李迪,吴宏娟,许贵军
(黑龙江中医药大学附属第二医院,黑龙江 哈尔滨 150001)
在《药性论》、《中药大辞典》、《中华药海》等书中均有肉豆蔻的记载,具有收涩、温里、行气等功效。现代药理研究表明,肉豆蔻具有抗菌、麻醉、抗肿瘤、镇静催眠等作用。目前,肉豆蔻主要炮制方法有蒸制、炒制、土制、制霜等。本实验对不同炮制方法的肉豆蔻中的肉豆蔻醚的含量进行了考察。
P230高效液相色谱仪(大连依利特分析仪器有限公司);R400E-HPLC流动相过滤装置(上海领德仪器有限公司);HH-4数显恒温水浴锅(常州普天仪器制造有限公司);SK3300HP功率可调台式超声仪(上海垒固仪器有限公司);R502B旋转蒸发器(西安太康生物科技集团);Direct-Pure EDI 10 UV纯水系统(上海瑞枫生物科技有限公司);UV-1600紫外/可见分光光度计(上海美谱达仪器有限公司);JA5003B电子精密天平仪(河南兄弟仪器设备有限公司);C18色谱柱(广州艾欣科学仪器有限公司);肉豆蔻醚(自制);乙腈(天津康科德有限公司);甲醇(天津赛孚世纪科技发展有限公司);磷酸(天津康科德有限公司);乙醇(国药集团化学试剂有限公司);冰醋酸(天津科密欧有限公司);三乙胺(天津博迪化工股份有限公司);肉豆蔻(产于广东)。
实验用甲醇-水-磷酸(70∶30∶0.01)为流动相;检测波长为282nm;流速为1.0ml/min;实验室温度为25℃,柱温箱温度为30℃。
精密称取肉豆蔻醚标准品5mg,置于100ml容量瓶中,加甲醇适量,超声溶解,冷却至室温,加甲醇定容,精密量取1ml,至于100ml容量瓶内,用甲醇定容,即得。
肉豆蔻粉碎,过20目,称取3份,分别加入乙醇、50%甲醇、甲醇超声提取,结果以甲醇提取含量最高,所以实验采用甲醇提取。精密称取3份肉豆蔻粗粉,加甲醇超声波振荡,分别提取15、20、30min,结果以30min含量最高,所以采用提取时间为30min[1]。
精密称取肉豆蔻粗粉约 1.0g,精密加入甲醇800mL,超声处理 30min,过滤,加甲醇至 1 000ml,摇匀,即得。
精密称取肉豆蔻醚标准品5mg,加甲醇适量,超声溶解,放至室温,加甲醇定容至100ml,精密量取1ml,至于100ml容量瓶内,甲醇定容。按照上述实验条件,连续进样6次,每次10μl,记录峰面积。实验结果表明,本方法精密度良好。
分别配制 0.4、1.6、2.0、4.0、6.0μg/mL 肉豆蔻醚标准品溶液,以峰面积(Y)为纵坐标,对照品进样量(X)为横坐标,绘制标准曲线。结果表明,肉豆蔻醚在0.4~6.0μg/mL范围内呈良好的线性关系。
分别配制6份肉豆蔻样品溶液,进行含量测定,再分别加入一定量的肉豆蔻醚对照品,按上述实验方法进行测定,计算回收率,平均回收率为99.05%,RSD为 0.67%。
按上述实验方法配制肉豆蔻样品溶液及对照品溶液,每隔2h测定1次,共测定5次。实验结果表明,供试品和对照品10h内稳定。
3.1 面裹炒制
分别称取肉豆蔻 1kg,滑石粉 0.5kg,面粉 0.5kg。将面粉中加入0.025kg水,和成湿面团,制成湿面皮。将药材用湿面皮逐个包裹,取滑石粉置锅内加热,将包好的肉豆蔻倒入,拌炒至外面的面呈焦黄色取出,除去面皮,乘热切片。
3.2 小麦面炒制
分别称取肉豆蔻1kg,小麦面0.5kg。将小麦面粉倒入锅内,用文火炒热,将肉豆蔻倒入,炒成微黄色时,出锅,筛去面粉,摊开,晾凉。
3.3 赤石烘烤 分别称取肉豆蔻1kg,赤石脂1kg。药材直接埋于赤石脂细粉烘烤1h,去除赤石脂,将肉豆蔻切片。
3.4 蒸制
分别称取肉豆蔻1kg,麸皮0.5kg。将肉豆蔻在水中浸泡1h,捞出,置笼内,一层麸皮,一层肉豆蔻,层层相间,蒸制2h,去除麸皮,将肉豆蔻切厚片,干燥。
3.5 土制
分别称取肉豆蔻1kg,细黄土1kg,将细黄土置锅内炒制发泡,倒入肉豆蔻,不断翻炒,炒至油质渗出,筛净黄土,备用[2-6]。
测定5种炮制品和生品的含量,按炮制前药材量计算,蒸制品、面裹炒制品、小麦面炒制品、赤石烘烤品、土制品中肉豆蔻醚的含量分别为0.211%,0.210%,0.205%,0.203%,0.201%。未经炮制的肉豆蔻药材中肉豆蔻醚的含量为0.215%。
实验对流动相进行了考察,分别采用了甲醇-水- 磷酸(70∶30∶0.01)、甲醇 - 水 - 冰醋酸(70∶30∶0.01)、水 -乙腈 -三乙胺(40∶60∶0.01),结果以甲醇-水 - 磷酸(70∶30∶0.01)为流动相,供试品各峰分离效果最好。肉豆蔻醚为肉豆蔻主要成分之一,其具有一定毒性,服用过量对胃肠道有抑制作用,甚至可致中毒,产生昏迷及惊厥。在中药大辞典中记载过肉豆蔻中毒致死的报道[7]。实验结果表明,各种炮制方法对肉豆蔻醚的含量影响不大。在炮制过程中肉豆蔻醚不易除去的主要原因是肉豆蔻醚沸点较高(276℃ ~277℃)[8-9]。所以应增加对肉豆蔻炮制的研究,降低其毒副作用。
[1]李国毅,陈仰荣.《中国药典》中药炮制品检验问题的探讨[J].中国中药杂志,2000,25(6):379.
[2]龚千锋.中药炮制学[M].北京:中国中医药出版社,2007:215-225.
[3]冯秀锟.中药炮制技术[M].北京:中国中医药出版社,2007:89-95.
[4]周燕华,谭建宁.不同炮制条件对肉豆蔻挥发油、脂肪油及肉豆蔻醚含量的影响[J].中国中药杂志,1998,23(4):217.
[5]崔学义,季宇彬.肉豆蔻炮制工艺研究[J].中国中药杂志,1992,17(10):599.
[6]天津市药品检验所中药组.关于肉豆蔻炮制方面有关问题的探讨[J].中草药通讯,1979,10(1):16.
[7]江苏新医学院.中药大辞典[M].上海:上海科学技术出版社,1977:894.
[8]李铁林,周杰,江文君,等.炮制对肉豆蔻挥发油成分及肉豆蔻醚含量影响的研究[J].中国中药杂志,1990,15(8):23.
[9]李铁林,周杰,徐植灵,等.炮制对肉豆蔻挥发油含量的影响及肉豆蔻挥发油化学成分的研究[J].中国中药杂志,1990,15(7):21.