汉、回及维吾尔三民族红细胞CR1基因点突变差异的研究

洪 炜 马洪滨 朱剑功 刘立明 李永利 王雪飞 王大刚 庞君丽 杨 宁 李 妍 王海滨

红细胞CR1基因密度相关基因多态性分为3种类型，即高表达型(HH)、中表达型(HL)和低表达型，不同CR1基因型与红细胞膜CR1数量表达及其黏附活性密切相关。研究业已清楚，红细胞CR1数量及其活性在循环病原微生物的清除、机体整体免疫功能的调节等具有非常重要的作用［1～5］。不同疾病情况下，机体红细胞CR1数量及活性有不同程度的变化，其基因多态性分布与不同的疾病的易感性密切相关，表明确定人群红细胞CR1基因多态性基因点突变状况，对疾病易感性的判断、疾病机制探讨及病情评估具有重要意义。本文对汉、回及维吾尔族三民族正常人群460人的红细胞CR1基因多态性进行研究，探讨其流行病学意义。

对象与方法

1．研究对象:随机选择汉族、回族及维吾尔族三民族正常人群共460人，其中汉族157人，男性111人，女性46人，平均年龄30．8±13．4岁;回族149人男性87人，女性62人平均年龄27．9±11．9岁;维吾尔族154人，男性93人，女性61人，平均年龄28．6±11．8岁，三民族年龄之间比较无差异。

2．研究方法:红细胞CR1基因多态性测定:根据红细胞CR1基因中1个内含子点突变可使红细胞表达CR1分子减少，而通过HindⅢ酶切引物扩增的1．8kb的DNA片段，可获得0．5kb和1．3kb两条片段。据文献［4］设计引物 1:5'－CCTTCAATGGAATGGTGCAT－3'(4415～4435);引物 2:5'－CCCTTGTAAGGCAAGTCTGG－3'(引物3'端距结构基因内含子HindⅢ酶切位点25～55bp)建立PCR技术加HindⅢ酶切技术。取EDTA抗凝全血提取DNA，进行PCR扩增，然后进行HindⅢ酶切，可将CR1分子密度相关基因分为高表达(HH，1．8kb 一条带)、中表达(HL，1．8kb、1．3kb 和 0．5kb 三条带)和低表达(LL，1．3kb和0．5kb两条带)3种基因表达形式(图1)。

结 果

1．三民族红细胞CR1基因多态性分布比较:三民族红细胞CR1基因突变率分别为:汉族32．5%，维吾尔族24．0%，回族23．5%，统计学比较虽无显著性差异(χ2=4．62，P ＞0．05)，但汉族人群的突变率明显高于其他两个民族，三者比较的χ2=4．62，已经接近显著差异值(χ2=5．99，P ＜0．05)，如果差异研究例数，可能得出更有意义的结论(表1)。三民族女性红细胞CR1基因总突变率(32．5%)明显高于男性(23．7%)，虽无显著统计学差异(χ2=3．71，P ＞0.05)，但其 χ2=3．71 已经接近差异临界(χ2=3.84)，如果扩大例数研究可能存在女性CR1基因突变率高于男性的结果，这在研究女性人群容易患自身免疫性疾病有重要意义(表2)。

表1 三民族红细胞CR1基因多态性分布比较［n(%)］

表2 三民族正常人群男性与女性红细胞CR1基因多态性分布差异比较［n(%)］

2．三民族男性和女性之间CR1基因多态性差异比较:三民族男性和女性之间红细胞CR1基因突变率分别为:维吾尔族女性32．8%，男性18．3%，男性、女性比较 χ2=4．25，P ＜0．05;汉族男性 31．5%，女性34．8%，男性、女性比较 χ2=0．69，P ＞ 0．05;回族男性 19．6%，女性 29．0%，男性、女性比较 χ2=1．82，P＞0．05。以上结果表明，维吾尔族女性红细胞CR1基因突变率显著高于男性，这对探讨维吾尔族女性自身免疫性疾病易感性的具有重要意义。

3．三民族中汉族男性CR1基因突变率显著高于回族和维吾尔族男性:汉族男性红细胞CR1基因突变率最高(31.5%)，显著高于维吾尔族男性(18．3%)和回族男性(19．6%)，χ2=6．1，P ＜ 0．05。三民族女性之间红细胞CR1基因突变率比较无显著差异(χ2=1．44，P ＞0．05)，见表3、表4。

表3 女性红细胞CR1基因多态性分布［n(%)］

表4 男性红细胞CR1基因多态性分布［n(%)］

讨 论

红细胞CR1介导循环天然免疫黏附功能，在机体循环免疫复合物、病源颗粒及代谢产物等物质的清除及免疫调节具有重要作用［2］。红细胞表达的CR1，是红细胞介导天然免疫黏附的物质基础，而CR1数量表达是由其基因多态性类型(点突变)决定的，因此研究红细胞CR1基因多态性，对探讨疾病CR1数量及活性的变化及机制有重要意义;研究不同民族正常人群红细胞CR1基因多态性的分布的差异，对探讨易感疾病的流行病学有重要参考价值。白细胞也表达CR1，但其基因无点突变发生，本研究采用提取有核细胞人基因组DNA为扩增模板，用CR1特异性引物进行PCR扩增，然后采用限制性内切酶进行酶切分析其多态性(restriction fragment length polymorphism，RFLP)，该方法较Southern blotting更快速，适合临床大量标本的研究。

本研究表明，汉族红细胞 CR1基因突变率(32.5%)明显高于维吾尔族(24．0%)和回族(23.5%);三民族女性红细胞 CR1基因突变率(32.5%)明显高于男性(23．7%)，以上比较虽然无统计学差异(χ2=4．62，P ＞ 0．05;χ2=3．71，P ＞0.05)，但其χ2已经接近统计学差异临界值，若扩大研究例数或许会有新的结论。维吾尔族女性突变率(32．8%)显著高于男性(18．3%，χ2=4．25，P ＜0.05)，汉族男性的红细胞CR1基因点突变显著高于维吾尔族和回族男性(χ2=6．1，P ＜0．05)，这对探讨以上人群自身免疫相关性疾病的发生及发展具有重要意义。三民族正常人群女性红细胞CR1基因突变率有高于男性的趋势，这可能是女性易患自身性免疫性疾病的重要原因之一;汉族男性红细胞CR1基因突变率高于其他两个民族，以及维吾尔族女性红细胞CR1突变率显著高于维吾尔族男性这一现象，值得人们进一步研究其差异的临床意义。

1 Awandare GA，Spadafora C，Moch JK，et al，Plasmodium falciparum field isolates use complement receptor 1(CR1)as a receptor for invasion of erythrocytes［J］．Mol Biochem Parasitol，2011，177(1):57 －60

2 Congbin Y，Aibin L，Congli Y，et al．Overexpression of complement receptor type I(CR1，CD35)on erythrocytes in patients with hemoplasma infection［J］．Microbiol Immunol，2010，54(8):460 － 465

3 Li J，Wang JP，Ghiran I，et al．Complement receptor 1 expression on mouse erythrocytes mediates clearance of Streptococcus pneumoniae by immune adherence［J］．Infect Immun，2010，78(7):3129 －3135

4 Pham BN，Kisserli A，Donvito B，et al．Analysis of complement receptor type 1 expression on red blood cells in negative phenotypes of the Knops blood group system，according to CR1 gene allotype polymorphisms［J］．Transfusion，2010，50(7):1435 － 1443

5 王海滨，张景萍，郭峰，等．红细胞CR1分子的定量测定及其临床意义［J］．中华微生物学与免疫学杂志，2000，20(4):381－384