化学发光法和酶联免疫吸附试验检测免疫儿童乙型肝炎表面抗体的结果分析

黄军林，黄夏声，罗炬(广西陆川县疾病预防控制中心，广西陆川537700)

化学发光法(CLIA法)是20世纪80年代发展起来的，继荧光免疫(FIA)、酶免疫(ELA)、发射免疫(RIA)测定以后的新一代标记免疫技术，因其具有简便易行、标记物制备非常容易、稳定性高、标本用量少、便于实现完全自动化和不污染环境等优点，特别是能在较短的时间内得到实验结果，因此，受到检验医学工作者的广泛关注。为研究CLIA法与ELISA法检测HBsAb的效果，笔者采用两种方法同时测定150份已接种乙型肝炎(乙肝)疫苗儿童的血清，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 标本来源:根据广西壮族自治区疾病预防控制中心2012年的工作要求开展全区儿童免疫规划血清学调查，在本次调查中我县根据全区统一调查方案，于2012年5月28日～2012年6月1日在本县东、西、南、北、中五个方位随机抽取五个行政村，每个行政村抽取6个年龄组(1岁～、2岁～、3岁～、4岁～、5岁～、6岁～组)，每个年龄组抽取5名常住儿童(当地居住三个月以上)。如果调查对象不足，可到邻近的行政村里搜寻。每个乡镇共抽取30例儿童，共调查150例儿童。共抽取150例儿童的血液标本。

1.2 仪器和试剂:CLIA法使用雅培i2000化学发光分析仪，试剂及质控品均为美国雅培公司产品。ELISA法使用anthos2010型仪酶标仪，由郑州安图生物技术有限公司生产，anthosfluido型洗板机由郑州安图生物技术有限公司生产，试剂由上海荣盛生物药业有限公司提供，按说明书使用。

1.3 结果判断:CLIA法:HBsAb＜10 mIU/ml为阴性，HBsAb≥10 mIU/ml为阳性(B)。ELISA法:COV=阴性对照平均OD值×2.1，标本OD值≥COV为阳性，标本OD值＜COV为阴性。阴性对照平均OD值低于0.05作0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。

1.4 统计学处理:采用SPSS11.5统计软件包进行统计学分析，率的比较采用χ2检验。

2 结果

2.1 CLIA法和ELISA法检测HBsAb结果:150份已接种乙肝疫苗儿童的血清中，CLIA法检测结果阳性111份，阳性率为74.00%，阴性39份;ELISA法检测结果阳性84份，阳性率为56.00%，阴性64份。化学发光法和ELISA法检测HBsAb的阳性率比较差异有统计学意义(χ2=10.68，P=0.001，P＜0.01)。CLIA法检测结果阳性而ELISA法检测结果阴性的样品有27份，CLIA法检测结果阴性而ELISA法检测结果阳性的样品有2份。两种方法同时检测HBsAb结果见表1。

2.2 CLIA法和ELISA法的符合率:两种方法检测结果共同阳性有84份，共同阴性有37份。总符合率=(共同阳性+共同阴性)/总例数=(84+37)/150=80.67%。见表1。

表1 CLIA法和ELISA法检测HBsAb结果

3 讨论

CLIA 法和ELISA法同时检测HBsAb结果显示，两种方法检测结果有较高的一致性，但CLIA法检测结果阳性率高于ELISA法，差异有统计学意义(P＜0.05)，提示CLIA法的敏感性高于ELISA法，与丁贤等报道CLIA法的精密度和敏感度高于ELISA法一致[1]。

HBsAb是由乙肝表面抗原(HBsAg)刺激或乙肝疫苗注射后，经过6～23周免疫产生。常见于乙肝疫苗注射后、乙肝病毒(HBV)既往感染者、急性乙肝恢复期。在HBsAg消失前后或其后1～2个月出现，可以持续4～5年。HBsAb是HBV血清标志物中，唯一具有保护性的抗体。一般来说，注射3针乙肝疫苗后1个月，90%～95%的人可以检测到HBsAb;第2年仍保持在这一水平;第3年降到74%左右，HBsAb含量也下降。血清中HBsAb浓度越高，保护力就越强。目前认为，HB-sAb具有保护作用的最低含量是10IU/L。但多数专家建议以100IU/L作为具有保护作用的最低浓度，因为对乙肝疫苗反应不佳者，在此浓度以下有可能发生HBV的无症状感染。有研究发现，尽管随着时间的推移，疫苗应答者HBsAb浓度下降到保护水平以下(＜10 mU/ml)或消失，但由于体内存在“回忆反应”，再次感染HBV后，HBsAb浓度可在2周内明显升高，从而形成机体抵抗HBV感染的发生。目前，HBsAb的测定多数采用ELISA法，该法是将HBsAg包被于固相载体，加入待检样品和酶标记的HBsAg，加底物显色，用酶标仪测定结果。但ELISA法存在精密度差、灵敏度低，只能通过显色反应得到阴性或阳性结果，不能定量检测、不能及时提醒低浓度HBsAb人群再次接受疫苗免疫等缺点。CLIA法是一种以发光物质代替放射性核素或酶作为标记物直接标记抗体或抗原的一类免疫分析法。常用的发光剂为丫啶酯类。这类标记物在化学结构上有产生发光的特殊基团，在发光免疫分析过程中直接参与发光反应。这类物质没有本底发光，在反应中能用于检测低浓度或微量浓度的样品。干扰作用也较少且标记和偶联后稳定、理化性质和免疫特性不改变。是一类发光效率很高的发光剂。可与抗体(或抗原)结合，生成具有化学发光活性强，免疫反应特异性高的标记抗体。CLIA法采用自动化仪器分析，其操作的智能化程度高，敏感度高、特异性强，精密度和准确性均可高于RIA，特别是检测灵活性高，快速简便，检测试剂稳定并易于进行室内与室间质量控制，线性范围宽[2]，并能做到定量检测，为接种乙肝疫苗后的机体免疫应答状况的评估提供可靠的依据。可作为乙型肝炎疫苗接种后HBsAb浓度动态观察的量化指标，有助于及时、准确地了解乙肝疫苗免疫后的效果，能为血清低浓度HBsAb的儿童是否再进行疫苗加强接种提供一个有效的判断依据[3]。

综上所述，ELISA法检测程序比较简单，费用较低，容易推广，但不能定量检测、不能及时提醒低浓度HBsAb人群再次接受疫苗免疫等缺点。CLIA法采用自动化仪器分析，设备、试剂比较昂贵，目前在基层还不能广泛使用，但其操作智能化程度高、线性范围宽、敏感度高、特异性强、快速。因此，CLIA法是一种具有广阔发展前景的非放射标记的定量测定技术。

[1] 丁贤，刘树业，周淑芬，等.两种方法检测血清HBsAg和抗－HBs的比较[J].肝脏，2011，16(4):324.

[2] 王小明，刘平.乙型肝炎病毒表面抗体化学发光定量检测方法的建立[J].实验与检验医学，2010，28(6):597.

[3] 鲍俊杰，杨红玲，郭彩娇，等.酶联免疫吸附测定法与化学发光微粒子免疫分析法检测广州地区儿童HBsAb结果分析[J].中西医结合肝病杂志，2009，19(1):44.