HPLC法测定三种药品中的维生素D2的含量分析

舒琬清 杨晓东 曾晓丹

（怀化市第一人民医院，湖南 怀化 418000）

HPLC法测定三种药品中的维生素D2的含量分析

舒琬清 杨晓东 曾晓丹

（怀化市第一人民医院，湖南 怀化 418000）

目的探讨HPLC法测定三种药品中维生素D2的含量。方法在色谱柱为250mm×4.6mm，流动相为正己烷—正戊醇97∶3的混合溶液，流速为1.0mL/min，柱温为40℃，检测波长为254nm，进样量为20µL的色谱条件下对药品中的维生素D2含量进行测定，并探讨含量分析方法的精密度、重复性、稳定性等情况。结果得到维生素D2的线性回归方程为：C＝0.0142A-0.0060（r=0.9999），说明使用高效液相色谱法对维生素D2含量进行测量，在0.04423～1.091µg/mL的浓度范围内具有良好的线性关系；得出三种浓度维生素D2对照品溶液的峰面积相对标准偏差RSD为0.95%、1.2%、2.1%，说明使用高效色相色谱法对维生素D2含量进行测量具有良好的精密度；钙镁D片中维生素D2含量为0.1331µg/mL，达到标示量的102.21%；钙佳锌口服液中维生素D2含量为0.1331µg/mL，达到标示量的102.21%；乳酸钙口服液中维生素D2含量为0.1247µg/mL，达到标示量的100.21%。结论使用高效液相色谱法对三种药品中维生素D2含量的测定具有良好的精密度、重复性、稳定性，可用于含有维生素D2的药品制剂质量控制。

HPLC；钙镁D片；钙佳锌口服液；乳酸钙口服液；维生素D2；含量

维生素D2在药品中一般仅起到增效的作用，其药品含量比较少，并且极易受到空气、光线的影响[1]，所以对于药品中维生素D2的检验一直为药品检验工作的难点，为探讨HPLC法测定三种药品中维生素D2的含量。本文在色谱柱为250mm×4.6mm，流动相为正己烷-正戊醇97∶3的混合溶液，流速为1.0mL/min，柱温为40℃，检测波长为254nm，进样量为20µL的色谱条件下对药品中的维生素D2含量进行测定，并探讨含量分析方法的精密度、重复性、稳定性等情况。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 仪器与试药

1.1.1 试验仪器

高效液相色谱仪（型号为HP1100），自动进样器，电子天平，离心机，漩涡混合器四元梯度泵，柱温箱，在线脱气机，二极管检测器，电子分析天平（SM-92），色谱工作站。

1.1.2 试药

供试品为市场销售的钙镁D片，钙佳锌口服液，乳酸钙口服液三种药品，对照品为维生素D2对照品，正己烷、异辛烷、正戊醇分析纯溶液。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱为250mm×4.6mm，流动相为正己烷-正戊醇97∶3的混合溶液，流速为1.0mL/min，柱温为40℃，检测波长为254nm，进样量为20µL。

1.2.2 对照品溶液

精密称取维生素D2对照品20mg，放置在100mL棕色容量瓶中，加入流动相进行溶解，稀释到刻度线后摇匀，作为对照品储备液，再精密称取储备液0.5mL放置到10mL棕色容量瓶中[2]，加入流动相到刻度线，即得对照品溶液，溶液浓度为0.1µg/mL。

1.2.3 供试品溶液

钙镁D片供试品溶液制备：取钙镁D片粉末0.7g，放置到10mL棕色量瓶中，加入适量异辛烷溶液，在漩涡混合器上进行混合震动10min[3]，取适量混合液放置在3mL离心管中，高速离心即成钙镁D片供试品溶液；钙佳锌口服液：取25mL钙佳锌口服液放置在分液漏斗中，加入氯化钠饱和溶液25mL，用乙醚溶液进行3次萃取，将乙醚层进行混合，用无水硫酸钠去除乙醚层水分，过滤后用乙醚清洗无水硫酸钠2遍，将乙醚溶液合并放入棕色圆底烧瓶中，除尽乙醚，将残渣用乙醇溶液，放置在棕色容量瓶中即得钙佳锌口服液供试品溶液[4]；乳酸钙口服液：取25mL乳酸钙口服液放置在分液漏斗中，加入氯化钠饱和溶液25mL，用乙醚溶液进行3次萃取，将乙醚层进行混合，用无水硫酸钠去除乙醚层水分，过滤后用乙醚清洗无水硫酸钠两遍，将乙醚溶液合并放入棕色圆底烧瓶中，除尽乙醚，将残渣用乙醇溶液溶解，放置在棕色容量瓶中即得乳酸钙口服液供试品溶液[5]。

1.2.4 线性关系考察

取对照品储备液（浓度为2.174µg/mL）0.2mL、0.5mL、0.8mL、2.0mL、5.0mL，放置在10mL棕色容量品中，制的浓度不同的维生素D2标准品溶液，在“2.1色谱条件”下进样20µL，每份标准品溶液分别进样三次，用维生素D2峰面积作为横坐标，标准品浓度为纵坐标进行线性关系考察。

1.2.5 精密度试验

取三个浓度的维生素D2对照品溶液在“2.1色谱条件”下进样20µL，每份标准品溶液分别进样3次，记录下分别测量的色谱峰面积。

1.2.6 重复性试验

取同一浓度维生素D2对照品溶液在“2.1色谱条件”下重复进样三次，记录下分别测量的色谱峰面积。

1.2.7 稳定性试验

按照“2.2 供试品溶液”项下方法制备三种供试品溶液，在0h、4h、8h、12h、24h进样测定，记录下分别测量的色谱峰面积。

1.2.8 样品含量测定

按照“2.2 供试品溶液”项下方法制备三种供试品溶液，在“2.1色谱条件”下进样测定。

2 结 果

2.1 线性关系

得到维生素D2的线性回归方程为：C＝0.0142A-0.0060（r=0.9999），说明使用高效液相色谱法对维生素D2含量进行测量，在0.04423～1.091µg/mL的浓度范围内具有良好的线性关系。

2.2 精密度

得出三种浓度维生素D2对照品溶液的峰面积相对标准偏差RSD为0.95%、1.2%、2.1%，说明使用高效色相色谱法对维生素D2含量进行测量具有良好的精密度。

2.3 重复性

得出峰面积标准偏差值为0.45%，说明使用高效色相色谱法对维生素D2含量进行测量具有良好的重复性。

2.4 稳定性

发现三种供试品在配置12h后出现降解物质，影响到测量，而在8h内均有良好的稳定性。

2.5 样品测定

钙镁D片中维生素D2含量为0.1331µg/mL，达到标示量的102.21%；钙佳锌口服液中维生素D2含量为0.1331µg/mL，达到标示量的102.21%；乳酸钙口服液中维生素D2含量为0.1247µg/mL，达到标示量的100.21%。

3 讨 论

药品中维生素D2的检验一直为药品检验工作的难点，本文实验也发现三种供试品在配置12h后出现降解物质，影响到测量，在8h内有良好的稳定性。所以使用高效液相色谱法对药品中维生素D2进行测定，尽量要现用现配，并且使用棕色容量瓶，避免光线对维生素D2的影响。综上所述，使用高效液相色谱法对三种药品中维生素D2含量的测定具有良好的精密度、重复性、稳定性，可用于含有维生素D2的药品制剂质量控制。

[1] 范世德,廖晓君,邱正霞,等.RP-HPLC法测定钙佳锌口服液中维生素D2含量[J].中国医药导报,2010,7(13):59-62.

[2] 仲宣惟,夏瑞,施婕.HPLC法测定保健食品中维生素D2、D3的含量[J].药物分析杂志,2007,27(11):1773-1774.

[3] 宋金春,李韵秋,曾俊芬.HPLC法测定注射用12种复合维生素D2、维生素A与维生素E的含量[J].中国药房,2007,18(31):2456-2457.

[4] 芦洁,刘小叶,刘丹,等.HPLC法测定钙镁D片剂中维生素D2的含量[J].药物分析杂志,2006,26(12):1723-1725.

[5] 贺微,于兵,高晔.HPLC法测定乳酸钙口服液中维生素D2含量[J].黑龙江医药,2004,17(4):247-250.

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1671-8194（2013）11-0075-02