水貂阿留申病研究进展

廉慧锋 （山西出入境检验检疫局 太原 030024）

胡传伟 贾 赟 肇慧君 （辽宁出入境检验检疫局 大连）

水貂阿留申病研究进展

廉慧锋 （山西出入境检验检疫局 太原 030024）

胡传伟 贾 赟 肇慧君 （辽宁出入境检验检疫局 大连）

由水貂阿留申病毒(Aleutian disease of mink virus，ADMV)引起的水貂阿留申病(Aleutian disease of mink，ADM)，又称为浆细胞增多症，是主要侵害水貂的免疫系统，以浆细胞弥漫性增生和持续性病毒血症为特征的水貂慢性传染病。AMD的发病率和死亡率都很高，同时病貂毛皮质量下降，对水貂养殖业造成巨大的经济损失。因此，笔者对AMDV的理化特性，毒株之间的差异以及培养等病原特性方面进行了总结，并对ADM的致病机理进行了阐述，介绍了其研究进展的情况，为以后阿留申病的研究提供理论依据。

水貂阿留申病导致自身免疫系统紊乱并逐渐衰竭，同时并发强烈的自身免疫的慢性传染性疾病。该病特征是终生病毒血症，持续感染。全身淋巴细胞增生，血清γ-球蛋白增多，肾小球肾炎，动脉炎和肝炎。其实质是由于强烈的抗原刺激，过度的免疫球蛋白产生及免疫复合物在组织内沉积出现超敏，从而导致复合物沉积组织损伤。病貂最终死于组织损伤和继发感染[1]。

1 病原特性

1.1 理化特性 ADMV属于细小病毒科，细小病毒属，无囊膜，无脂质，无糖类，结构紧密，在氯化铯中，沉淀系数为110 S的单链DNA病毒。分子量约1.4×106，直径大约为10～50nm，最多为23～35nm。病毒含有两种多肽，分子量分别为89ku和77.6ku。该病毒对化学药品和核酸酶的作用具有高度抵抗力，能抵抗乙醚和氯仿，且耐热，80℃时可存活1h，90℃时，可耐受10min，100℃3min仍能保持感染性。3%的福尔马林约2周处理仍有活力，耐受4周才灭活。在pH2.8～l0的环境中均能保持活力，但蛋白酶处理时，病毒滴度明显下降。可被紫外线、0.5mol/L的盐酸、0.5%碘及2%的氢氧化钠灭活[2,3,4]。

1.2 ADMV株间的差异 不同毒株对不同动物及不同组织的毒力有差异，据Lofsson[5]报道，该病毒具有极高的变异性。Genbank其基因序列大概为107626～107660。Akami[6]等报道感染雪貂的ADMV与感染水貂的ADMV有很大的不同，是ADMV的变异群。Dyer[7]等用PCR测定感染貂不同组织中的病毒时，发现引起貂非化脓性脑脊膜炎的一株病毒的两个单一氨基酸残基与在其他组织中发现的病毒不同，可能是它决定了其致病力。在分离的ADV-UTAH、ADV-G、普曼株、威斯康辛株和欧洲株中，ADV-UTAH是强毒株，但不能侵袭猫肾细胞系CRFK细胞。ADV-G为弱毒株，能使CRFK产生病变，但对貂没有致病力。

1.3 培养 该病毒能在貂睾丸细胞和肾细胞及鼠和鸡胚成纤维细胞等原代细胞上生长，也可在猫肾细胞株(CRFK)和鼠L细胞株传代细胞上繁殖，并产生细胞病变。非洲绿猴肾细胞和人的细胞株WI一38中有限地产生阿留申病病毒抗原。

2 发病机理

2.1 分子免疫学 ADMV主要侵害网状内皮系统，以浆细胞弥漫性增生，产生多量的γ-球蛋白，它不能中和病毒，反而形成病毒—抗体的复合物，沉淀于肾小管和血管壁，引起肾小球肾炎，动脉炎和肝炎等病理变化，并且应起超敏反应和自身免疫现象。ADMV抗原最初位于脾和淋巴结的巨噬细胞和肝脏的枯否氏细胞浆内，据Jensen[9]等报道，与ADMV共同陪养72 h的水貂淋巴结巨噬细胞中发现了ADMV的核衣壳，非结构蛋白(NS1和NS2)，同时还发现了被包被的ADMV的DNA 。还有人观察到ADMV抗原位于慢性感染水貂的骨髓细胞内，T和B细胞内也含有ADMV抗原。Oleksiewicz[10]等研究证明：在细胞的S期受到ADMV产物阈上刺激的细胞，将在S后期或C 期出现循环抑制，但仍支持高水平的ADMV的DNA的复制及其它基因产物的合成；在S期受ADMV产物阈下刺激的细胞，只显示了低水平的DNA复制，不支持ADMV的复制。ADMV的宿主范围及致病力受核衣壳蛋白基因调控。通过对弱毒株ADV-G和强毒株ADV-UTAH的基因与宿主关系的研究，发现基因片段54～65和65～88决定了ADMV的宿主范围[11]。另外，据Stevenson[12]等报道，位于G/U-8上的翻译核衣壳Vp2蛋白上的缬氨酸的352位密码子与ADMV在貂体内复制和致病力有关。James等人通过定点诱变ADV-G的位于ADV-G VP2的基因点534，使翻译组氨酸的残基变成翻译天冬氨酸的残基，使H534D能在体内复制，但仅能引起肝细胞的脂肪变性和脂肪聚集，而未出现典型的阿留申病变。有很多人报道，凡用带有核衣壳的疫苗给貂注射时，不仅不能使貂对ADMV产生抵抗力，反而会加重病情。而用带有非结构蛋白的NS1的疫苗给貂免疫时，能产生部分保护作用，这和ADV核衣壳结构与抗体产生的机理有关。ADMV病毒的趋向性仅仅是由于核衣壳的结构不同，所以可能是它决定了其致病力。

2.2 免疫病理学 阿留申病引起水貂死亡的直接原因是丙种球蛋白和病毒形成的可溶性复合物引起的超敏和自身免疫的病理性变化。当抗原轻度过量，形成较大复合物时，复合物浸入血管内皮而不能到达基底膜；当抗原中等过剩，即形成中等大小的免疫复合物[13]，这种可溶性的免疫复合物沉积于多种组织的基底膜；当抗原大量过剩，则形成小的复合物，这些小复合物可进入血管内皮的基底膜。这些抗体与病毒形成的复合物可损害网状内皮系统细胞的溶酶体，当溶酶体被释放时，则使固有细胞的细胞浆蛋白变性，因此他们即变成异体蛋白。这种产生的自体抗原可引起新的免疫复合物自身抗原抗体复合物。巨噬细胞、B细胞、T细胞、骨髓细胞都是ADMV的靶细胞。因此，巨噬细胞的补体、干扰素产生功能、抗原传递功能都有可能发生紊乱。T细胞亚族，抑制性T细胞有可能减少，使得宿主细胞被激活，与自身抗原发生免疫反应。另外，抑制性T细胞被持续刺激时，功能亢进，引起免疫低下，从而造成病毒进一步持续 。同时，CD8+ 细胞大量增生，产生的白介素5和γ-干扰素能刺激B淋巴细胞产生过量的免疫球蛋白，丙种球蛋白由正常的7～15g/ml增高到35～110g/ml，使病毒抗体免疫复合物大量生成。产生的抗体多为IgG 。由于肠上皮细胞中有IgG的Fc片段的受体，因此大量的病毒可能通过IgG介导进入肠上皮细胞，胆囊小导管也表现为上皮增生和浆细胞增多。增生的小导管上皮细胞由于细胞分化，而明显地畸形，并且有癌胚抗原阳性 。血液成分有明显的变化，除了丙种球蛋白明显增加外，血清总氮量、麝香草酚浊度、谷草转氨酶、谷丙转氨酶和淀粉酶均显著增高；而血液纤维蛋白，血小板和血清钙，白蛋白与球蛋白比降低，发生严重的贫血。贫血的原因是多方面的：如血管壁损害导致的出血，自身免疫性溶血，骨髓造血机能障碍，促红细胞生成素的减少，参与铁代谢的巨噬细胞也有可能数量减少或功能障碍等，血管内血液的部分凝固，使纤维蛋白和血小板从血中移除，因此血小板减少，凝血作用不良。在ADMV慢性感染的过程中，很可能出现了免疫耐受现象，使得感染ADMV的水貂对大量抗原的应答反应比未感染的水貂明显减弱，使针对ADMV的特异反应功能减弱。

目前为止，阿留申病还没有公认效果好的疫苗，也没有此病的特异疗法。用免疫抑制剂环磷酰胺治疗时，能在一定时间内，控制阿留申病病变的出现，但不能治愈。因此，唯一可行的方法是通过多次特异性检疫，淘汰病貂，净化貂场。

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1007-1733(2013)10-0091-02

2013–07–15）