吉林省不同产地西洋参中人参总皂苷含量的测定*

曲正义，刘宏群，赵景辉，姚春林，王英平

(中国农业科学院特产研究所，吉林 132109)

西洋参(Panax quinquefolius L)为五加科人参属植物，具有滋补强壮，养血生津，宁神益智的功效，其主要的活性成分为人参总皂苷［1］。吉林省是我国人参、西洋参的主产区，为了评价吉林省不同产区西洋参的质量，本文对吉林省6 个产地的西洋参进行了人参总皂苷含量的测定及比较研究。

1 仪器与试药

TU-1810 型紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);HH-6 型数显恒温水浴锅(常州澳华仪器有限公司);N -1001 型旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司);电子天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司);GF-254 型层析硅胶板(浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂)。西洋参(4 年生)于2011 年9 月采于吉林省珲春、敦化、长白、集安、临江和抚松等地;人参皂苷Re 对照品(中国药品生物制品检验所，批号110754 -201123);实验用水为自制蒸馏水;所用试剂均为国产分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Re 对照品20.00 mg，置于10 ml 量瓶中，加甲醇适量使其溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得(含人参皂苷Re 2 mg/ml)。

2.1.2 供试品溶液的制备 西洋参样品经50 ℃烘干后粉碎(过40 目筛)，精确称取供试品1.00 g，用中性滤纸包好，置索式提取器中，加入乙醚，在47 ℃左右微沸回流提取1 h，弃去乙醚液，挥干乙醚溶剂，加入甲醇浸泡过夜，次日再加入适量甲醇在89 ℃左右微沸回流提取，控制滴速100 ～120 滴/min，虹吸次数为5 ～6次/h，回流提取3 次，每次2 h，以人参皂苷提尽为准(定性鉴别为阴性)。合并甲醇提取液，回收甲醇，少量提取液置蒸发皿中，水浴蒸干。用蒸馏水溶解提取物，加蒸馏水30 ml 置分液漏斗中用水饱和的正丁醇50 ml 进行萃取，共4 次。取上层液蒸干，加甲醇溶解后，转移至10 ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2 人参总皂苷提取定性鉴别［2］供试品回流提取3 次以后，取索式提取器中载供试品瓶中的溶液少量点于硅胶G 薄层(105 ℃活化10 min)板上，展开剂:氯仿-甲醇-水(65∶ 35∶ 10)10 ℃以下放置后的下层溶液，用10%硫酸乙醇显色，将薄层板置通风橱内，喷10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加热，无紫红色斑点(总皂苷阳性应为紫红色斑点)。结果表明，样品中人参总皂苷已提取完全。

2.3 标准曲线的绘制

2.3.1 8%香草醛乙醇试液和72%硫酸溶液的配制8%香草醛乙醇试液:取香草醛4.00 g，加无水乙醇定容至50 ml 量瓶中，溶解，摇匀，即得(配制溶液1 周内可以使用［3］)。72%硫酸溶液:取硫酸720 ml，缓缓注入适量蒸馏水中，冷却至室温，加水稀释至1 000 ml，摇匀，即得。

2.3.2 标准曲线的绘制 精密吸取人参皂苷Re 对照品10、30、50、60、80 和100 μl，置于磨口带塞试管中，水浴蒸干甲醇后，加入8%香草醛乙醇试液0.5 ml，72%硫酸试液5 ml，充分振摇混匀后置60 ℃恒温水浴上加热10 min，立即用冰水冷却10 min，摇匀。以试剂作空白，于544 nm 波长处分别测定吸收度，以吸光度(A)为纵坐标、浓度(C)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程:A=0.193 86 C-0.002 74(r=0.999 4)。

2.4 精密度试验 精密吸取对照品溶液30 μl 置于10 ml 磨口带塞试管中，共6 份，按“2.3.2”项下方法显色测定吸收度，连续测定6 次，记录吸光度值，计算得其RSD 为0.02%。

2.5 稳定性试验 精密吸取样品溶液20 μl 置于10 ml 磨口带塞试管中，按“2.3.2”项下方法显色，并分别在显色后每隔10 min 测定一次吸光度，共测6 次，计算得其RSD 为0.53%。

2.6 重复性试验 精确称取药材粉末5 份，每份1.00 g，按照“2.1.2 供试品溶液的制备”步骤，平行制备样品溶液，各吸取20 μl 置于5 个10 ml 具塞试管中，按“2.3.2”项下方法显色测定吸收度，通过回归方程得到平均总皂苷的质量浓度，其RSD 为0.93%。

2.7 加样回收试验 精确吸取已知含量的样品溶液20 μl，平行5 份，分别置于5 个10 ml 磨口带塞试管中，再分别精确加入人参皂苷Re 标准品溶液(2 mg/ml)10、20、30、40 和50 μl，按“2.3.2”项下方法显色测定吸光度，计算回收率为99.9%，RSD 为0.82%。

2.8 样品的测定 精密吸取“2.1.2 供试品溶液的制备”方法中样品溶液20 μl，共3 份。分别置于3 个10 ml 磨口带塞试管中，按“2.3.2”项下方法显色测定吸收度，由回归方程计算总皂苷的平均含量，结果见表2。

表1 回收率实验

表2 吉林省不同产地西洋参中总皂苷测定结果

3 讨论

本实验采用甲醇热回流索氏提取西洋参中人参总皂苷，通过薄层色谱定性鉴别，可将西洋参中的总皂苷提取完全。紫外-可见分光光度法测定西洋参中人参总皂苷含量，方法简便易行，精确度高，稳定性和重现性均较好。所测吉林省6 个产地的西洋参中人参总皂苷含量均大于6%，符合《中成药质量标准与标准物质研究》［4］要求，对吉林省西洋参药材质量的控制具有参考意义。

1 王蕾，王英平，许世全，等.西洋参化学成分及药理活性研究进展. 特产研究，2007，3:73

2 中国药典.一部. 2005:31 -32

3 赵花，刘强，张达正，等.香兰素存放时间对测定人参总皂苷含量结果的影响.人参研究，2007，1:19

4 王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究.北京:中国医药科技出版社，1994:493 -497