凉山虫草与冬虫夏草中多糖的含量比较研究

陈璐，万德光，陈斌儒，赵那，国锦琳

（成都中医药大学中药材标准化教育部重点实验室，中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地，成都 611137）

冬虫夏草为麦角菌科冬虫夏草菌Cordyceps sinensis（Berk.）Sacc.寄生在鳞翅目蝙蝠蛾科昆虫幼虫体上的幼虫尸体及子座的复合体［1］，具有补肾益肺、止血化痰之功效，在临床上常用于治疗久咳虚喘、阳痿遗精、劳嗽咯血、腰膝酸软等肺肾疾病。由于其严格的寄生性和对生态地理环境的特殊要求（海拔3 000～5 000m高寒地区），野生资源十分稀少，供需矛盾严重，使得冬虫夏草的替代资源、替代品研究日益受到人们的重视，成为新的研究热点［2］。

凉山虫草为麦角菌科真菌凉山虫草Cordyceps liangshanensis Zang，Liu et Hu寄生在鳞翅目昆虫幼虫体上幼虫尸体及子座的复合体，为我国四川凉山州和云南昭通市一带特有的虫草资源，与冬虫夏草功效相似，在民间已有较长的药用历史，1992年被收载入四川省中药材标准［3］。凉山虫草分布海拔较低，对生态环境要求不高，资源量丰富，极有可能发展成为一种优良的冬虫夏草替代资源。

有关凉山虫草的药材性状、显微鉴别、薄层色谱鉴别等研究已有报道［4－6］，但有关化学成分和分析的报道很少。为此，本研究选择虫草多糖为评价指标，进行凉山虫草与冬虫夏草的多糖含量比较研究，以期为进一步开发和利用凉山虫草奠定基础。

1 材料与方法

试剂与仪器：葡萄糖为国药集团化学试剂有限公司产品，重蒸苯酚、浓硫酸均为成都科龙化工厂产品，水为超纯水。电子天平（SARTORIUS，BSA 124S），紫外可见分光光度计（上海尤尼柯，UV－2000）。

药材：凉山虫草与冬虫夏草药材来源见表1，经四川省食品药品检验所黎跃成主任药师鉴定确认为Cordyceps liangshanensis、Cordyceps sinensis，药材粉碎（过二号筛），备用。

表1 虫草样品来源

2 结果

2.1 对照品和供试品溶液的制备

对照品溶液的制备：精密称取葡萄糖对照品6mg，置5mL容量瓶中，加蒸馏水溶解并定容，即得1.2mg·mL－1葡萄糖对照品溶液；供试品溶液的制备：取干燥至恒重的凉山虫草样品L1、L2，冬虫夏草样品S1、S2各3份，每份0.1g，精密称定，各加入蒸馏水20mL，称重，沸水浴加热4h，冷却至室温，蒸馏水补足重量。过滤，取续滤液，即得供试品溶液［7］。

2.2 标准曲线的制备

精密吸取上述对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.8、1mL至1mL离心管中，用蒸馏水补足每管至1mL，配置成浓度分别为120μg·mL－1、240μg·mL－1、480μg·mL－1、960μg·mL－1、1 200μg·mL－1的葡萄糖供试品溶液。各吸取0.2mL至具塞试管中，加入1mL6%重蒸苯酚，5mL浓硫酸，混匀，室温放置10min，40℃水浴15min，冷却至室温，摇匀，在490nm处测定吸光度。以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，并求得回归方程：Y＝0.0009X＋0.6977，r＝0.9991，结果表明葡萄糖浓度在120～1 200μg·mL－1内线性关系良好。

2.3 精密度试验

取葡萄糖对照品溶液（480μg·mL－1）0.2mL至具塞试管中，加入1mL6%重蒸苯酚，5mL浓硫酸，混匀，室温放置10min，40℃水浴15min，冷却至室温，摇匀，在490nm处测定吸光度。记录6次测定值，计算RSD为0.93%，说明精密度良好。

2.4 稳定性试验

按2.1项下制备凉山虫草与冬虫夏草供试品，取供试品溶液0.2mL，分别在0、2、4、8、12、24h按2.7项下测定吸光度。计算得凉山虫草RSD为1.92%，冬虫夏草RSD为2.14%，说明供试品溶液在24h内稳定性良好。

2.5 重复性试验

取干燥至恒重的凉山虫草L1样品6份，每份0.1g，精密称定，按2.1项下制备供试品溶液，按2.7项下分别测定6份样品吸光度值，测得多糖的平均含量为13.01mg·g－1，RSD为2.32%（n＝6），说明重复性良好。

2.6 加样回收试验

取干燥至恒重的凉山虫草L1样品9份，每份0.1g，精密称定，置具塞试管中，按下表分别精密加如葡萄糖对照品，按2.1项下制备供试品溶液，按2.7项下分别测定含量，计算回收率，结果见表2，平均回收率为100.65%，RSD＝3.07%（n＝9）。

表2 加样回收试验结果（μg，n＝9）

2.7 凉山虫草与冬虫夏草的多糖含量测定

取2.1项下制备各供试品溶液0.2mL至具塞试管中，加入1mL 6%重蒸苯酚，5mL浓硫酸，混匀，室温放置10min，40℃水浴15min，冷却至室温，摇匀，在490nm处测定吸光度，3份求平均值，含量测定结果见表3。

表3 多糖含量测定结果（n＝3）

3 讨论

真菌多糖（如茯苓多糖、银耳多糖、灵芝多糖等）普遍具有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化等广泛的药理活性，成为近年来药用真菌化学成分研究的热点。现代药理学研究证明，虫草多糖具有增强机体免疫、抗肿瘤、抗肝损伤、降血糖以及防辐射、抗氧化等多种药理活性，是虫草类真菌的主要活性成分之一，检测此类成分含量的高低对虫草质量的评价有一定的意义［7－10］。从测定结果看，凉山虫草中含有丰富的多糖类成分，但含量低于冬虫夏草。

近年来由于冬虫夏草独特的功效以及人们健康保健意识的提高，国内外尤其是国际市场对冬虫夏草的需求量持续上升，供需矛盾日益严重，冬虫夏草价格不断飙升，至2012年1月，国内中药材市场冬虫夏草价格已达到15万元／kg（3 500条）。在如此高昂的价格和野生资源日益枯竭的现状下，冬虫夏草的替代品研究显得十分重要。从虫草属真菌中寻找与之亲缘关系相近的品种，开发冬虫夏草替代资源未来的发展方向。凉山虫草与冬虫夏草菌同为麦角菌科虫草属，寄主同为鳞翅目昆虫，二者亲缘关系相近、功效相似，极有希望发展成为一种优良的冬虫夏草替代资源。但到目前为止，凉山虫草的研究工作还刚刚起步，是否能成为冬虫夏草替代品，尚需进行系统的化学成分及药理药效学等方面的研究工作。

［1］国家药典委员会.中国药典（一部）［S］.北京：化学工业出版社，2010：106.

［2］陈仕江，钟国跃，马开森.珍稀名贵中药材冬虫夏草资源可持续利用的思考与建议［J］.重庆中草药研究，2006，8（2）：8－9.

［3］四川省卫生厅.四川省中药材标准（增补本）［S］.1992：74.

［4］胡若瑛.凉山虫草的研究［J］.中草药，1983，14（17）：35－36.

［5］刘卫卫.冬虫夏草的真伪鉴别［J］.江西中医药，2007，38（11）：55.

［6］张晓峰，刘海青，黄立成，等.中国虫草［M］.西安：陕西科学技术出版社，2008：349－350.

［7］彭腾，贾波，彭成，等.白术茯苓汤调控脾虚大鼠血管活性肠肽总多糖的提取工艺研究［J］.成都医学院学报，2008，3（4）：253－255，268.

［8］陈红霞，贾晓斌.冬虫夏草多糖的药理学研究进展［J］.江苏大学学报：医学版，2005，15（1）：74－76，78.

［9］王普，郑明，何军遨，等.虫草多糖的化学结构及药理活性研究进展［J］.浙江工业大学学报，2010，38（2）：129－133，172.

［10］Zhang W，Yang J，Chen J，et al.Immunomodulatory and antitumour effects of an exopolysaccharide fraction from cultivated Cordyceps sinensis（Chinese caterpillar fungus）on tumour－bearing mice［J］.Biotechnol Appl Biochem，2005，42（1）：9－15.

［11］Yoo HS，Shin JW，Cho JH，et al.Effects of Cordyceps militaris extract on angiogenesis and tumor growth［J］.Acta Pharmacol Sin，2004，25（5）：657－665.