针刺足三里、太冲穴对腹泻型肠易激综合征模型大鼠NPY和VIP的影响

刘美荣 肖瑞飞 左和宁

（湖南中医药大学第一附属医院，湖南 长沙 410007）

肠易激综合征（irritabel bowel snydrom，IBS）是一种以腹痛或腹部不适和排便习惯改变为特征的慢性功能性肠病，脑肠轴的变化和影响在IBS的发病中起重要作用，而脑肠肽作为一类具有神经递质和激素双重功能的小分子多肽，在调节内脏感觉、分泌和运动中起重要作用。课题组前期研究发现，针刺IBS-D模型大鼠足三里、太冲穴，能抑制回肠SS、VIP、P物质的分泌[1]。本实验在前期研究的基础上采用慢性温和应激联合孤养法加灌服番泻叶刺激大鼠造成IBS-D模型，通过观察针刺足三里、太冲穴对IBS-D大鼠腹泻指数及血液和回肠、直肠组织中VIP和NPY表达的影响，以期为临床上使用该针刺疗法治疗IBS-D提供充分的科学理论和实验依据。

1 实验材料

1.1 实验动物 健康SD大鼠50只，雌雄各半，体重200～250g，湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供（SCXK 2009-004）。

1.2 药物 匹维溴铵，50mg/片（solvay pharma公司，批号：611243）。番泻叶，购于湖南省药材公司，经湖南中医药大学药剂科鉴定为真品。

1.3 试剂与仪器 96T VIP、NPY酶联免疫试剂盒（上海沪峰生物科技有限公司）；分析天平（AY120）；低温离心机（湘仪实验设备有限公司）；低温冰箱（日本三洋）；三用电热恒温水温箱（上海跃进医疗器械厂）；酶标仪（美国伯腾仪器有限公司）；安迪牌无菌针灸针，0.25mm×25mm（贵州安迪药械有限公司，标准号：GB2024-94）；大鼠固定板（湖南中医药大学针灸实验室提供）。

2 实验方法

2.1 造模与分组 将大鼠随机分为空白组和造模组（1∶4），除空白组外，各组均予浓度为2g/mL的番泻叶水煎剂灌胃。灌胃0.5h后，用慢性温和束缚应激加孤养法刺激大鼠。每日随机对大鼠做以下1项处理，前后2d的处理不同：（1）用漆包线捆绑住大鼠的双后肢，使之不能正常活动，造成一定应激刺激， 每次持续 2h；（2） 夹尾 1min；（3）45℃高温环境5min；（4）4℃冰水游泳 3min；（5）昼夜颠倒；（6）禁食 24h；（7）电热恒温振荡水槽水平振荡（160次/min）45min。共刺激14d。[2]模型评价：检测腹泻指数，造模组与空白组比差异具有统计学意义证明模型成功。用Excel随机函数“Rand”将造模组随机意义模型组、捆绑组、针刺组、药物组，每组10只，单笼喂养。

2.2 药物制备及给药剂量 匹维溴铵片，研磨后用蒸馏水溶解，按大鼠与成人体表面积换算配制成浓度为0.3mg/mL的溶液，灌胃给药，给药体积10mL/kg。

2.3 针刺方法 造模结束后，空白组、模型组、捆绑组和针刺组灌胃生理盐水，药物组灌服匹维溴铵溶液。针刺组给予针刺相应穴位，捆绑组在与针刺组同等条件和相应时间点给予同样的捆绑刺激。针刺组每日施针1次，连续14d。穴位定位依据：参照《实验针灸学》“实验动物常用腧穴简表”定位[3]。“足三里”穴：后肢关节下腓骨头内侧5mm处；“太冲”穴：后肢足背第 1、第2趾骨间凹陷处。直刺5mm。捻转针法：固定大鼠四肢和头尾，将腧穴按常规皮肤消毒，施针者以左手食指或拇指切按准穴位，右手持针垂直刺入穴位内。得气后，用均匀的指力施捻转补泻手法。“足三里”穴行捻转补法：向心角度捻转，幅度 90°左右，频率 120次/min。“太冲”穴行捻转泻法：离心角度捻转，幅度 180°左右，频率60次/min。每穴操作 3min，留针30min。

2.4 观测指标及检测方法

2.4.1 腹泻指数测定 分别在造模前1d、治疗前1d、治疗后14d依照文献[4]方法测定5h内各组大鼠腹泻指数。

2.4.2 VIP和NPY的测定 在治疗第14d后，各组大鼠禁食但不禁水16h，腹腔注射0.3mL/100g新配制的10%水合氯醛。麻醉后腹主动脉插EDTA管采血，将分离出的血浆置于冰箱中-20℃保存备用。采血后，取大鼠回盲部以上约5cm处一小段回肠组织及肛门以上约2cm处一小段直肠组织，立即生理盐水冲洗干净，无菌滤纸吸干后精密称重，充分匀浆后低温离心，将分离出的上清液置于冰箱中-20℃保存备用。VIP和NPY的含量严格按照试剂盒说明书方法测定。

2.5 统计学方法 所有数据均用SPSS16.0软件分析处理，计量资料以（）表示，符合正态和方差齐性者，组内前后比较用配对t检验，多组比较采用单因素方差分析q检验，P＜0.05即认为差异有统计学意义，P＜0.01则认为差异有显著性统计学意义。方差不齐时采用Dunnett T3检验，如数据经转换后仍不满足方差分析条件，则采用秩和检验。

3 实验结果

3.1 腹泻指数的比较 造模前各组大鼠均无腹泻，腹泻指数为0。造模后模型组、捆绑组、针刺组、药物组腹泻指数明显升高，与空白组比较均有显著性差异（P＜0.01）。治疗后捆绑组与模型组比较无显著性差异（P＞0.05）；针刺组、药物组腹泻指数明显降低，与模型组比较均有显著性差异（P＜0.01）；针刺组与药物组比较无显著性差异（P ＞0.05）。结果见表1。

3.2 大鼠血浆、回肠组织、直肠组织中VIP和NPY含量比较与空白组比较，模型组大鼠血浆、回肠组织中VIP含量显著升高，NPY 含量显著降低（P＜0.05，P＜0.01）；直肠组织中NPY含量显著降低（P＜0.05）。治疗后捆绑组与模型组相比较各指标无显著性差异（P＞0.05）。与模型组比较，针刺组、药物组血浆、回肠组织中VIP含量显著降低，NPY含量显著升高（P＜0.05，P＜0.01）；直肠组织中 NPY 含量显著升高（P＜0.05）。结果见表2。

4 讨论

IBS在中医学中属 “泄泻”、“腹痛”范畴。中医认为七情失调可引起内脏功能发生紊乱，尤其对肝脾有很大的影响。肝郁脾虚是IBS发病的病理基础，《医方考》所云：“泻责之脾，痛责之肝，肝责之实，脾责之虚，脾虚肝实，故会痛泻。”因此肝郁脾虚是IBS最为多见的证型。针灸治疗IBS的优点在于无副作用，可避免因胃肠疾病而对药物吸收造成影响，减少消化道的负担。本实验研究比前期研究中增加了捆绑组，更客观地消除了捆绑过程对针刺的影响[1]。

IBS的病因和发病机制尚不完全清楚，长期以来认为是一种动力异常性疾病。但近年研究表明，感染、应激及神经免疫内分泌机制在IBS的发病中占有重要地位。胃肠肽类激素不仅作为神经递质发挥作用，而且也参与IBS发病的神经免疫机制[5]。VIP作为抑制性神经递质可抑制小肠环形括约肌的收缩，同时刺激胆汁和小肠水电解质的分泌。Ho等[6]发现，肠神经丛中约46%的u-阿片样受体具有VIP的免疫活性，同时有68%的肠神经丛VIP受体具有阿片样活性，表明VIP可能通过两种受体途径发挥其对肠道的调节作用。本研究结果显示：模型组大鼠血浆和回肠组织中VIP水平显著高于空白组；而直肠组织中VIP水平与空白组比较无显著性差异，提示VIP可能在不同环节参与IBS的发病。NPY是由36个氨基酸残基组成的多肽，广泛分布于哺乳动物中枢神经系统和肠道交感神经丛，可引起血管收缩，其含量与应激反应强度有关。肠神经丛中NPY可与肠黏膜下神经节中的周围性胆碱乙酰转移酶相结合，从而发挥作用[7]。

本研究结果显示，模型组肠黏膜NPY含量明显低于空白组。此结果与国外一些学者的研究结果相同，这可能提示NPY不足，不能发挥其抑制性作用，从而使模型组大鼠的消化道分泌反应提高，腹泻形成[8-9]。另外，本研究结果显示模型组大鼠血浆中NPY含量也明显低于空白组，此结果与 Magnus S等学者[10-11]的研究结果一致。通过治疗，针刺组和药物组大鼠血浆及肠组织中NPY含量明显升高。故认为NPY含量降低在IBS发病中有一定作用。

本实验仅选取有代表性的两种脑肠肽研究其与IBS的关系，今后应扩展脑肠肽的研究种类，并选取更广泛的标本，以进行较为全面细致深入的研究，为临床针刺治疗IBS-D提供可靠的实验依据。

表1 造模前、造模后、治疗后各组大鼠腹泻指数比较（）

表1 造模前、造模后、治疗后各组大鼠腹泻指数比较（）

注：与同时期空白组比较，**P＜0.01；与同时期模型组比较，▲▲P＜0.01。

组别 动物数（只） 造模前 造模后 治疗后空白组100.00±0.000.00±0.00 0.00±0.00模型组 10 0.00±0.00 1.07±0.13** 0.89±0.21捆绑组 10 0.00±0.00 1.08±0.15** 0.95±0.19针刺组 10 0.00±0.00 1.06±0.11** 0.18±0.17▲▲药物组 10 0.00±0.00 1.07±0.12** 0.17±0.20▲▲

表2 治疗后各组大鼠血浆、回肠组织、直肠组织中脑肠肽含量比较（）

表2 治疗后各组大鼠血浆、回肠组织、直肠组织中脑肠肽含量比较（）

注：与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。

组别 动物数（只）空白组 10血浆VIP（ng/L） NPY（ng/L） VIP（ng/g）95.819±2.775 83.374±1.751 73.047±2.342回肠组织NPY（ng/g）77.263±0.847直肠组织VIP（ng/g） NPY（ng/g）193.781±4.757 156.776±2.899模型组 10捆绑组 10 117.113±3.437 70.571±1.380 96.508±2.073 60.645±1.344 183.722±6.688132.662±3.509针刺组 10 96.812±3.197▲ 81.447±1.517▲ 74.039±2.337▲▲ 71.892±1.327▲ 178.056±3.583 153.334±2.185▲药物组 10 96.081±2.973▲ 81.010±1.739▲ 75.682±2.249▲▲ 71.724±0.984▲ 193.648±4.875 152.500±1.805▲115.074±4.168*70.109±1.287* 95.611±2.154**60.152±1.183**189.668±4.931 132.286±2.345*

[1]刘美荣，肖瑞飞，彭芝配，等.针刺“足三里”“太冲”穴对腹泻型肠易激综合征大鼠胃肠激素的影响.针刺研究，2012，37（5）：363

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