简易“PNH三项”检查对贫血类型鉴别的应用

肖作淼，余路虎，李志红，李文华，李江环，陈先春，唐金凤，肖九长

(赣州市人民医院检验科,江西赣州341000)

简易“PNH三项”检查对贫血类型鉴别的应用

肖作淼，余路虎，李志红，李文华，李江环，陈先春，唐金凤，肖九长

(赣州市人民医院检验科,江西赣州341000)

目的研究简化的酸溶血试验、蔗糖溶血试验和尿含铁血黄素试验即PNH三项联合应用对阵发性睡眠性血红蛋白尿症(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria,PNH)的检出效果。方法对4例PNH、3例AA-PNH综合征患者、106例其他贫血患者及20例正常对照者进行简易PNH三项试验，并统计各项试验在疾病中的阳性检出率。结果4例PNH和3例AAPNH患者PNH三项试验均为阳性，其他贫血患者中，酸溶血试验均为阴性，而蔗糖血和尿含铁血黄素试验单项目有不同程度的检出。结论简易PNH三项联合检查对PNH和AA-PNH有良好检出率且特异性强，但操作过程比传统方法更加简便易行，值得基层实验室推广。

酸溶血试验；蔗糖水溶血试验；尿含铁血黄素；阵发性睡眠性血红蛋白尿症

阵发性睡眠性血红蛋白尿(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria,PNH)是一种后天获得的造血干细胞基因突变的克隆性疾病，临床主要表现有血管内溶血、静脉栓塞形成、骨髓造血功能衰竭等[1]。酸溶血试验(即Ham试验)、蔗糖溶血试验和尿含铁血黄素(即Rous试验)三个检验项目，简称PNH三项，是针对阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)诊断的检验项目。为观察PNH三项检查对不同贫血疾病的鉴别诊断意义，我们对PNH、再生障碍性贫血(AA)-PNH综合征，缺铁性贫血(IDA)、6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PD)缺乏症、骨髓增生异常综合征(MDS)、巨幼细胞性贫血(MA)等不同类型的贫血病人进行PNH三项检查，同时对标本采集、试剂贮备和实验步骤进行简化，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象为2010年3月至2012年9月113例赣州市人民医院门诊及住院的贫血和多系减少患者。男性48例，女性65例，中位年龄48.9(12～78)岁。观察组各种疾病诊断标准均符合张之南的《血液病诊断及疗效标准》[2]，其中经CD55、CD59和FLAER检查的PNH患者4例，确诊AA 5～25个月的AA-PNH综合征3例，经铁染色及血清铁蛋白检查的IDA患者20例、经骨髓形态及血清叶酸和VitB12检查的MA患者12例，经骨髓形态和病理活检检查的MDS11例、经Hb电泳或地中海基因检查的地中海贫血患者2例、经G6PD酶检查的G6PD酶缺乏症14例、经Coombs试验检查的AIHA18例。其他病例10例，包括脾亢4例、慢性病贫血3例及不明原因溶贫、骨髓纤维化、骨转移癌各1例，以及经血尿常规及肝肾功能检查均正常的非血液科患者的正常人对照20例，男女各10例。

1.2 试剂

1.2.1 0.2mmol/L盐酸溶液4℃保存。

1.2.2 92.4g/L蔗糖溶液分装(4.5ml/人份)，-20℃保存[3]。

1.2.3 Rous试验试剂2g亚铁氰化钾加100ml蒸馏水溶解后，加入3ml浓盐酸并加蒸馏水至200ml，充分混匀后立即分装(4ml/人份)，-20℃保存[4]。

1.2.4 0.9%生理盐水室温保存。

1.3 仪器普通离心机和37℃水浴箱。

1.4 方法

1.4.1 标本采集静脉血取患者静脉血6ml，其中EDTA抗凝管1ml、3.8%枸橼酸钠抗凝至2ml、余血加至普通管分离血清用。同时送检30ml新鲜尿液。

1.4.2 酸溶血试验参照文献[5]进行。操作步骤取EDTA血0.5ml用生理盐水洗涤3次后配成配50%RBC悬液，然后按表1进行。加塞置37℃水浴1h后，1000r/min离心2min观察结果。结果判断阴性：A管与B管均不溶血或标本本身溶血者则两

管溶血程度一致；阳性：A管不溶血而B管溶血，或标本本身溶血者则B管比A管溶血程度更严重。

表1 Ham试验操作步骤(单位：ml)

1.4.3 蔗糖溶血试验参照文献[3]进行。首先将蔗糖溶液置37℃水浴箱中10min，然后按表2进行。加塞后轻轻颠倒混匀，A管37℃水浴0.5h后，1000r/ min离心2min观察结果。结果判断阴性：A管上清液无溶血现象；阳性：A管上清液有溶血现象而B管无或标本本身溶血者则A管比B管上清液溶血程度更严重。

表2 蔗糖溶血试验操作步骤(单位：ml)

1.4.4 尿Rous试验将试剂置37℃水浴箱中5min，操作步骤及结果判断参照文献[3]进行。

2 结果

113例贫血患者中Ham阳性者7例(6.2%),蔗糖溶血试验阳性者11例(9.7%),Rous试验阳性者22例(19.5%)。PNH三项全部阳性者见于PNH和AA-PNH患者,对照组三项均为阴性。蔗糖溶血试验阳性者在MDS、G6PD、AIHA和其他组溶血患者有检出；尿Rous在MDS、G6PD和AIHA缺乏症等亦有不同程度的检出率。详见表3。

3 讨论

Ham试验对PNH的诊断特异性强,敏感性为60%-86%,是临床上确证PNH的主要依据[6],但仅凭这一项试验确诊PNH是不够的，因为约有10%的PNH患者Ham试验始终阴性[7]。《全国临床检验操作规程》中的Ham试验(6管法)操作强度大[8],存在以下几方面不足：(1)标本采集难：制备脱纤维血标本容易引起标本凝固或溶血。(2)找正常对照者难：要求与患者同血型或AB型正常对照者，导致试验难于进行。(3)实验步骤繁琐，故在现今日常工作任务繁重的检验科严重受限。直接用EDTA抗凝血替代脱纤维血，用自身血清替代正常人血清，可大大简化标本采集过程并明显提高实验成功率。在113病例中有7例Ham试验阳性者(其中1例PNH为弱阳性)，显示了应用自身血清的2管法Ham试验对PNH及AA-PNH诊断有同样的特异性，但操作步骤比6管法大大简化，易在日常工作中进行。11例蔗糖溶血试验阳性者中除PNH和AA-PNH外，在G6PD缺乏症、MDS和AIHA病例中均有检出，但阳性率均在10%以内。Rous试验的阳性率检出率最高，为19.5%(22/113)。由此得出糖水溶血试验和Rous试验在贫血病人中敏感性更高而特异性不如Ham试验。

表3 PNH三项检查结果

PNH发病率不高，但因临床表现多样化，可单独表现为贫血(1系减少)或多系减少，故临床上PNH与AA、MDS及AIHA等疾病需彼此进行鉴别诊断。据文献报道11.1%~28.6%的AA患者可演变为PNH[9]，故有必要对AA患者进行定期PNH筛查。本组PNH患者分别有1月至7年的不明贫血原因的病史，亦侧面反映临床中PNH病人易误诊与漏诊。目前，随着流式细胞仪应用，检测糖基磷脂酰肌醇(GPI)缺陷细胞已成为诊断PNH最特异、最敏感且可以定量的最佳方法[1，9]，但昂贵的检测费用使流式检查难以广泛应用。近年来发现GPI缺陷细胞不仅见于PNH病人，许多贫血性疾病都有不同程度的检出[9],故有必要结合传统检查项目来相互印证。Ham试验、蔗糖水溶血试验及Rous

试验三项中连续两次阳性，排除AIHA即可确诊PNH[10]，因此传统项目在临床上仍有重要的地位。但传统方法步骤繁琐，加上病例不多，目前在二级以下医院开展亦不普及，笔者在前人的工作基础上，结合自身的工作经验，从标本采集到试剂准备(将Rous试验和蔗糖溶血试剂配制后-20℃保存，使用前解冻，至少稳定6个月)进行简化，使PNH三项操作更加简便实用，三项联合可大大提高PNH的检出率，减少漏诊与误诊，加上费用低廉，临床上乐意接受，故值得基层实验室推广。

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[2]张之南,沈悌.血液病诊断及疗效标准[M].第3版.北京：科学出版社,2008:192-195.

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R556.6+4

A

1674-1129(2013)01-0069-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.01.025