云南地区2008～2011年部分猪场CSF、PCV-2、PRRS、PR流行情况调查与分析

■ 宋春莲 李文贵 尹革芬 谭丽勤 王艳芬 李 箐 刘 洁 舒相华

（1.云南农业大学动物科学技术学院，云南昆明 650201；2.云南蒙自县动物疫病预防控制中心，云南蒙自 661100；3.云南普洱市思茅区动物卫生监督所，云南普洱 66500；4.云南呈贡县洛龙街道办事处，云南呈贡 650500)

猪伪狂犬病毒(Pseudorabies，PR)、猪瘟病毒(Classical swine fever，CSF)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)，猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus type 2,PCV-2)是危害我国养猪业最重要的传染病病原。他们在猪场呈不同形式的混合感染，使猪场疫病更加复杂，引起猪群呼吸道和繁殖障碍等疾病，且发病率呈逐年上升趋势，这些病的广泛流行和蔓延已给国内的养猪业造成很大的损失。要对这些疫病进行有效防控，首先要能准确而快速的病原检测，PCR检测方法具有较高的实用价值。为了跟踪云南地区猪CSF、PCV-2、PRRS、PR的流行病情况和规律，为研究预防这些病提供保障，对云南地区部分猪群2008～2011年送检的这四种疫病进行了统计分析。

1 材料与方法

1.1 组织病料

病料采自云南昆明、曲靖、保山、玉溪、红河、曲靖、楚雄、大理、临沧、文山等地区291个猪场，4年共计979份。

1.2 试剂及仪器

病毒核酸DNA/RNA抽提试剂盒购自Invitro⁃gen公司，反转录试剂盒、Taq DNA聚合酶、dNTP、2xGC buffer购自宝生物工程(大连)有限公司，DNA标准分子量DL 2 000、2xPCR Mix购自TaKaRas公司。根据国内外发表的PRRSV、PCV-2、CSFV和PRV毒株序列，用DNASTAR.Lasergene.v7.1、Prim⁃er Premier 5、Oligo6等分子生物学分析软件设计引物，引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。主要仪器由云南农业大学农业生物多样性应用技术国家工程中心提供，PTC-150MiniCy⁃clerTMPCR仪（MJ Reseach）。

1.3 组织中总DNA、RNA的提取

采集的组织反复冻融3次，然后4℃条件下12 000 r/min离心15 min，将上清转移到新的离心管中，混均，室温放置10 min，然后4℃条件下12 000 r/min离心15 min；按病毒核酸DNA/RNA抽提试剂盒操作说明提取核酸样品，于-70℃保存备用。

1.4 病毒核酸多重PCR扩增

取上述抽提的核酸样品12 μl，按操作说明加入相应试剂，按各种病毒核酸PCR扩增条件进行扩增。

各反应结束后取5 μl PCR产物在1%的琼脂糖凝胶上电泳，在凝胶成像系统上观察，扩增出与预期片段大小基本一致的片段则判定为阳性。

2 结果

2.1 4年979份病料中CSF、PCV-2、PRRS和PR，4种病病原检测结果。

各年度CSF、PR、PRRS、PCV-2的检测结果：2008年检测 216份，阳性率分别为 20.83%、25.00%、46.30%、48.61%；2009年检测57份，阳性率分别为40.35%、63.16%、87.72%、49.12%；2010年检测 174份，阳性率分别为42.53%、43.10%、51.72%、56.89%。2011年检测数532份，阳性率分别为16.35%、15.04%、37.78%、25.00%(见表1)。

表1 2008～2011年4种病检测情况

2.2 979个样品中检出率最高的是PRRSV，平均检出率为55.88%，其次是PCV-2，平均检出率为44.91%，CSFV和PRV的平均检出率分别为20.02%、36.57%(见表 1)。

2.3 4年共对291个养殖场户进行了CSF、PCV-2、PRRS、PR的病原学检测，每个场都有四种病感染，其中检测出混合感染的场户有111个。感染形式有二重、三重感染，另有少量的四重感染。二重感染以CSF+PRRS最多，占15.24%，其次是PR+PRRS，占13.27%，CSF+PR占13.20%，CSF+PCV-2占10.32%；三重感染以CSF+PR+PRRS最多，占8.08%，其次是CSF+PR+PCV-2，占6.26%，PR+PRRS+PCV-2占5.58%，PR+PRRS+PCV-2占4.12%；四重感染以2008年混合感染最多，占4.63%，四年平均发病率2.98%(见表2、表3)。

表2 二重感染情况

表3 三重和四重感染情况

2.4 CSF、PCV-2、PRRS和PR 4种病2008～2011年4年的平均阳性率分别为30.02%、36.57%、55.88%、44.91%。单独感染占35.24%（348/979）；二重感染占 64.76%（634/979）；三重感染占 21.55%（211/979）；四重感染占2.66%（26/979）。

3 分析与讨论

3.1 检测结果显示，云南地区部分猪场发病猪只中PRRS检出率最高，与舒相华等2007年的检测结果相似，说明在云南地区猪群中PRRS一直是主要的致死疫病，与李吉达等报道国内其他地区发病情况相似。

3.2 这四种病的年度发病率差别很大。2008年PCV-2感染最为严重，2009年PRRS感染最为严重，2010年PCV-2感染最为严重，2011年PRRS感染最为严重。各疫病各年度发病率相差大，这表明这4种疫病在云南地区部分猪群中的感染比较严重，发生和流行规律变化最大，2008～2010年有逐年加重的趋势，2011年又下降，与宋建国等报道的甘肃省发病情况相似。他们以混合感染为主，占64.45%，高于舒相华，李维华等的报道，其中最主要的是二重感染CSF+PRRS，跟李吉达、舒相华等的报道相似。三重感染以CSF+PR+PRRS为主，应引起广大养殖场户和动物防疫部门的高度重视。

3.3 在这些发病猪场中，肥猪以呼吸道疾病症状感染形式为最多，种猪群以繁殖障碍为主，这可能是由于这4种疫病既是免疫抑制性疾病，又是繁殖障碍性疾病的原因，从检测结果看在云南要预防这些疫病的暴发，猪场必须重视他们的预防和监测，有条件的猪场要做好种公猪或整个种猪群CSF、PCV-2、PRRS、PR的净化工作，减少猪场经济损失。

（参考文献15篇，刊略，需者可函索）