自体骨髓干细胞移植治疗肝功能衰竭的临床疗效及安全性观察

王 辉，巫贵成，钟 庆

肝功能衰竭是由多病因导致的严重肝脏损伤而引起的肝脏合成、代谢、解毒及生物转化等功能障碍，临床表现为黄疸、腹腔积液、肝性脑病、肝肾综合征等一组疾病群。肝功能衰竭的病因以肝炎病毒、酒精性最为常见，常规内科治疗效果较差，人工肝支持治疗受到血浆、清蛋白来源限制，肝移植受到肝源紧张、费用高昂、免疫排斥等影响难以普及。干细胞是一类具有自我更新或复制、多向分化潜能的“原始细胞”，因其可以在体外或体内分化为具有成熟肝细胞部分功能的“肝样细胞”而备受研究者重视。近年来，骨髓干细胞移植治疗多病因肝功能衰竭已试用于临床，显示出了一定的临床治疗效果，但其安全性及远期效果有待进一步研究。本研究通过回顾性分析18例肝功能衰竭患者自体骨髓干细胞移植治疗的临床疗效及不良反应、肝功能及凝血功能、死亡情况及并发症情况，探讨自体骨髓干细胞移植治疗肝功能衰竭的临床疗效及安全性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究经有关主管部门通过，三峡中心医院伦理委员会审核通过实施。选择重庆三峡中心医院2009年2月—2012年6月收治的肝功能衰竭患者18例，其中男16例，女2例；年龄22～70岁，平均(51.9 ±13.1)岁；均有腹腔积液伴双下肢水肿，无上消化道出血、肝性脑病及肝肾综合征，符合《肝衰竭诊疗指南》中的诊断标准[1]，排除肝癌、其他恶性肿瘤及严重心脑肺肾疾病；肝功能Child-Pugh分级为B或C级，术前行腹部超声或CT检查、肝脏生化检查证实有不同程度腹腔积液、低蛋白血症。

1.2 方法

1.2.1 常规治疗 18例患者均予以内科综合治疗，包括针对病因的治疗(乙型肝炎患者抗病毒治疗，酒精性肝病者戒酒)、保肝、退黄利胆、促进细胞再生、调节机体免疫、抗肝纤维化及清蛋白或血浆支持治疗等，平均治疗2周～1个月后，患者肝功能指标改善不明显，治疗愿望积极者在知情同意基础上予以干细胞移植治疗。

1.2.2 骨髓干细胞分离方法 (1)以双侧髂后上棘较平整的骨面为穿刺区，局部浸润麻醉至骨膜，肝素钠预先润洗骨髓穿刺针及20 ml注射器，多点麻醉后行骨髓穿刺术，抽取骨髓血100～200 ml，使用0.9%氯化钠溶液按1∶1比例将肝素钠稀释后用于抗凝，每20 ml注射器中含2 ml肝素钠生理盐水溶液；(2)采用Ficoll密度梯度离心法或Lin-筛选法获取单个核细胞，总数为2.6×107～6.0×108，经0.9%氯化钠溶液反复洗涤，细胞悬液定容为5 ml，4 ℃保存备用，保存时间不超过3 h。

1.2.3 治疗方法 肝脏介入治疗常规术前准备，患者均无介入治疗禁忌证，碘皮试结果阴性，术前禁食6～8 h。在数字减影血管造影机下，采用Seldinger技术局部浸润麻醉后穿刺右股动脉，循腹腔干进入肝固有动脉，先行造影明确有无肝脏肿瘤性病变，然后注入骨髓干细胞悬液，0.9%氯化钠溶液10 ml冲洗导管。术后加压包扎，平卧24～36 h，对症处理，予以促肝细胞生长素100 mg静脉注射，常规内科支持治疗。

1.2.4 术后观察及随访 (1)临床疗效及不良反应：患者精神状态、食欲、体力、腹胀、下肢水肿、腹腔积液、肝性脑病、消化道出血情况等；不良反应包括发热、恶心、呕吐、头昏、乏力、皮疹、肝区疼痛、下肢动脉血管搏动情况、心血管症状、呼吸系统症状等。(2)术后3个月每个月复查1次肝功能及凝血功能，了解肝功能及凝血功能变化，特别是清蛋白、总胆红素、丙氨酸氨基转移酶、凝血酶原时间的变化情况。(3)随访：随访6～40个月，截止日期为2012-06-30，记录患者死亡情况及并发症情况。

2 结果

2.1 临床疗效及不良反应 18例患者中14例精神状态、食欲改善，体力好转，腹腔积液消失或减轻，15例双下肢水肿消失或减轻，1例治疗2个月后清蛋白水平恢复正常，半年后反复发生肝性脑病、腹腔积液及水肿。18例患者中2例在注射骨髓干细胞悬液时感觉腹部“发热”，注射完毕后消失，1例出现头昏。

2.2 肝功能及凝血功能 18例患者中15例清蛋白水平呈逐渐上升趋势，其中9例恢复到参考值范围；12例患者凝血酶原时间缩短，2例恢复到参考值范围；5例患者总胆红素水平恢复到参考值范围；丙氨酸氨基转移酶水平无明显变化(见表1)。

2.3 随访 18例患者中6例死亡，主因慢性和(或)急性肝功能衰竭及其并发症，其中4例并发消化道出血，1例并发肝肾综合征；1例术后3年经影像学诊断为“肝脏肿瘤”。

表1 自体骨髓干细胞移植治疗前后实验室检测指标变化情况
Table1 Changes of laboratory test results before and after autologous bone marrow stem cell therapy

时间清蛋白(g/L)总胆红素(μmol/L)丙氨酸氨基转移酶(U/L)凝血酶原时间(s)参考值35 0～52 0男0～24 0，女0～15 0男0～41，女0～338～14术前27 2±3 054 9±47 541±2419±5术后1个月30 8±5 452 5±35 147±5517±3术后2个月32 6±3 548 8±37 944±3817±2术后3个月34 1±4 457 7±44 041±3717±3

3 讨论

目前，肝功能衰竭尚无特效治疗方法，常规以药物治疗为主，如保肝、抗炎、抗病毒、免疫调节、抗肝纤维化等，重点及难点在于肝细胞功能的修复与再生。骨髓干细胞有多种干细胞成分，含量高，较为原始，可以在局部微环境下分化为具有一定功能的软骨、脂肪、肌肉、肝、神经、心肌细胞等而起到治疗作用。研究表明，骨髓干细胞可以在肝脏微环境下分化为具有一定肝细胞功能的肝样细胞，同时可减轻肝纤维化程度，改善肝功能[2]。

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4 王辉，张知翠，赵连三，等.人脐血干细胞移植建立人鼠嵌合体动物模型实验研究[J].实用医院临床杂志，2008，5(4)：40-43.

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