非小细胞肺癌组织及癌旁组织VEGF、P16蛋白的表达及意义

程宏忠 王 平 彭 浩 吴建强 (云南省第一人民医院胸心外科，云南 昆明 650032)

非小细胞肺癌组织及癌旁组织VEGF、P16蛋白的表达及意义

程宏忠 王 平 彭 浩 吴建强 (云南省第一人民医院胸心外科，云南 昆明 650032)

目的分析P16蛋白、血管内皮生长因子(VEGF)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织及癌旁组织的表达情况。方法应用免疫组化SP法检测NSCLC组织65例，距肿瘤边缘5 cm以上癌旁正常组织20例中VEGF、P16蛋白的表达。结果①VEGF在肺癌组织的阳性表达率72.3%，明显高于癌旁组织的阳性表达率35.0%(P＜0.05);P16蛋白在肺癌组织的阳性表达率47.7%，明显低于癌旁组织的阳性表达率85.0%(P＜0.05)。②P16蛋白的表达与肺癌淋巴结转移、临床分期、分化程度有关，而与病理类型无关;VEGF的表达与临床分析、淋巴结转移有关。NSCLC组织中P16蛋白与VEGF之间呈负相关(rs=－0.537，P＜0.01)。结论NSCLC组织中存在VEGF与P16蛋白表达的异常，且两者表达呈负相关，推测NSCLC的发病与血管生成及P16表达异常有关。

非小细胞肺癌;癌旁组织;P16蛋白;VEGF

肺癌的发病是逐步演进的过程，并涉及众多基因及其产物、细胞分子的异常表达。p16基因是近年来研究发现的抑癌基因，在人类50%肿瘤细胞株中存在p16基因的缺失和突变，其表达产物P16蛋白是作用于细胞分裂周期的关键因子之一〔1〕。血管内皮生长因子(VEGF)是促进血管生长的最有效的因子，其异常表达与肿瘤的发生有密切的关系。本研究旨在分析P16蛋白、VEGF在非小细胞肺癌(NSCLC)组织及癌旁组织的表达情况，探讨其在NSCLC发生发展中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料 选自我院2008年1月至2011年12月手术切除的NSCLC组织标本织65例。所有患者术前均未进行放疗和化疗，术后经病理诊断证实，其中男38例，女27例，年龄60～78〔平均(68.2±4.6)〕岁。根据WHO分型标准〔2〕分为:鳞癌35例，腺癌30例;高分化19例，中分化26例，低分化20例。根据国际抗癌联盟(UICC)标准分为:Ⅰ级28例，Ⅱ级21例，Ⅲ级16例。同时切取距肿瘤组织5 cm以上的癌旁组织20例作为对照。所有标本均经10%中性甲醛固定，石蜡包埋，5μm厚连续切片，并经高年资病理医师核实诊断。

1.2 方法 免疫组化染色采用SP法，主要试剂VEGF及P16蛋白单抗、S-P试剂盒、二氨基联苯胺(DAB)显色液和乙二胺四乙酸(EDTA)修复液，由北京中杉金桥生物技术有限公司生产。所有切片常规脱蜡、水化、流水冲洗、加抗原修复液，微波炉间断加热进行抗原热修复，山羊血清封闭，滴加一抗、二抗及工作液，DAB显色，复染、封片，用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作阴性对照，阳性对照采用北京中杉金桥生物技术有限公司提供的阳性切片。

1.3 结果判定〔3〕根据显色程度判断:标本无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。根据阳性细胞在观察细胞中所占比例:阳性细胞数≤10%为1分;11% ～50%为2分;51%～75%为3分;＞75%为4分。再按这两项指标的总积分将结果分成4级:0～3分为(－);4～5分为(+);6～7分为(++)，8分以上为(+++);其中+～+++为阳性。

1.4 统计学方法 应用SPSS17.0软件，计数资料组间比较采用χ2检验，采用Spearman等级相关分析。

2 结果

2.1 VEGF在肺癌组织及癌旁组织的表达 VEGF在肺癌组织的阳性表达率明显高于癌旁组织(P＜0.05)。见表1。

表1 VEGF在肺癌组织及癌旁组织的表达(n)

2.2 P16蛋白在肺癌组织及癌旁组织的表达 P16蛋白在肺癌组织的阳性表达率明显低于癌旁组织(P＜0.05)。见表2。

表2 P16蛋白在肺癌组织及癌旁组织的表达(n)

2.3 VEGF和P16蛋白在肺癌中表达与临床病理参数的关系

不同病理类型肺癌P16蛋白阳性表达率比较无统计学差异(P＞0.05);不同临床分期、分化程度及淋巴结转移与P16蛋白阳性表达有关(P＜0.05)。不同临床分期及淋巴结转移与VEGF阳性表达有关(P＜0.05);不同病理类型、分化程度病例VEGF阳性表达率比较无统计学差异(P＞0.05)。NSCLC组织中P16蛋白与VEGF阳性率呈负相关(rs=－0.537，P＜0.01)。见表3。

表3 VEGF和P16蛋白在肺癌中表达与临床病理参数的关系〔n(%)〕

3 讨论

肿瘤细胞具有自我更新的不断增殖的能力，而肿瘤这种持续性的生长及其转移都需要新生血管的形成。在众多的影响肿瘤新生血管形成的因素中，VEGF是最有效的促进血管形成的因子之一〔4〕。VEGF可以与血管内皮细胞特异性结合，促进血管内皮细胞增殖，增强血管通透性，通过激活蛋白酶促进血管内皮细胞外基质降解，从而为新生血管生长及延伸提供基础。研究证实，恶性肿瘤的发生、发展和转移均伴随着VEGF的异常改变。Stefanoup等〔5〕研究发现，77.3%的NSCLC患者出现VEGF高表达，其表达情况与黏附因子呈正相关。高晓来〔6〕应用ELISA检测发现NSCLC患者VEGF水平明显高于健康对照组。本研究应用免疫组化法检测NSCLC组织，结果发现VEGF在肺癌组织的阳性表达率明显高于癌旁组织，与Stefanoup等〔5〕的报道基本一致。

P16蛋白是p16基因表达的产物。p16基因是近年来新发现的一种抑癌基因，也是细胞周期中的基本基因〔7〕，直接参与细胞周期的调控，包括肺癌、肾癌、皮肤癌、卵巢癌、乳腺癌和脑肿瘤等大约50%的肿瘤细胞株均存在p16基因的突变或缺失〔8〕。P16蛋白可以直接对细胞周期进行调控，最终阻止细胞进入分裂期，而一旦p16基因突变，P16蛋白则不能有效地抑制细胞周期，导致细胞进入恶性增殖。本研究中P16蛋白在肺癌组织的阳性表达率明显低于癌旁组织，说明肺癌组织中可能存在p16基因的突变或缺失，因此其产物P16蛋白的表达明显降低。证实了p16基因的突变与肺癌的发生和发展有密切的关系。

本研究还发现，P16蛋白的表达与肺癌淋巴结转移、临床分期和分化程度有关，而与病理类型无关;VEGF的表达与临床分期、淋巴结转移有关;NSCLC组织中P16蛋白与VEGF呈负相关。笔者推测NSCLC的发病与血管生成及P16表达异常有关，且P16蛋白和VEGF在肿瘤发生和发展中可能存在协同作用，其具体机制有待于进一步研究。

1 张菡菡，祝 博，孔丽君.CD44 v6和P16表达与非小细胞肺癌生物学行为关系〔J〕.齐鲁医学杂志，2009;24(5):408-10.

2 陈 岗，廖美琳.肺癌WHO新病理分类的临床意义〔J〕.中国肿瘤，2004;13(10):613-5.

3 许良中，杨文涛.免疫组织化学反应结果的判定标准〔J〕.中国癌症杂志，1996;6(4):229-31.

4 许学亮，邵红玲.STAT5、VEGF和EGFR在非小细胞肺癌中表达的相关性研究〔J〕.中国免疫学杂志，2012;28(6):555-6.

5 Stefanoup D，Goussia AC，Arkoumani E，et al.Expression of vascular endothelial growth factor and the adhesion moleculor E-cadherin in nonsmall cell lung cancer〔J〕.Anticancer Res，2003;23(6):4715-20.

6 高晓来.肺癌患者血清Survivin和VEGF的表达及其临床意义〔J〕.临床肺科杂志，2012;17(1):109-10.

7 张晨策，魏煜程，沈 毅.非小细胞肺癌组织P53、P16和Bcl-2蛋白表达及意义〔J〕.齐鲁医学杂志，2011;26(4):302-3.

8 张永明，李 辉，杨文锋，等.非小细胞肺癌组织中Cyclin D1、p16蛋白的表达变化及意义〔J〕.山东医药，2012;52(14):58-60.

R73

A

1005-9202(2013)12-2761-02;

10.3969/j.issn.1005-9202.2013.12.012

程宏忠(1964-)，副主任医师，副教授，主要从事胸部肿瘤的诊断与治疗研究。

〔2012-07-22收稿 2013-01-22修回〕

(编辑 袁左鸣)