白康冲剂质量标准初探

陈家鲁

白康冲剂为临床科研实践中筛选出来的一组疗效好，毒副作用小的组方，使用现代制药工艺精制而成，在临床使用中取得了较好的效果，目前为南京军区机关医院院内制剂。传统中医认为白癜风可能是肝肾阴虚、神智内伤、肝气郁结、气机不畅，复感风邪，搏结于肌肤以致局部气血失和而发病，而现代医学越来越多的认为白癜风的发病机理与自身免疫有关，本处方是针对白癜风发病机理加以研究筛选而来。该处方是以制首乌20 g、女贞子10 g、丹参15 g、黄芪20 g、白癣皮10 g和当归15 g六味中药组成的复方制剂，具有滋补肝肾、活血化瘀等功效，临床上用于治疗白癜风。为有效地控制本制剂的质量，本文对白康冲剂中丹参的丹参酮I以及当归中的齐墩果酸采用薄层色谱法(Thin layer chromatography, TLC)进行定性鉴别研究，采用高效液相色谱法(High performance liquid Chromatography, HPLC)对白康冲剂中制首乌中的大黄素的含量测定方法进行研究，并对方法学进行考察，以制订该制剂的质控标准。现报道如下。

1　仪器与试药

1.1　仪器

Waters高效液相色谱系统(美国waters公司，2695溶剂管理系统，四元数码梯度泵，2489紫外—可见检测器，Empower 3单系统色谱工作站)，Milli-Q纯水发生器(美国millipore公司)，电子天平(瑞士Mettler Toledo公司)，KQ-100型超声波提取器(江苏昆山)。

1.2　试药

丹参酮I对照品、齐墩果酸对照品及大黄素对照品购自中国食品药品检定研究院；制剂所用药材购自安徽亳州义和堂中药饮片有限公司，制首乌由药商按《中华人民共和国药典》2010版(一部)方法炮制；白康冲剂(10 g/袋)为医院临床应用方，由本院制剂室自制(批号20120902)；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂为分析纯。

2　方法与结果

2.1　性状

本品为棕色或棕褐色的颗粒；味甜，微苦。

2.2　定性鉴别

丹参：称取白康冲剂(批号20120902)约5 g，加入乙醚约50 ml，搅拌浸提3小时，滤过，滤液蒸去溶剂，加入乙酸乙酯5 ml，溶解，滤过，滤液为供试液；另取丹参酮I对照品，加入乙酸乙酯制成每1 ml含2 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[1]试验，吸取上述二种溶液各5 μl，分别点与统一硅胶G薄层板上，以石油醚—乙酸乙酯(8∶2)为展开剂，展开，取出晾干。于紫外灯下(365 nm)观察，供试品色谱中，在与对照品相应的位置上，显相同的天蓝色荧光斑点。

当归：取白康冲剂(批号20120902)约5 g，加入氯仿约50 ml，置水浴上回流2小时，滤过，滤液蒸去溶剂，加入乙醇1 ml，溶解，滤过，滤液为供试液；另取齐墩果酸对照品，加入乙醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各20 μl，分别点与统一硅胶G薄层板上，以石油醚—氯仿—乙酸(10∶10∶2)为展开剂，展开，取出晾干。置碘缸中，供试品色谱中，在与对照品相应的位置上显黄色斑点。

2.3　样品液制备

2.3.1白康冲剂供试液制备取白康冲剂(批号20120902)1袋，精密称取，加三氯甲烷约80 ml，称定，80 ℃加热回流60分钟，冷却，用三氯甲烷补足损失的重量，摇匀并过滤，精密量取50 ml，蒸干，残渣加流动相[甲醇—0.1mol/L磷酸溶液(8∶2，调节pH=3.0)]溶解，过0.45 μm微孔滤膜后用流动相定容于100 ml容量瓶中，备用[2]。

2.3.2对照品溶液的配制精密称取大黄素对照品约20 mg，用流动相溶解并定溶于100 ml容量瓶中，并等比稀释成 0.203 mg/ml、0.102 mg/ml、0.0508 mg/ml、0.0254 mg/ml及0.0127 mg/ml 的系列浓度溶液，备用。

2.4　含量测定

2.4.1色谱柱条件及可行性考察色谱柱为Global Chromatography C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)；流动相为甲醇—0.1 mol/L磷酸溶液(8∶2，调节pH=3.0)；流速1.0 ml/min；检测波长254 nm；灵敏度0.05 AUFS；柱温25 ℃。在上述条件下，样品中大黄素达基线分离，阴性对照显示无干扰，见图1。

2.4.2标准曲线量取系列浓度的对照品溶液分别进样20 μl，以进样量(X)对峰面积(Y)回归，拟合得标准曲线，回归方程为：Y=4534328.2X+342888.7，r=0.9999，结果表明在0.2537～4.06 μg范围内线形关系良好，见表1。

表1　线性关系考察结果

2.4.3精密度测试分别在0小时、1小时、4小时、12小时、24小时内以及1天、2天、3天、4天、5天内取同一批次配制的大黄素对照品溶液进样，测其峰面积，分别考察日内、日间的精密度。结果显示日内、日间精密度的相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)分别为1.79%和2.44%，结果表明该方法具有良好的精密度。

2.4.4稳定性考察分别在0小时、1小时、2小时、4小时、6小时、12 小时精密量取对照品溶液进样，测其峰面积，计算出RSD=0.97%，结果表明大黄素在该甲醇—磷酸水溶液中12小时内稳定性良好。

2.4.5回收率实验精密量取已测含量的同一批号白康冲剂制剂(批号20120902)样品6份，分别加入大黄素对照贮备液适量，按样品提取方法制得样液，按样品测定项下方法进行加样回收实验，测得平均回收率为101.10%，RSD为2.53% (n=6)。结果见表2。

表2　加样回收率试验结果

2.5　制剂含量测定

精密量取上述的白康冲剂(批号20120902)制剂提取液20 μl连续进样5次，测得其平均面积为4297647 mV*min，计算得该批号的白康冲剂中大黄素的含量为4.361 mg/10 g。

3　讨论

薄层法(TLC)鉴别中成药因不受药材在成药中存在状态的限制(显微鉴别要求药材以粉末状态存在)，也不受存在量的限制(颜色反应则需要一定的有效成分浓度，浓度低，颜色反应结果不明显，易判断失误)，可有效的进行定性研究。因此，TLC与其它鉴别方法相比有其自身的优越性，在鉴别中成药方面有着广阔的前景。本文选用TLC法对制剂组方中丹参中的丹参酮I和当归中的齐墩果酸进行了定性的鉴别。

石岭等[3]报道选用正己烷、乙酸乙酯、乙醚等溶剂对丹参中的丹参酮进行浸泡提取，结果表明乙醚不仅对丹参酮溶解性大，而且对其他成分提取少，可以更高效的提取丹参酮。参照文献，通过对溶剂的初步筛选，本文选择了乙醚作为丹参中丹参酮I的TLC检测的提取溶剂。

张秋红等[4]综述了多种药材中齐墩果酸的提取工艺，其中氯仿应用最为广泛，并有较好的效果，参照文献，通过对溶剂的初步筛选，本文选用了氯仿作为当归中齐墩果酸的TLC检测的提取溶剂。

蒽醌类化合物是何首乌中主要活性成分之一，临床上研究中具有多种药效。其中大黄素是蒽醌类化合物的成分之一，因此本研究以大黄素为研究对象，对白康冲剂进行含量测定方法学研究。虽然大黄素为亲脂性化合物，但用极性较小的溶剂如甲醇提取何首乌药材时，并不能完全提取大黄素；文献报道[5-6]大黄素分别用甲醇和三氯甲烷作为提取液提取时，三氯甲烷不仅可以提高提取效率，而且提出溶液中干扰较少，因此，本文选择用三氯甲烷提取制剂中的大黄素，挥干后用流动相定容制备供试液。

本文建立了白康冲剂中大黄素的含量测定方法，并对方法学进行了系统的研究，该方法为白康冲剂质量标准的建立提供了依据。

[1]国家药典委员会. 中华人民共和共国药典(一部)[S]. 北京: 中国医药科技出版社, 2010: 附录VI B 34.

[2]赵沈娟,黄新兰,石晶萍,等. RP-HPLC法测定不同产地首乌藤中大黄素[J]. 中国药师, 2008, 11(9): 1063-1064.

[3]石岭,鱼红闪,金凤燮. 丹参药渣中丹参酮的提取研究[J]. 安徽农业科学, 2010, 38(9): 4536-4541.

[4]张秋红,刘素清,熊绍根. 齐墩果酸成分薄层分析条件综述[J]. 时珍国医国药, 2000,11(5): 467-468.

[5]杨洁,顾苏俊,赵夕. 升黄克痛软膏质量标准研究[J]. 科学技术与工程,2008，18(17): 4969-4972.

[6]张郁葱,丁德荣,龙湘俊,等. 高效液相色谱法测定虎梅冲剂中大黄素和大黄素甲醚含量研究[J]. 湖南中医学院学报, 2002,22(2): 24-26.