精制冠心滴丸定性定量方法的研究

张 慧 裴志东姜 欢 栾 阳

辽宁中医药大学，辽宁 大连 116600

精制冠心滴丸定性定量方法的研究

张 慧 裴志东*姜 欢 栾 阳

辽宁中医药大学，辽宁 大连 116600

目的：建立精制冠心滴丸的定性定量方法。方法：采用TLC法对方中丹参进行定性鉴别，同时采用HPLC法测定制剂中芍药苷的含量。色谱柱为Agilent TC－C18（4.6mm×250mm，5μm），流动相为0.1%磷酸溶液：乙腈（87：13），检测波长为230nm，柱温30℃。结果：定性鉴别薄层色谱特征明显；HPLC测定质量浓度在0.3648～0.8512μg范围内呈良好的线性关系（r＝0.9995），平均回收率为99.74%，RSD 1.53%（n＝6）。结论：所建质量标准可用于制剂的质量控制。

精制冠心滴丸；薄层色谱；高效液相色谱；芍药苷

精制冠心滴丸是由丹参、赤芍、川芎、红花、降香5味中药组成。具有活血化瘀等功效。用于瘀血内停所致的胸痹，症见胸闷、心前区刺痛，冠心病见上述证候者。本品是在其片剂的基础上改变剂型制成滴丸剂，为控制制剂的质量，本实验对原有片剂的质量标准进行了提高，建立了丹参的TLC定性方法及芍药苷的HPLC定量方法，现分述如下：

1 仪器与试药

Agilent1260高效液相色谱仪；AS3120A超声波清洗器；薄层层析硅胶G（中国青岛海洋化工集团公司出品）；芍药苷对照品（批号110736－201035）、丹参酮ⅡA（批号110752－200511）、丹参对照药材（批号120923－200610），均为中国食品药品检定研究院提供；精制冠心滴丸自制；甲醇、乙腈为色谱纯，其它试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 丹参的薄层鉴别 取本品粉末2.0g，加乙醚5mL，超声处理5min，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作为供试品溶液。另取丹参对照药材粉末1.0g，同法制成对照药材溶液；再取丹参酮IIA对照品，加乙酸乙酯制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液。再取除去丹参外的其它药材，按滴丸制备工艺及供试品制备方法制成丹参阴性液。照《中国药典》2010版一部附录VIB薄层色谱法试验［1］，吸取上述4种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷－乙酸乙酯（6：1）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中。在与对照药材相应位置显相同颜色斑点，在与对照品相应位置上显相同暗红色斑点，阴性液无干扰。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱为Agilent TC－C18 C18（200× 4.6mm，5um）；流动相为0.1%磷酸溶液∶乙腈（87∶13）；检测波长：230nm；流速：1.0ml/min。柱温：30℃；进样量10μL。

2.2.2 溶液的制备 取本品粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，称定重量，超声处理20min，放冷，再精密称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，制成供试品溶液。精密称取芍药苷对照品6mg，置10mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，再精密量取上述溶液1mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成对照品溶液。取除去赤芍后处方中其它药材，照上述供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

2.2.3 专属性试验 取供试品溶液、对照品溶液及阴性对照溶液，分别注入液相色谱仪，绘制液相色谱图，由色谱图提示，在对照品色谱相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，阴性液在此峰位无吸收，表明测定芍药苷的含量无干扰，方法专属性良好。见图1。

2.2.4 线性关系考察 精密量取芍药苷对照品溶液（0.608g ·L）0.6、0.8、1.0、1.2、1.4mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10μL溶液，注入液相色谱仪，测定色谱峰面积，以进样浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，经线性回归，回归方程为：Y＝49504.91X＋887226.34，相关系数为r＝0.9990。结果芍药苷进样量在0.3648～0.8512μg范围内线性关系良好。

2.2.5 稳定性试验 取本品粉末约0.5g，精密称定，制备供试液，精密量取同一供试液，分别在0、3、6、9、12小时间隔，测定色谱峰面积。结果提示，供试液制备后12小时内测定，色谱峰面积无明显变化，RSD为1.63%，在此时间内，待测组分化学性质稳定。

2.2.6 中间精密度试验 取本品粉末0.5g，共计6份，分别由三个实验人员，分别在不同日期、不同仪器上进样10μL，测定样品色谱峰面积，计算含量。结果显示，中间精密度的RSD为1.93%，符合规定。

2.2.7 重复性试验 取本品粉末0.5g，共计6份，制备供试品溶液，分别进样10μL，测定峰面积，计算含量，考察重复性。结果显示，重复性的RSD为0.74%，符合规定。

2.2.8 加样回收率试验 分别取已知含量（2.655mg·g）的供试品溶液0.25 g共计6份，分别置25mL容量瓶中，分别加入对照品溶液（0.608mg/ml）1.25mL，按“2.2.2供试品溶液的制备方法”制备，分别精密吸取10μL，注入液相色谱仪，测定色谱峰面积，计算回收率，测定结果见表1。结果显示：本方法回收率在98.72%～101.50%之间，符合有关规定。

2.2.9 样品含量测定 取三批精制冠心滴丸，研细，按“2.2.2溶液的制备”方法制备供试品溶液和对照品溶液，并分别进样10μL，测定芍药苷的峰面积。按外标法计算含量，结果三批样品的含量分别是2.922、2.846、2.862mg·g。

表1 回收率试验结果

3 讨论

3.1 在薄层鉴别中，曾参考《中国药典》2010年版一部［1］，对方中降香、红花进行TCL法鉴别，结果存在阴性干扰问题，因此未建立降香、红花的TLC鉴别方法。

3.2 在含量测定中，曾采用流动相乙腈－水－磷酸（14∶86∶0.1）［2］、0.1%磷酸溶液：乙腈（80：20）、0.05 mol/L磷酸二氢钾∶甲醇（60∶40）［3］，结果分离效果欠佳，因此选择本文中流动相。

3.3 对含量测定的检测波长进行了考察。取芍药苷对照品加甲醇制成每1mL含20μg的溶液，在200－400nm的紫外波长范围内扫描。结果显示，对照品在230nm下有最大吸收，为此本品的含量测定的检测波长确定为230nm。

［1］中国药典.一部［S］.2010：213；141.

［2］黄道秋，贺钢民，李柏群，等.芩术四物汤中黄芩苷和芍药苷的含量测定［J］.成都中医药大学学报，2012，35（3）：45－47.

［3］谢清春，吕竹芬，陈燕忠，等.补肺活血胶囊中芍药苷的含量测定［J］.2012，35（8）：1335－1336.

表1 加样回收试验测量结果（n＝6）

2.9 样品测定 按供试液的制备及检测方法，测定3批清感穿心莲软胶囊中脱水穿心莲内酯含量（mg/粒）分别为1.46、1.37、1.52。

3 讨论

3.1 对脱水穿心莲内酯对照品溶液进行紫外扫描，结果其在254nm处有最大吸收，故确定检测波长为254nm。参照文献［1，2］脱水穿心莲内酯含量测定方法，以甲醇－水为流动相，考察多个比例，最后确定甲醇－水（62∶38）的比例较为适合。

3.2 采用超声处理30min、加热回流1h、索氏提取2h进行提取方法考察，结果三者提取结果相差不大，但超声处理更简便、快捷，故采用超声处理法。采用甲醇、50%甲醇、无水乙醇作提取溶剂进行考察，用甲醇提取所得含量比高，且杂质较少，故采用甲醇作为提取溶剂。以超声处理15min、30min、45min，进行提取时间考察，超声处理15min，测得结果较低，超声处理30min、45min，两者无明显差别，故超声处理时间定为30min。

参考文献

［1］张静，琚小龙，李治坤.HPLC法测定穿心莲软胶囊中脱水穿心莲内酯的含量［J］.安徽医药，2003，7（6）：453－454.

［2］田军，陆宇.HPLC测定消炎利胆软胶囊中脱水穿心莲内酯的含量［J］.中成药，2006，28（3）：451－452.

（收稿日期：2013.01.26）

Study on the Quality and Quantity Methods of Jingzhi Ganxin Dripping Pills

ZHANG Hui，PEI Zhi-dong，JIANG Huan，LUAN Yang
（The Liaoning Universitiy of Chinese Traditional Medicine，Dalian 116600，China）

Objective：To establish the methods for the quantification and quantitation of Jingzhi Ganxin dripping pills.Method：Salviae Miltiorrhizae radix was identified by TLC.The content of paeoniflorin was determined by HPLC.HPLC method was performed on a Agilent TC－C18（4.6mm×250mm，5μm）column with a mobile phase of 0.1%phosphoric acid solution－acetonitrile（87：13）.The wavelength of detector was 230 nm and the column temperature was set at 30℃.Result：Characteristics of identification were very obviously.The linear range of paeoniflorin was 0.3648～0.8512μg（r＝0.9995）with an average recovery of 99.74%（RSD1.53%，n＝6）.Conclusion：The method can be used for the quality and quantity control of Jingzhi Ganxin dripping pills.

Jingzhi Ganxin dripping pills；TLC；HPLC；Paeoniflorin

R284.1

A

1007－8517（2013）06－0019－02

2013.02.05）

张慧（1970－），女（汉族），吉林通化人，副教授，硕士研究生导师，博士/博士后，研究方向：中药品质评价。