荞麦蜂花粉多糖对肉仔鸡免疫功能、血脂及抗氧化能力的影响

■万顺康 张翠香 林春榕 左绍远 钱金栿

（1.大理学院基础医学院，云南大理 671000；2.大理学院药学院，云南大理 671000）

随着人们对畜禽产品质量要求的不断提高，对现代畜禽饲养业而言，不仅要提高畜禽的生产性能和肉质，更要注重生产安全的产品。因此，积极寻找、研制开发纯天然、无毒副作用、安全、无残留、功效显著的饲料添加剂成为目前畜禽饲料研究的重要课题。多糖是一类结构复杂的生物大分子物质，具有多种复杂而广泛的生物学活性。研究表明，不同来源的多糖具有增强机体免疫力、抗病毒、抗菌、抑菌、调节血脂及抗肿瘤、抗氧化等多种活性[1-2]。蜂花粉（bee pollen）为蜜蜂采集的植物雄蕊花药的粉状物质，含有丰富的营养成分及多种生物活性物质。多糖是蜂花粉的主要活性成分之一，越来越受到人们的重视，但主要集中在提取工艺研究及对于人类疾病治疗与预防方面的研究，对作为畜禽类饲料添加剂的研究较少[3-4]。而目前荞麦蜂花粉多糖作为禽类饲料添加剂的研究尚未见报道[5-6]。为使荞麦蜂花粉多糖应用于畜禽生产提供依据，本试验以肉仔鸡为试验对象，观察了荞麦蜂花粉多糖（polysaccharide of buckwheat bee pollen）对肉仔鸡生长性能、免疫功能、血脂及抗氧化能力的影响。

1 材料与方法

1.1 主要仪器

HH-W420/600恒温水浴箱（金坛市瑞华仪器有限公司）,AG 135电子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)，RE-52A型旋转蒸发仪（上海亚东生化仪器厂），FD-1型冷冻干燥机（北京博医康技术有限公司），UV2550型紫外可见分光光度计（日本岛津苏州仪器有限公司），TL5000bR低速大容量冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂），SHZ-3循环水多用真空泵（上海青浦沪西仪器厂），AU2700全自动生化分析仪（日本奥林巴斯公司产品）。

1.2 主要试剂

甘油三酯(TG)、总胆固醇(T-CHO)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)测定试剂盒，南京建成生物工程研究所产品，IgA、IgM、IgG 测定试剂盒（免疫比浊法），上海科华生物工程股份有限公司产品。其余试剂均为国产分析纯。荞麦蜂花粉，购自云南滇峰蜂业有限责任公司（批号：20110512）。

1.3 荞麦蜂花粉多糖

由本实验室制备。荞麦蜂花粉-60℃冰冻48 h，粉碎，过60目筛后，分别用石油醚、95%乙醇回流脱脂、脱色，过滤，滤渣用10倍原料体积（m/v）的蒸馏水75℃水浴抽提2次，每次6 h。合并滤液，减压浓缩至适当体积，加无水乙醇至醇体积分数为80%，4℃静置过夜，离心收集沉淀。用Seaveg法脱蛋白（三氯甲烷∶正丁醇=4∶1）至280 nm无明显紫外吸收峰，加无水乙醇至醇体积分数为80%醇沉，离心收集沉淀，依次用无水乙醇、乙醚、丙酮洗涤3次，冷冻干燥，得灰白色荞麦蜂花粉粗多糖。

1.4 试验设计与饲养管理

选择体重相近、健康的200羽 1日龄AA肉仔鸡，试验采用单因子设计，随机分成4组，每组5个重复，每个重复10羽。其中对照组饲喂基础日粮，试验1、2、3组分别在基础日粮中添加500.0、1 000.0、1 500.0 mg/kg的荞麦蜂花粉多糖。饲养试验期为42 d。试验前鸡舍严格消毒，试验组和对照组均采用双层笼养，自由采食，自由饮水，舍内温度、湿度、光照等遵循饲养管理规范，防疫按常规程序进行。

1.5 基础日粮

基础日粮是按NRC(1994)推荐的肉仔鸡营养需要配制的玉米-豆粕型基础日粮，基础日粮组成及营养水平见表1。

2 测定指标和方法

2.1 生长性能

试验期间每天记录上料量和剩料量，分别在每周末的早上08：00空腹称肉仔鸡的体质量，计算平均日增重、平均日采食量和料重比。

2.2 免疫器官指数

表1 日粮组成及营养水平

试验结束时，每组随机抽取4只鸡称空腹体重，颈部放血后屠宰，摘取脾脏、胸腺、法氏囊，剔除附着组织,用吸水纸拭去表面液体,准确称重，计算胸腺、脾脏和法氏囊指数。

免疫器官指数（g/kg）=器官重/活体重。

2.3 血清免疫球蛋白、血脂与抗氧化指标

试验至42日龄分别从每重复随机选取3只试验鸡,颈静脉采血,分离血清，于-80℃冰箱中保存，分别测定血清IgG、IgA、IgM、甘油三酯、总胆固醇及SOD、GSH-Px酶活性与MDA含量。

2.4 数据处理与分析

试验数据采用Excel软件整理，SPSS 13.0软件One-way ANOVA进行方差分析，用Duncan's法进行多重比较，试验数据用“平均数±标准差”表示。

3 结果与分析

3.1 荞麦蜂花粉多糖对肉仔鸡生长性能的影响（见表2）

表2 荞麦蜂花粉多糖对肉仔鸡生长性能的影响

由表2可知，与对照组相比，试验1、2、3组日均采食量、平均日增重分别提高了1.45%、1.89%、2.31%与2.29%、4.64%、5.43%，差异不显著（P＞0.05）。同时，料重比随荞麦蜂花粉多糖添加量的增加逐渐降低，但与对照组相比无明显差异（P＞0.05）。表明肉仔鸡饲料里添加荞麦蜂花粉多糖可提高日均采食量和平均日增重，降低料重比，但无显著影响。

3.2 荞麦蜂花粉多糖对肉仔鸡免疫器官指数的影响（见表3）

表3 荞麦蜂花粉多糖对肉仔鸡免疫器官指数的影响（g/kg）

由表3可知,与对照组相比，试验1、2和3组脾脏指数分别提高21.34%、31.18%、32.37%(P＜0.05)；胸腺指数分别提高17.63%、29.22%和30.48%(P＜0.05)；法氏囊指数分别提高6.90%、25.29%和28.74%，其中试验2、3组的法氏囊指数与对照组相比差异显著（P＜0.05），但试验1组与对照组相比则无明显差异（P＞0.05）。另外，试验2、3组之间在脾脏指数、胸腺指数和法氏囊指数上无显著差异(P＞0.05)。试验结果表明，基础日粮中添加荞麦蜂花粉多糖能显著提高肉鸡的免疫器官指数，从而提高肉鸡的免疫机能。

3.3 荞麦蜂花粉多糖对肉仔鸡血清免疫球蛋白和血脂的影响（见表4）

表4 荞麦蜂花粉多糖对肉仔鸡血清免疫球蛋白和血脂的影响

从表4可见，与对照组相比，各试验组均可促进肉仔鸡免疫球蛋白的增加。其中试验1、2、3组使IgG含量分别增加了13.59%、22.28%、34.42%，差异显著（P＜0.05）；试验2、3组使IgA、IgM 含量分别增加了34.15%、39.84%与16.10%、20.34%，差异显著（P＜0.05）；试验1组使IgA、IgM含量分别增加了8.94%、6.78%，差异不显著（P＞0.05）。同时，与对照组相比，试验2、3组使血清总胆固醇含量分别下降了14.54%、17.73%，差异显著（P＜0.05），而试验1组使血清总胆固醇含量降低了5.67%，与对照组相比则无明显差异（P＞0.05）。另外，试验1组甘油三酯比对照组提高2.90%，而试验2、3组能使甘油三酯含量分别下降0.72%、2.17%，但与对照组相比均无明显差异（P＞0.05）。

3.4 荞麦蜂花粉多糖对肉仔鸡血清抗氧化指标的影响(见表5)

表5 荞麦蜂花粉多糖对肉仔鸡血清抗氧化指标的影响

由表5可知，添加荞麦蜂花粉多糖后，血清SOD、GSH-Px活性明显升高。与对照组相比，差异显著(P＜0.05)。试验1、2、3组SOD和GSH-Px活性比对照组分别提高了26.49%、34.29%、37.49%与15.62%、24.94%、34.54%。另外，与对照组相比，试验1、2、3组还使血清MDA含量分别降低了12.48%、14.93%与16.82%，差异均显著（P＜0.05）。表明荞麦蜂花粉多糖具有提高肉仔鸡抗氧化能力的作用。

4 讨论

4.1 荞麦蜂花粉多糖对肉仔鸡生长性能的影响

在基础日粮中添加不同水平荞麦蜂花粉多糖后，试验1、2、3组日均采食量、平均日增重分别比对照组提高了1.45%、1.89%、2.31%与2.29%、4.64%、5.43%，但差异不显著（P＞0.05）。同时，料重比随荞麦蜂花粉多糖添加量的增加逐渐降低，但与对照组相比无明显差异（P＞0.05）。结果与相关报道类似[7-8]。

4.2 荞麦蜂花粉多糖对肉仔鸡免疫功能的影响

脾脏、胸腺和法氏囊是禽类的重要免疫器官，禽类的许多传染病往往会侵害这3个免疫器官，使其肿大或萎缩。免疫器官指数是免疫器官重与活体重的比值，它是衡量动物机体免疫水平的重要指标。脾脏是机体最大的外周免疫器官，是机体细胞免疫和体液免疫的中心，是产生致敏淋巴细胞和抗体的重要场所。胸腺参与机体的非特异性免疫功能，对细胞免疫以及体液免疫都有重要的调节作用。法氏囊是禽类特有的中枢免疫器官，是B细胞分化成熟的场所。另外，血清IgG、IgA、IgM 3种免疫球蛋白是参与体液免疫的主要抗体，三者在血清中的含量是判断动物体液免疫功能的重要指标之一[9-10]。本试验结果表明，在饲料中添加500.0、1 000.0、1 500.0 mg/kg的荞麦蜂花粉多糖，可显著提高肉仔鸡脾脏指数与胸腺指数(P＜0.05)，1 000.0、1 500.0 mg/kg的添加水平还使法氏囊指数明显升高(P＜0.05)。试验同时观察到，饲料中添加荞麦蜂花粉多糖，可使血清IgG的含量显著升高(P＜0.05)，1 000.0、1 500.0 mg/kg的添加水平使IgA、IgM含量明显升高（P＜0.05）。上述结果表明，饲料中添加荞麦蜂花粉多糖能显著增强肉仔鸡的免疫功能，从而增强肉仔鸡抵抗疾病的能力。

4.3 荞麦蜂花粉多糖对肉仔鸡血脂与抗氧化能力的影响

胆固醇与甘油三酯是血脂的主要成分。尤其是胆固醇，是动脉粥样硬化形成的主要原因,血液中长期过高的胆固醇及血管壁上过多的脂类容易被自由基氧化,形成脂质过氧化物质,在血管壁上沉积,从而导致动脉粥样硬化。动脉粥样硬化可导致动物心、脑、血管疾病。本试验结果表明，荞麦蜂花粉多糖对肉仔鸡血清甘油三酯含量无明显影响（P＞0.05），但1 000.0与1 500.0 mg/kg的荞麦蜂花粉多糖添加水平可明显降低肉仔鸡血清总胆固醇含量（P＜0.05），提示荞麦蜂花粉多糖可能具有预防肉仔鸡动脉粥样硬化的作用。

自由基是机体正常或异常生化反应的产物,它的生成会对包括免疫细胞在内的所有细胞造成严重毒害,不仅损害细胞膜的结构,而且影响蛋白质功能、DNA结构和细胞内能量代谢。而超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）是体内最重要的抗氧化酶类，在机体抗氧化、抗自由基损伤中起着重要作用，能有效地清除体内产生的自由基，从而维持体内自由基产生和清除的动态平衡，减少对实质器官的病理损害，提高机体的抗病力，对机体具有较好的保护作用。MDA是体内自由基反应的终末产物，其含量可间接反映体内自由基的多少及反应的强度，也可以间接反映组织损伤程度。本试验表明，在饲料中添加500.0、1 000.0、1 500.0 mg/kg的荞麦蜂花粉多糖，可使血清SOD与GSH-Px活性显著提高，MDA含量明显降低，且与对照组相比差异显著（P＜0.05）。表明荞麦蜂花粉多糖具有较好的清除自由基能力，保护机体免受过氧化损伤的作用。

5 小结

日粮中添加500.0、1 000.0、1 500.0 mg/kg的荞麦蜂花粉多糖能提高肉仔鸡免疫器官指数和血清免疫球蛋白含量，促进肉仔鸡免疫功能，可降低血清胆固醇含量，并提高肉仔鸡的抗氧化能力。提示荞麦蜂花粉多糖可能是一种较好的肉仔鸡免疫增强剂与抗氧化剂。