同型半胱氨酸在进展性脑卒中的变化

李永鸿，巫碧佳

（广东省佛山市第二人民医院，广东 佛山 528000）

在脑卒中的组成中，进展性脑卒中占首位，占发病率的60%以上，也是导致患者致残与死亡的首要原因［1］。但是影响进展性脑卒中发病及其预后的因素还不明确，尚有很多未知因素［2］。同型半胱氨酸（Hcy）是一种含硫氨基酸，其与动脉粥样硬化性心脏病等脑血管疾病的发生关系密切，一些学者认为Hcy是进展性脑卒中发生的一个重要的独立危险因素［3］。但也有人提出单纯的Hcy尚不足以造成血管损害，需与其它的危险因素同时存在时才能造成进展性脑卒中［4］。为了深入研究同型半胱氨酸在进展性脑卒中的变化，笔者采用动物模型分析探讨同型半胱氨酸在进展性脑卒中的变化，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验对象

选择购自中国科学院动物研究所的健康6周龄Wistar雄性小鼠30只，每只体质量90～110g，平均（102.2±6.2）g。以随机设计法分为观察组和正常对照组各15只，两组体重差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 模型建立

两组以普通鼠饲料适应性喂养1周后，分2组笼养。在饲料分类中，首先将饲料原料平分为两部分，一部分按照常规方法直接加工成普通颗粒饲料，另一部分根据饲料的含量按照2%的比例添加蛋氨酸，然后再加工成颗粒状。观察组给予高蛋氨酸饲料饲养，从而建立进展性脑卒中模型；正常对照组给予普通颗粒饲料喂养。两组小鼠都自由饮水与日常生活，于观察第0、4周末断食6h后内采集静脉血1～2mL，EDTA抗凝后4℃放置30min，3000次／min离心10min，分离出血浆，置－20℃保存。

1.3 血浆Hcy含量测定

血浆Hcy含量测定采用高效液相荧光检测法测定，以美国SIGMA公司提供的Hcy标准品作对照。取两组小鼠血浆样品或标准品100μl，加入丁基膦10μl，混匀后4℃放置30min。加入10%氯醋酸100μl混匀后13 000rpm／min离心10min。取上清液50μl于试管内，依次加入硼酸缓冲溶液125 μl、1.55mmol／L NaOH 10μl，混匀后置于60℃水浴60min。对Hcy标准品和两组小鼠血浆样品分别进行高效液相荧光检测法检测。

1.4 病理学检测

第8周末两组小鼠都以2%戊巴比妥钠按麻醉后自股动脉放血处死，取新鲜大脑动脉放入2.5%戊二醛多聚甲醛固定液，再经固定、脱水、包埋后切片，用柠檬酸铅双重染色，透射电镜观察并拍照。

1.5 统计学方法

应用SPSS 19.0统计软件包处理，结果中的血浆Hcy水平变化数据以均数±标准差（±s）表示，两组样本间均数比较应用t检验，组间的多重比较采用方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血浆Hcy水平变化

第8周末，所有小鼠均成活。同时随着喂养时间的延长，观察组血浆Hcy水平逐渐升高；在第4周末，观察组小鼠血浆Hcy平均浓度达到了（22.6±3.1）μmol／L，表明 Hcy小鼠进展性脑卒中模型建成。同时第4周及第8周末观察组血浆Hcy水平均显著高于同时期的对照组（P＜0.01），见表1。

表1 3个时间点的两组血浆Hcy水平对比（±s，μmol／L）

表1 3个时间点的两组血浆Hcy水平对比（±s，μmol／L）

组别 数量（n） 第0周 第4周 第8周观察组15 13.2±2.1 22.6±3.1 28.9±6.8对照组 15 14.9±3.2 14.6±1.9 13.5±2.6 t 1.239 6.852 9.625 P＞0.05 ＜0.01 ＜0.01

2.2 动脉损害情况

染色后，观察组大鼠多数出现大脑动脉管腔狭窄、变形等状态，内皮细胞呈暗细胞变，异染色质凝缩、比例增多，核固缩。部分内皮细胞水肿，严重者出现内皮细胞变性、崩解，可见胞浆内大髓磷体，少数内皮细胞脱落。

3 讨论

脑卒中是严重危害人类健康的常见疾病，具有高发病率、高病死率及高致残率的特点。我国脑卒中年发病率为150／10万左右，病死率为100／10万左右［5］。随着人们生活水平、饮食结构、环境因素的改变，脑血管疾病的发病率逐年增多并趋于年轻化。因脑动脉硬化导致血管狭窄，进而发生进展性脑卒中是中国人常见的病因，其中尤以大脑中动脉受累最多见。近年来的研究表明，同型半胱氨酸与脑血管病和一些神经疾病发生、发展关系密切，血浆Hcy升高被认为是引发普通人群脑血管疾病的一个重要危险因素［6］。Hcy是体内蛋氨酸循环的正常代谢产物，其中约70%与血浆蛋白结合，29%自身结合成同型胱氨酸二聚体，约1%以游离硫醇的形式存在于血液循环中。许多回顾性与前瞻性研究表明，血浆Hcy浓度的轻中度升高是血管疾病的一个重要危险因素，大约有30%的心脑血管病患者存在高Hcy血症［7］。

有研究显示，Hcy可使内膜下胶原暴露，导致粥样斑块和血栓的形成，促进血小板和白细胞的粘附和脂质的沉着，也可以丧失内皮细胞衍生的血管松弛因子NO对血管的舒张作用［8］。同时影响内皮细胞释放ET、NO，进而造成内皮细胞损伤［9］。笔者研究发现观察组多数出现管腔狭窄、扭曲，少数稍呈扩张。核严重溶解，核仁凝聚变小，部分核膜溶解，细胞胞浆呈部分溶解性坏死，可见核糖体溶解，细胞内可见大的髓磷体，有的星形胶质细胞表现为暗细胞变，上述结果支持既往对Hcy与神经变性性疾病关系的研究。同时本实验结果表明，短期给实验动物喂以高蛋氨酸饲料可引起Hcy，在第4周末，观察组小鼠血浆Hcy平均浓度达到了（22.6±3.1）μmol／L，表明 Hcy小鼠进展性脑卒中模型建成。同时第4周及第8周末观察组血浆Hcy水平均显著高于同时期的对照组（P＜0.01）。

总之，同型半胱氨酸是造成小鼠脑血管内皮细胞结构损伤和功能异常的重要原因，可能是进展性脑卒中的一个新的致病危险因素。

［1］陈光慧，高炜，李勇，等.一种新的细胞凋亡相关基因－高同型半胱氨酸诱导基因HCY－2的初步探讨［J］.中国医学科学院学报，2000，22（4）：383－387.

［2］陈景开，周辽军，陈满清，等.高同型半胱氨酸血症对血管内皮细胞损伤的研究［J］.中国微循环，2001，5（2）：103－104.

［3］王玉芳，王树人，陈海艳，等.同型半胱氨酸对培养内皮细胞损伤的研究［J］.中国病理生理杂志，2001，17（3）：268－270.

［4］刘建国，高海凤，张哲成，等.高同型半胱氨酸血症与复发性脑梗死［J］.天津医药，2003，31（7）：411－413.

［5］张哲成，刘建国，高海凤，等.蛋氨酸负荷试验在青年脑卒中的应用价值［J］.中华医学杂志，2003，83（17）：1537－1538.

［6］陈景开，赵秋良，周辽军.同型半胱氨酸对大鼠血管内皮依赖性舒张反应的影响［J］.中国病理生理杂志，2001，17（7）：699－701.

［7］马雪兴，刘王明，吾柏铭，等.蛋氨酸对兔同型半胱氨酸水平及动脉粥样硬化的影响［J］.中国心血管杂志，2002，7（4）：231－234.

［8］Ventura P，Panini R，Verlato C，et al.Peroxidation indices and total antioxidant capacity in plasma during hyperhomocysteinemia induced by methionine oral loading［J］.Metabolism，2000，49（2）：225－228.

［9］Rounds S，Yee WL，Dawicki DD，et al.Mechanism of extracellular ATP and adenosine－induced apoptosis of cultured pulmonary artery endothelial cells［J］.Am J Physiol，1998，275（2Pt 1）：L379－388.