李艳艳
解放军第309医院 检验科,北京 100091
作为活性最强的磺酰脲类化合物,甲磺隆(sulfometuron methyl,SM)对结核分支杆菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)范围为3~8 mg/L,高于部分二线抗结核药的体外活性,但其对其他临床致病菌抑菌活性的研究,目前尚且少见。本文通过测试甲磺隆抗菌活性,评价其作为研发抗生素先导化合物的可能性。
1 材料和方法
1.1 菌株的留取 本实验菌株为我科微生物室2011年6-12月鉴定并保存的临床分离菌株,革兰阴性菌和真菌菌株于甘油菌种保存管中,革兰阳性菌株于稀释血液菌种保存管中,放置于-20℃冰箱中保存。
1.2 菌液的制备 实验前2 d将冰冻保存的实验菌株取出,室温下静置,待其溶解后接种于血平板培养基上培养2 d,观察各菌株生长良好,将各菌株用氯化钠溶液配置成0.5麦氏比浊单位的标准菌悬液。
1.3 甲磺隆原液的制备 实验前将甲磺隆干粉、DMSO溶剂从冰箱中取出,放置至室温后,用分析天平准确称取12.0 mg甲磺隆干粉于洁净干燥的试管中,并用微量加样枪准确吸取1.2 ml DMSO溶剂加入试管中,混匀、充分溶解,配置成10 mg/ml的SM化合物原液。
1.4 含药培养基的制备 实验前将水解酪蛋白胨(murller hinton,MH)培养基干粉及沙保罗琼脂粉取出,平衡至室温。准确称取MH干粉380.0 mg,35份,沙保罗琼脂粉650.0 mg,5份,于锥形瓶中,分别用10 ml蒸馏水溶解; 化合物按照80 mg/L,40 mg/L,20 mg/L,10 mg/L的浓度倍比稀释,无化合物的DMSO作为阴性对照,溶于培养基中。
1.5 接种 分别将已配制好的菌悬液用无菌棉签接种于各种浓度的一个对应培养基上: 鲍曼、铜绿、肺克、大肠、金葡、表葡、肠球菌接种于MH培养基,白假丝接种于沙保罗培养基。标记好菌种、浓度。
1.6 培养 将接种有鲍曼、铜绿、肺克、大肠、金葡、表葡、肠球菌的培养基于25℃温箱中培养,接种有白假丝酵母菌的培养基于15℃温箱中培养。2 d后观察结果并记录。重复上述步骤10次,每次选用相同菌种的不同菌株,记录并统计结果。
2 结果 80 mg/L的甲磺隆不能抑制铜绿、肺克、大肠、金葡、表葡、肠球菌的生长,但能很好抑制鲍曼菌的生长,而20 mg/L的甲磺隆能很好抑制白假丝酵母菌的生长。
3 讨论 本实验致力于对甲磺隆抗菌活性的进一步研究,只选择了几种典型且耐药严重的临床常见菌株,结果显示,甲磺隆能很好地抑制鲍曼、白念菌的生长(对鲍曼菌的MIC值为80 mg/L,对白念菌的MIC值为20 mg/L),其实验菌株均为院内感染重要菌种,耐药情况非常严重。本实验证明,SM对真菌、细菌均具抑菌活性,这对今后的研究具有很好的指导作用。本实验中,对于未表现出抑菌活性的菌株,其原因有可能是其他支链氨基酸合成途径对乙酰羧酸合成酶(aceto hydroxy acid synthase,AHAS)酶的替代作用,也有可能此结构的磺酰脲类化合物不能有效抑制其AHAS酶活性,亦或其他原因,有待进一步研究。下一步可以对SM进行化学修饰,期待能得到更具抑菌活性的衍生物。