江西地区人乳头瘤病毒感染分型检测的研究

方丽娟，袁水斌，王刚，魏小文

(江西华星医学检验中心，江西南昌330096)

·调查报告·

江西地区人乳头瘤病毒感染分型检测的研究

方丽娟，袁水斌，王刚，魏小文

(江西华星医学检验中心，江西南昌330096)

目的探讨核酸分子快速导流杂交基因芯片技术(HybriMax)在人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染分型检测中的应用，了解江西地区女性的HPV感染型别状况。方法采用HybriMax技术对江西省内各地区送检的2060例宫颈脱落细胞样本进行了HPV-DNA的检测和HPV的分型。结果在2060例宫颈标本中21种型别均被检出，HPV阳性率36.6% (754/2060)，在检测的型别中主要为单一高危型HPV，阳性率为29.3%(603/2060)，在HPV高危各型别的分布上，分布最多的型别为HPV52(8.20%、169/2060)，其余检测率较高HPV型别依次是，HPV16(7.43%)、HPV58(6.75%)、HPV33(3.74%)、HPV53 (2.82%)等；在低危HPV各型别的分布上，分布最多的型别是HPV11(4.22%、87/2060)和HPV6(3.16%、65/2060)。结论研究显示江西女性人群中感染HPV型别主要是HPV52型，HPV18型不是江西地区的的优势HPV型别，各型别分布与山西和深圳地区的分布较为一致，与欧美国家的分布不同，推测HPV各型别分布具有一定的地域特征。

江西；人乳头瘤病毒；基因分型

流行病学和基础研究已经证实人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染是宫颈上皮内瘤变(cervical intraep ithelial neoplasia,CIN)和宫颈癌的主要病因[1]，而且不同HPV亚型的感染其致病性和后果也有差异[2]。HPV感染的检测已成为筛查和预防宫颈癌的关键问题之一[3]。本研究用核酸分子快速导流杂交基因芯片分型技术(HybriMax)对2060例女性进行了HPV感染的分型检测研究，报道如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象选择2011年7月到2012年6月标本2060例，年龄19～65岁，以26～45岁居多，占74.9%。

1.2 试剂和仪器DNA提取试剂盒(凯普生物化学有限公司提供)，HybriMax医用核酸分子快速杂交仪和HPV扩增分型检测试剂盒(凯普生物化学有限公司提供)，ABI7300基因扩增仪(伯乐公司，美国)。

1.3 研究方法采用HybriMax技术检测21种HPV亚型，基本原理是先将标本中HPV病毒基因的DNA进行基因扩增，然后利用核酸分子快速导流杂交技术法，使目的分子导流穿过固定有DNA探针的低密度基因芯片薄膜上，而发生快速杂交。

实验步骤：样本HPV DNA提取，PCR扩增，核酸分子快速导流杂交，结果判读，按芯片上HPV亚型分布的相应着色点判断。21种HPV分为高危型和低危型两类[4]，高危型(high-risk types,HR-HPV) 16种，包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68和CP8304，低危型(low-risk types,LR-HPV)5种HPV6、11、42、43、44，有两型或两型以上属多型感染。

1.4 统计方法对HPV阳性率及各高危型别阳性率进行统计，卡方检验(即χ2检验)。对多型感染者，各亚型的阳性率重复计算。

2 结果

在2060例送检标本中21种HPV型别均被检出，HPV阳性标本有754例，HPV阳性率36.6%，HPV阳性患者中主要为单一高危型HPV，占总检出HPV样品数的79.97%(603/754)，单独低危型HPV占HPV阳性样品总数的11.01%(83/754)，高低危复合感染占HPV样品阳性总数的9.02%(68/ 754)。详见表1、表2。

表1 2060例标本HPV总阳性率及高危、低危及复合型HPV的阳性率

3 讨论

HPV感染亚型在人群中的分布有近100种亚型，约40种与肛门生殖道感染有关，根据在宫颈癌发生中的危险性不同，分为HR-HPV和LR-

HPV两大类[4]，而且不同HPV亚型的感染其致病性和后果也有差异[2]。因而，不同地区和人群HPV亚型感染的分布资料，是宫颈上皮内瘤变和宫颈癌防治策略的基础。国内乔友林教授研究组2004年在山西省和广东省的深圳市所作的HPV感染的流行病学调查结果显示：国内感染率位于前三位的高危HPV型别有HPV16、58、52，HPV58和HPV52是中国相对其他地区的优势HPV型别。从我们目前的检测结果看，分布最多的型别为HPV52(8.20%、169/2060)，其余检测率较高HPV型别依次是，HPV16、HPV58、HPV33、HPV53等，排名前三的型别相同，但在欧美人群中分布的HPV型别第二位的是HPV18。由此我们推测我国女性人群中HPV型别分布与欧美人群具有不同，并具有一定的地域特性。同时我们认为，江西地区人乳头瘤病毒感染型别如若单独检测HPV16，18将存在很大的漏检率。江西2060例随诊女性中HPV的总感染率达36.6%(754/2060)，由于研究对象均为主动到医院就诊的患者，不是自然人群普查，故目前得到的各型别的感染率不能代表该型别在自然人群中的感染率。但是仍然可以从目前检测结果来大概分析各型别的分布状况。宫颈筛查需选择将江西人群主要感染的型别都包括在内的检测方法，同时随访需确认是否为同一亚型反复感染，或是HPV多重感染，通过HybriMax可以很好地实现HPV的分型检测，从而为有效预防宫颈癌的发生提供很好的技术平台[5，6]。

表2 HPV各检出型别的感染率

[1]Ault KA.Epidemiology and natural history of human papillomavirus infections in the female genital tract[J].Infect Dis Obstet Gynecol，2006,2006(14),40470.

[2]Clifford GM,Smith JS,Plummer M,et al.Human papillomavirus types in invasive cervical cancer worldwide:a meta-analysis[J].Br J Cancer,2003,88(1):63-73.

[3]Berman NR.Cervical cancer screening today.The role of HPV DNA testing[J].Adv Nurse Pract，2006,14(1):24-29.

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[5]王长奇,王康,陈燕萍,等.HPV多重感染与宫颈病变关系的分析[J].实验与检验医学,2012,30(2):166-168.

[6]张志勇,施桥发.人乳头瘤病毒与宫颈癌关系的研究进展[J].实验与检验医学,2012,30(3):252-256.

R737.33

A

1674-1129(2013)02-0181-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.02.032