针药并用对大鼠急性痛风性关节炎滑膜IL-1b、IL-8的影响

金泽,张振营,姜珊珊,赵洪斌,陈静,王玉琳

(1.黑龙江中医药大学附属第二医院,哈尔滨 150001;2.黑龙江中医药大学,哈尔滨 150040)

痛风是由于长期嘌呤代谢紊乱及尿酸排泄减少所引起的一组疾病,其主要病理改变是尿酸钠晶体在关节周围组织沉积而引起的急性炎症反应。中医针灸治疗痛风因其疗效显著[1],不良反应少而得到广泛的关注。在取得较好临床效果的前提下,我们以自拟痛风方配合针刺治疗急性痛风。本实验通过观察针药并用治疗对大鼠急性痛风性关节炎滑膜组织IL-1b、IL-8含量的影响,进一步研究其对急性痛风的抗炎机理。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物

3月龄健康雄性 wistar大鼠 96只,体重(250±20)g,清洁级,由黑龙江中医药大学动物实验中心提供,合格证号为2008004。

1.1.2 药品与试剂

自拟痛风方(为中药配方颗粒,由土茯苓、生大黄、威灵仙、秦艽、薏苡仁、忍冬藤、防己、猪苓、苍术、茯苓、黄柏等组成)由江阴天江药业有限公司提供,用100℃热水冲开。根据实验大鼠药用剂量公式[2]计算出中药制成浓度为0.2 g/mL的溶液,秋水仙碱制成浓度为0.1 mg/mL,两者封瓶后置于冰箱中保存备用。大鼠IL-1b、IL-8试剂盒由北京邦定生物制剂公司提供,秋水仙碱由西双版纳有限公司生产(批号 110217),尿酸钠晶体购于北京化学试剂公司,SIGMA CHEMICAL CO.(5gu- 2875 LotBCBF1330V)。

1.2 实验方法

1.2.1 造模

痛风动物模型制作方法按国外Coderre等[3-4]经典方法略作改进,将大鼠膝关节周围脱毛,消毒皮肤,轻弯曲膝关节,于关节正中垂直进针,至针尖有落空感,用6号注射器将0.2 mL(浓度2.5 g/100 mL)尿酸钠溶液,通过髌上韧带注入到关节腔内形成痛风模型。

1.2.2 尿酸钠结晶及尿酸钠溶液的制备

取 1250 mg尿酸钠结晶加 45 mL生理盐水,再加5 mL吐温80,加热搅拌,配成50 mL尿酸钠溶液。

1.2.3 分组及处理

将96只大鼠按照上述造模方法造模,并随机分成空白组、模型组、治疗组、对照组,每组24只,各组根据取材时间1 d、3 d、5 d随机分成3组,并分别给予以下相应处理。空白组不造模,不用药,不施针,其余方法相同。模型组于造模后3 h予2 mL生理盐水灌胃,不施针,余相同。对照组于造模后3 h予秋水仙碱悬浮液(0.2 g/mL)2 mL灌胃,每日1次,连续5 d,余相同。治疗组于造模后 3 h予自拟痛风方中药悬浮液(0.2 g/mL)2 mL灌胃,每日1次,连续5 d;应用从阳引阴针法选取足三里、阴陵泉进行针刺,取穴参照《实验动物针灸穴位图谱》,用0.25 mm×25 mm毫针进行针刺,针刺后接华佗牌 SDZ-Ⅱ电针仪,采用疏密波,每日1次,每次20 min,连续治疗5 d,余相同。

1.3 观察指标

分别于造模后1、3、5 d后处死,检测关节滑膜组织 IL-1b、IL-8含量变化。取滑膜组织,称取 20 mg加组织提取液(试剂盒提供),电动匀浆,3000 rpm,15 min,按酶联免疫法测定。

1.4 统计学方法

所有数据均采用SPSS13.0统计软件进行分析。采用单因索方差分析,组间比较选用LSD-t检验。

2 结果

表1 各组治疗前后关节滑膜组织IL-1b、IL-8含量比较(±s,ng/mL)

表1 各组治疗前后关节滑膜组织IL-1b、IL-8含量比较(±s,ng/mL)

注:与空白组比较1)P＜0.05;与模型组比较2)P＜0.01,3)P＜0.05

组别 n 时间 IL-1b IL-8空白组 8造模后1 d 0.10±0.03 0.14±0.04造模后3 d 0.09±0.02 0.13±0.03造模后5 d 0.09±0.03 0.13±0.03模型组 8造模后1 d 0.26±0.041) 0.28±0.031)造模后3 d 0.25±0.041) 0.28±0.061)造模后5 d 0.22±0.041) 0.26±0.051)治疗组 8造模后1 d 0.22±0.041)3) 0.24±0.031)2)造模后3 d 0.19±0.031)2) 0.22±0.041)2)造模后5 d 0.15±0.041)2) 0.17±0.041)2)对照组 8造模后1 d 0.21±0.041)3) 0.23±0.021)2)造模后3 d 0.18±0.031)2) 0.21±0.081)2)造模后5 d 0.15±0.041)2) 0.18±0.041)2)

模型组、治疗组和对照组造模后关节滑膜组织IL-1b、IL-8含量与空白组比较,差异均具有统计学意义(P＜0.05)。治疗组和对照组治疗后关节滑膜组织IL-1b、IL-8含量与模型组比较,差异均具有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05)。详见表1。

3 讨论

痛风是由于长期嘌呤代谢紊乱及尿酸排泄减少所引起的一组疾病。临床和实验均证实,尿酸钠结晶在滑膜组织沉积并脱落是引起急性痛风性关节炎的病理基础,IL-1b、IL-8、TNF-a等参与炎症过程。IL-1b、IL-8、TNF-a作为炎症趋化因子和激活因子在痛风性关节炎的发生、发展过程中起重要作用。有文献认为IL-1b、TNF-a是前炎症网链中的一级细胞因子,而 IL-8是由IL-1b、TNF-a诱导的二级炎症细胞因子[5]。IL-1b作为炎症趋化因子和激活因子在痛风性关节炎的发生、发展过程中发挥关键作用[6]。IL-8的主要生物学活性是吸引和激活中性粒细胞,中性粒细胞与IL-8接触后发生形态变化,定向游走到反应部位并释放一系列活性产物;这些作用可导致机体局部的炎症反应,达到杀菌和修复细胞损伤的作用。所以本实验我们选取IL-1b、IL-8观测针药结合干预治疗的抗炎疗效。

中医学认为痛风属“痹证”范畴,病机是嗜食厚味,以致湿热内蕴,又兼外感风寒,侵袭经络,以致气血津液运行受阻,遂使煎熬成痰,痰凝络道,致关节红肿灼痛,故得此病。自拟痛风方中用威灵仙、秦艽、防己祛风除湿、通络止痛,苍术、黄柏取二妙散清热燥湿之意,猪苓、茯苓、薏苡仁以健脾利湿去浊,辅以土茯苓、忍冬藤以解毒除湿,并用生大黄泻热逐瘀,以上述诸药共奏清热、祛风、除湿、消肿之功效。并配合透刺针法中“从阳引阴”针法以活血、通络、止痛。本实验证实,运用针药并用治疗可以明显降低 IL-1b、IL-8含量,与对照组相比无明显差异,说明本治疗方法具有显著抗炎效果。

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