖上盖玻片镜检，活力＞0.3 的装入输精枪中，准备授精。输精剂量均为0.25 mL/支细管，每头1 支。

1.5 试验方法

采用单因素对比设计，分别进行不同输精部位、不同输精时间、输精时肌注不同剂量LHRH-A3、输精前对经产母牛进行子宫投药净化处理和不同蛋白质水平日粮饲喂后性控精液人工授精试验。重复试验3 次，试验分组与数量情况见表1。

表1 试验分组与数量

1.6 妊娠诊断

在输精后的28 d ，使用B 超进行初次妊娠诊断，60 d 进行直肠检查复诊，确定妊娠。

1.7 数据分析

数据采用SPSS、SAS 统计软件进行单因素方差分析，P ＜0.05 为差异显著。

2 结果与分析

2.1 输精部位对情期受胎率的影响

试验牛静立接受爬跨后8 ～12 h 进行直检，判断卵泡的发育情况，在卵泡即将排卵前分别于子宫体、子宫角基部及子宫角深部3 个部位进行性控精液输精。结果: 输精于子宫体部位的情期受胎率显著低于后两个部位; 输于子宫角深部受胎率略高于子宫角基部，但差异不显著(表2) 。说明性控精液人工输精部位在子宫角比较适宜，但为方便操作和避免宫角损伤，输于子宫角基部为宜。

表2 性控精液不同子宫输精部位对情期受胎率的影响

2.2 输精时间对情期受胎率的影响

试验牛分别于静立发情后12 h 前、12 ～14 h、14 ～18 h、18 h 以后4 个时间段于子宫角基部进行性控精液输精。结果: 育成牛在12 ～14 h 间情期受胎率较高，与其它时间段差异极显著(表3) ; 经产牛在12 ～18 h 间的受胎率显著高于其它时间段(表4) 。说明性控精液输精时间，育成牛在发情后12 ～14 h，经产牛在发情后12 ～18 h 较为适宜。

表3 育成牛性控精液输精时间对情期受胎率的影响

表4 经产牛性控精液输精时间对情期受胎率的影响

2.3 肌注LHRH-A3对情期受胎率的影响

在试验牛发情后12 ～18 h 进行子宫角基部性控精液输精，同时随机肌肉注射LHRH-A350 mg、25 mg 和不注射对照。结果:低剂量25 mg LHRH-A3处理组的情期受胎率显著高于另外两组，高剂量50 mg 组与未处理组差异不显著(表5) 。说明LHRH-A3低剂量处理可以显著提高奶牛性控精液人工授精的情期受胎率。

表5 LHRH-A3 处理对性控精液输精情期受胎率的影响

2.4 子宫净化处理对情期受胎率的影响

对选择的经产牛随机子宫内投注盐酸环丙沙星100 mL 进行子宫净化处理，并于发情后12 ～18 h 进行子宫角基部输精。结果:净化处理组的情期受胎率显著高于对照组(表6) 。说明对经产牛进行子宫净化处理，可以很好地改善经产牛的子宫受胎环境，提高经产牛性控精液人工授精的情期受胎率。

表6 子宫净化处理对性控精液输精情期受胎率的影响

2.5 日粮蛋白质水平对情期受胎率的影响

试验分别设置低、中、高梯度的两组(A为育成牛组，B 为经产牛组)6 种蛋白质水平日 粮: A1(9.88%) 、A2(12.66%) 、A3(14.06%) 和B1(13.80%) 、B2(16.19%) 、B3(17.80%) 。在试验母牛发情周期的中后期开始进行分组饲喂，并于发情12 ～18 h 进行子宫角基部输精。结果: 中等梯度蛋白质水平的日粮组的情期受胎率显著高于其他两组，低水平组与高水平组的差异也显著(表7、表8) 。试验表明: 饲喂中等或中等稍低蛋白质水平的日粮可以显著提高性控精液人工授精情期受胎率。

表7 日粮蛋白质水平对育成牛性控精液输精情期受胎率的影响

表8 日粮蛋白质水平对经产牛性控精液输精情期受胎率的影响

2.6 同期发情处理对情期受胎率的影响

使用氯前列醇钠进行同期发情处理，并于发情后12 ～18 h 进行子宫角基部输精。结果: 同期发情处理组与自然发情对照组情期受胎率差异不显著(表9) 。表明同期发情处理对奶牛性控精液人工授精情期受胎率无不良影响。

表9 同期发情处理对性控精液情期受胎率的影响

3 结论与讨论

3.1 性控精液与常规精液授精的方法应有所不同，输精部位应该在有优势卵泡发育侧子宫角内。本试验表明在子宫角深部和子宫基部性控精液输精的情期受胎率差异不显著，但子宫角深部输精必须是技术熟练的人员操作，否则易造成宫角损伤而致效果相反。所以，性控精液的人工授精部位还是应该在宫角的基部，以保证效果和便于操作。

3.2 在适当的时间进行性控精液人工授精非常关键。本试验表明，性控精液的授精时间育成牛应该在静立接受爬跨后12 ～14 h，经产牛在12 ～18 h。这个时间的差异也许是因为青年母牛排卵时间比成年母牛早的关系; 当然由于个体不同而排卵时间存在着很大的差异，因此要求操作人员要有成熟的卵泡直检技术，尽可能将个体排卵时间估算准确。

3.3 在母牛发情后12 ～18 h 时采用注射促排卵的LHRH-A3的办法促进成熟卵子及时排出而尽快地与精子结合完成受精过程，从而可提高性控精液人工授精的受胎率。本试验小剂量LHRH-A3的效果显著，这可能是因为性控精液输精时间比较晚，大剂量的LHRH-A3有造成个别牛的卵泡黄体化而未排卵的可能。

3.4 良好的子宫内环境是高受胎率的必要保证。本试验也验证了子宫净化处理对性控精液人工授精的效果提高显著。子宫净化处理在性控精液的应用上的报道较少，可能是性控精液试验多数是以育成母牛为研究对象，其子宫状况或子宫内环境都很好的原因。

3.5 适宜的日粮蛋白质水平是保持奶牛正常发情、保证输精受孕的重要条件，日粮蛋白水平过低或者过高，均会不同程度地对奶牛繁殖性能产生不良的影响。本试验中等或中等稍低蛋白质水平日粮饲喂效果显著，表明采用控制日粮蛋白质水平的营养调控技术，可以提高性控精液人工授精的受胎率。

3.6 子宫净化处理措施的有效性，可以克服性控精液只在育成牛上应用效果较好而经产牛使用效果不佳的弊端; 同期发情对性控精液情期受胎率无不良影响，表明可以利用同期发情技术来实施性控精液人工授精，以加快实施的进度和缩短实施的时间。

［1］李同豹，曲永利.提高奶牛性控精液受胎率的措施研究［J］.中国奶牛，2011，15: 47-49.

［2］王建国，等.奶牛性控冻精应用研究［J］.中国奶牛，2009，1: 29-30.

［3］罗明久，尚寿云，等.奶牛性控冻精人工授精影响因素研究［J］.中国兽医学报.2010，4: 535-539.