LA检测隐球菌荚膜多糖抗原在隐球菌性脑膜炎诊断中的应用

刘珍琼，熊国亮，辛茶香

(江西省胸科医院检验科，江西南昌330006)

LA检测隐球菌荚膜多糖抗原在隐球菌性脑膜炎诊断中的应用

刘珍琼，熊国亮，辛茶香

(江西省胸科医院检验科，江西南昌330006)

目的探讨乳胶凝集试验(LA)在隐球菌性脑膜炎中的早期诊断价值。方法收集56例确诊的隐球菌性脑膜炎患者和25例结核性脑膜炎、病毒性脑膜炎患者的脑脊液，采用乳胶凝集试验检测隐球菌荚膜多糖抗原，并与真菌培养和直接镜检方法相比较，评价其诊断的灵敏度和特异度。结果乳胶凝集试验、真菌培养和直接镜检3种方法诊断的灵敏度分别为91.1%、69.6%和73.2%，乳胶凝集试验特异度分别为96.0%、100%、100%。结论乳胶凝集试验检测隐球菌荚膜多糖抗原可作为隐球菌性脑膜炎的早期诊断方法。

乳胶疑集试验；隐球菌性脑膜炎；隐球菌荚膜多糖抗原

对于新型隐球菌性脑膜炎，传统的诊断方法主要是镜检和培养，但在发病的早期镜检可呈正常，而培养方法耗时，且阳性率低，故在一定程度上延误该病的诊治。因此，寻找一种快速、灵敏、特异的早期检测新型隐球菌感染的方法极其重要。本研究应用乳胶疑集试验(LA)检测新型隐球菌荚膜多糖抗原,探讨其对隐球菌性脑膜炎的早期诊断价值。

1 材料与方法

1.1 病例来源56例病例来自2012年1月至2013年4月本院神经内科住院患者,根据病史、临床症状、体征、实验室检查和病原学检查，以及抗生素和抗结核药物治疗无效,改用抗真菌药物治疗有效,确诊为隐球菌性脑膜炎者入选。其中男35例，女21例，年龄23～71岁。所有标本的留取均在用抗真菌药物之前。对照组25例同样来自本院神经内科，确诊为结核性脑膜炎或病毒性脑膜炎患者入选，其中男14例，女11例，年龄20～70岁。

1.2 仪器和试剂真菌鉴定试剂条API-20CAUX(法国梅里埃生物有限公司)；隐球菌抗原乳胶凝集试剂：采用美国Immuno-Mycologies有限公司生产的隐球菌抗原乳胶检测系统(LATEX-CRYTOCOCCUSANTIGEN DETECTION SYSTEM)；革兰染液由贝索公司提供;BACTEC9120全自动血培养仪为美国BD公司产品。

1.3 方法

1.3.1 镜检墨汁染色:墨汁染色选用印度墨汁或国产优质墨汁，将脑脊液(CSF)标本离心后取沉淀物直接染色镜检，在黑色背景下可见到透亮的菌体和宽厚荚膜。革兰染色:取CSF标本离心后沉淀物行革兰染色后镜检，找到蓝色的菌体和无色的荚膜为阳性。

1.3.2 培养和鉴定将无菌留取的脑脊液注入血培养瓶中,于BACTEC9120全自动血培养仪内监测，报警阳性的培养瓶立即转种沙保罗培养基，生长并分纯后采用真菌鉴定试剂条AI-20CAUX鉴定。

1.3.3 乳胶凝集试验常规方法收集无菌样本，1000×g离心15min以确保去除所有白细胞和微粒体，小心吸取脑脊液加入无菌容器(有浑浊或絮状沉淀的标本弃去)，100℃孵育脑脊液5min备用。在环状玻片的分离环中分别加入25μl隐球菌抗原阳性对照、阴性对照和经热处理的脑脊液，然后在每个环中加入25μl隐球菌乳胶，用分离的涂药棒彻底混合环中物质，室温下手动旋转5min后立即观察结果。

1.3.4 结果判断在无光背景中立即读数并划分等级从阴性到4+，阳性对照应该2+或更大一些，阴性对照应该低于1+，具体划分依据如下：阴性(-):无可见团块的均匀颗粒悬浮液；1+：乳状背景下小但明显块状；2+：轻微团块背景下小但明显块状；3+：清晰背景下大的和小的块；4+：非常清晰背景下大块状。

2 结果

56例患者CSF检查结果：镜检阳性41例，镜检包括革兰染色和墨汁染色；真菌培养阳性39例；乳胶凝集试验阳性53例；乳胶凝集试验、真菌培养和直接镜检3种方法诊断的阳性率分别为91.1%、69.6%和73.2%。对照组26例镜检和培养结果均为阴性，而乳胶凝集试验中有1例为阳性，特异度为96%。3种检验方法结果见表1。

表1 乳胶凝集试验、真菌培养和直接镜检检测结果比较

3 讨论

近年来随着临床上广谱抗生素、免疫抑制剂、糖皮质激素、肿瘤放化疗的广泛应用和近年来AIDS患者的不断增多，隐球菌性脑膜炎患者明显增多。大多数隐球菌性脑膜炎患者病情重、病死率高，且其临床症状不典型，早期常误诊,不少患者被误当炎症和结核治疗,部分病例当脑肿瘤手术后才确诊。尤其是当前临床常用的隐球菌脑膜炎的诊断方法敏感性低，极易延误治疗时机，导致病死率及致残率增加。大量临床资料也表明，隐球菌性脑膜炎的疗效和转归很大程度上取决于早期明确诊断[1,2]。缺乏敏感而又特异的病原学检测手段是隐球菌性脑膜炎易误诊的一个重要原因。

当前大多医院检测新型隐球菌方法为墨汁染色、革兰染色和真菌培养。脑脊液涂片墨汁染色镜检，操作简单、迅速，是诊断隐球菌性脑膜炎直接而快速的诊断方法，但在发病的初期，镜检可呈正常，需要反复多次检查才能找到隐球菌；真菌培养方法耗时,且阳性率较低。故在一定程度上延误该病的诊治。因此,寻找一种快速、灵敏、特异的早期检测深部隐球菌感染的方法尤为重要。乳胶凝集试验是针对新型隐球菌荚膜多糖抗原的免疫学检测,在早期诊断中优于传统的培养法和镜检法。本研究数据显示乳胶凝集试验阳性率较高，真菌培养和镜检阳性率相对较低。本试验结果表明利用乳胶凝集试验检测脑脊液中隐球菌荚膜多糖抗原的阳性率为91.1%，与Antionori等[3]报道脑脊液中隐球菌抗原检测的阳性率为94.1%基本相符。但要注意的是，高浓度隐球菌抗原所致的钩带现象和体内未知非特异性蛋白对隐球菌抗原的掩盖效应,能够引起假阴性；同时有文献报道，RF阳性血清和TB患者血清可引起隐球菌荚膜多糖抗原乳胶凝集试验假阳性[4]。

综上所述，乳胶凝集试验通过检测隐球菌荚膜多糖抗原对隐球菌性脑膜炎的诊断有重要临床应用价值，优于目前常用的真菌培养和镜检方法，可作为隐球菌性脑膜炎的早期诊断方法。

[1]卢洪洲,曹天高,周颖杰,等.乳胶凝集试验对新生隐球菌性脑膜炎诊断及治疗的意义[J].中华传染病杂志,2005,24(3):209-211.

[2]王冯滨,欧强,励峰,等.新生隐球菌性脑膜炎25例临床分析[J].中国感染与化疗杂志,2010,10(1):41-43.

[3]Antinori S,Radice A,Galimberti L,et al.The role of cryptococcal antigen assay in diagnosis and monitoring of cryptococcalmeningitis[J].JClin Microbiol,2005,43(11):5828-9.

[4]王露霞,刘海英,石凌波,等.隐球菌荚膜多糖抗原乳胶凝集试验干扰因素的探讨[J].临床检验杂志,2010,28(2):159.

Application of latex agglutination test for detecting cryptoceccal capsular polysaccharide antigen in diagnosis of patients w ith cryptoceccal meningitis.

LIU Zhenqiong,XIONG Guoliang,XIN Chaxiang.Department of Clinical Laboratories，Jiangxi Chest Hospital，Nanchang 330006，China

ObjectiveTo exp lore the early diagnostic value of capsular polysaccharide antigens detected by latex agglutination test(LA)in the diagnosis of cryptococcalmeningitis.MethodsThe cryptococcal capsular polysaccha antigenswere tested by LA in the CSF from 56 patientswith cryptococcalmeningitis,and 25 patients with tuberculousmeningitis or viralmeningitis.The sensitivity and specificity were compared with fungal culturemethod and directmicroscopy examination.ResultsThe detection sensitivity of latex agglutination,fungal culture and directmicroscopy examination for diagnosis of cryptococcosis was 91.1%,69.6%and 73.2%,respectively;and the specificity was 96.0%,100%and 100%,respectively.ConclusionDetection of cryptococcal antigens by latex agglutination test could be considered as a test for early diagnosis of cryptococcalmeningitis.

Latex agglutination test；Cryptoceccalmeningitis；Cryptoceccal capsular polysaccharide antigen

R446.62,R519.4,R379.5

A

1674-1129(2013)05-0446-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.015

刘珍琼，女，1974年1月生，硕士，副主任技师，主要从事临床检验工作。