恶性肿瘤患者外周血T淋巴细胞CD25的测定与临床检验学研究

赵衍江 刘晓华 喻茂杰 金 哲 鲍连勇

中国医科大学辽阳中心医院检验科，辽宁辽阳 111000

恶性肿瘤患者外周血T淋巴细胞CD25的测定与临床检验学研究

赵衍江 刘晓华 喻茂杰 金 哲 鲍连勇

中国医科大学辽阳中心医院检验科，辽宁辽阳 111000

目的 探讨恶性肿瘤患者T淋巴细胞CD25+水平的临床意义。 方法 用流式细胞仪检测70名正常人和274例恶性肿瘤患者外周血CD4+CD25+和CD8+CD25+水平。 结果 恶性肿瘤患者外周血CD4+CD25+水平比正常人高，差异有统计学意义（P<0.05）；恶性肿瘤患者外周血CD8+CD25+水平与正常人比较，差异无统计学意义（P>0.05）。其中，食管癌、肝癌和肺癌的CD4+CD25+水平与正常人比较，差异有统计学意义（P<0.05）；肠癌、胃癌和鼻咽癌的CD4+CD25+水平与正常人比较，差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 恶性肿瘤患者外周血CD4+CD25水平的增高可作为恶性肿瘤免疫诊断的参考指标。

恶性肿瘤；CD4+CD25+；CD8+CD25+；流式细胞术

CD25+是低亲和性IL-2受体（IL-2R）的α链，表达于激活的T淋巴细胞、B细胞、NK细胞和巨噬单核细胞表面。近年来有报道肿瘤患者外周血血清中可溶性白细胞介素2受体（sil-2R）的水平升高可作为病情判断、监测的免疫指标，但对外周血淋巴细胞膜白细胞介素2受体（mil-2R）的报告结果不一[1-4]。为了解恶性肿瘤患者外周血mil-2R（CD25）活性水平的临床意义，本文对恶性肿瘤患者外周血T淋巴细胞CD25水平进行了检测分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2010年1月～2011年12月经本院病理细胞学确诊的住院肿瘤患者274例，其中，食管癌100例、肝癌84例、肠癌32例、胃癌18例、肺癌18例、鼻咽癌22例；另选择70名健康体检者作正常对照。

1.2 方法

应用流式细胞仪（美国BD公司，型号FAScalibur）及美国PharMingen公司的单克隆试剂，用三色法测定外周血T淋巴细胞CD25百分数水平。取正常人、患者外周血2 mL用肝素抗凝。取20 μL抗体加入12 mm×75 mm的塑料小管底部，每例做2管，1管IgG三色阴性对照，2管CD8-FITC/CD25FE/CD4-Cychrome；每管加入50 μL的抗凝全血，充分混匀后室温放置20 min，每管再加入2ml溶血素，充分混合后室温放置10～15 min，1 000转离心5 min，弃上清，加2 mL PBS液清洗，再离心，弃上清，加1%多聚甲醛0.3 mL，上机进行荧光检测，流式细胞仪采集淋巴细胞窗内5 000个细胞用Cell Quest软件分析阳性标记细胞百分率。

1.3 统计学方法

采用统计软件包SPSS 11.0分析统计检测结果。

2 结果

2.1 正常人与恶性肿瘤患者CD4+CD25+和CD8+CD25+抗体的表达

正常人和恶性肿瘤患者之间的CD4+CD25+抗体的表达差异统计学意义（P<0.05），但CD8+CD25+抗体的表达差异无统计学意义（P>0.05）。详见表1。

表1 正常人与恶性肿瘤患者CD4+CD25+和CD8+CD25+抗体的表达（±s，%）

表1 正常人与恶性肿瘤患者CD4+CD25+和CD8+CD25+抗体的表达（±s，%）

组别 例数（n） CD4+CD25+均值 CD8+CD25+均值正常人恶性肿瘤患者P值70 274 22.17±4.94 33.45±9.13<0.05 1.87±1.32 2.60±1.97>0.05

2.2 几种恶性肿瘤患者CD4+CD25+和CDa+CD25+抗体的表达

选取例数较多的几种恶性肿瘤，分析它们CD4+CD25+和CD8+CD25+抗体的表达情况，结果显示，食管癌、肝癌和肺癌的CD4+CD25+抗体的表达与正常人比较，差异有统计学意义（P<0.05）；肠癌、胃癌和鼻咽癌的CD4+CD25+抗体的表达与正常人比较，差异无统计学意义（P>0.05）。以上几种恶性肿瘤患者外周血CD8+CD25+抗体表达与正常人比较，差异无统计学意义（P>0.05）。 详见表 2。

表2 几种恶性肿瘤患者CD4+CD25+和CD8+CD25+抗体的表达（%）

3 讨论

Sakaguchi S等[5]于1995年发现未免疫小鼠外周循环中的CD4+T细胞约10%表达CD25+，将除去了CD25+的CD4+单阳性T细胞过继转给T细胞缺陷小鼠，能导致宿主各种器官特异性的自身免疫疾病。而将CD4+CD25+和CD4+单阳性T细胞过继转移，则能防止自身免疫疾病发生，说明CD4+CD25+T细胞和维持自身免疫耐受有关[6-7]。恶性肿瘤的发生及其生长过程中，机体早期对肿瘤处于无反应状态，这种“免疫耐受”可能和 CD4+CD25+有关[8-10]。

从本实验检测的274例恶性肿瘤患者外周血CD4+CD25+的数据可以看出其含量明显高于正常人（表1），表明恶性肿瘤患者机体对肿瘤处于无反应免疫耐受状态和CD4+CD25+细胞群的增加有关，支持了上述观点。肠癌、胃癌、鼻咽癌的均值均高于正常人，但是经统计学处理其差异无统计学意义，可能是因为例数太少，有待今后进一步观察。恶性肿瘤患者外周血CD8+CD25+水平与正常人没有显著性差异。

综上所述，恶性肿瘤患者外周血CD4+CD25+的测定可作为恶性肿瘤免疫诊断的参考指标之一，对于临床了解恶性肿瘤患者的免疫活化和免疫耐受状态有一定的帮助。

[1]杨琨，荣阳，荣根满，等.肿瘤自体CIK细胞免疫治疗前后T细胞亚群的变化[J].中华临床医学研究杂志，2006，12（16）：2155-2156.

[2]于津浦，任秀臣，张澎，等.恶性实体瘤患者自体CK细胞的体外大量扩增与生物学指标检测[J].中国肿瘤生物治疗杂志，2007，14（3）：215-216.

[3]赵广法，杜平.IL-2受体与肿瘤[J].国外医学：免疫学分册，2007，20（6）：302-303.

[4]张元泽，徐光炜.肿瘤学[M].天津：天津科学出版社.2003：971-975.

[5]Sakaguchi S，Sakaguchi N，Asano M，et al.Immunologic self-tolerance maintained by T cells expressing IL-2 receptor a-chains （CD25）.Breackdown of single mechanism of self-tolerance causes various autoimmune diseases[J].J Immunol，2007，172：1151-1164.

[6]周新.检验医学考核指南[M].武汉：湖北科学技术出版社，2003：233-239.

[7]丛玉隆.当代血液分析技术与临床[M].北京：人民卫生出版社，2003：161-168.

[8]高晓明.CD4+CD25+调节性T细胞研究的意义[J].中华微生物学和免疫学杂志，2007，27（2）：121-122.

[9]林其燧.临床化学诊断大全[M].北京：北京大学出版社，2005：251-255.

[10]中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程[M].南京：东南大学出版社，2004：631-635.

Measurement and clinical test studies of T lymphocyte CD25 in peripheral blood for patients with malignant tumor

ZHAO Yanjiang LIU Xiaohua YU MaoJie JIN Zhe BAO Lianyong
Department of Clinical Laboratory,Liaoyang Central Hospital of China Medical University,Liaoning Province,Liaoyang 111000,China

ObjectiveTo explore the clinical significance of the level of T lymphocyte CD25+for patients with malignant tumor.MethodsThe percentage level of CD4+CD25+and CD8+CD25+in peripheral blood in 70 cases of normal people and 274 patients with malignant tumor were tested by flow cytometry instrument.ResultsThe levels of CD4+CD25+in peripheral blood of patients with malignant tumor were higher than that of the normal people,there was significant difference (P<0.05);the levels of CD8+CD25+in peripheral blood of patients with malignant tumor had no significant difference compared with the normal people(P>0.05);the levels of CD4+CD25+in the esophageal cancer,liver cancer and lung cancer had significant difference compared with normal people(P<0.05);the levels of CD4+CD25+in the colorectal cancer,stomach cancer and of nasopharyngeal carcinoma had no significant difference compared with the normal people(P>0.05).ConclusionThe increase of the levels of CD4+CD25+in peripheral blood for patients with malignant tumor can be used as the reference index for the diagnosis of malignant tumor immune.

Malignant tumor;CD4+CD25+;CD8+CD25+;Flow cytometry test

R446.6

A

1674-4721（2012）11（b）-0099-02

赵衍江（1971-），男，副主任检验师，本科学历，医学学士，1995年7月、2003年7月先后毕业于大连大学医学院检验系和大连医科大学临床医学专业，现任中国医科大学辽阳中心医院检验科副主任，主要从事医学检验的临床与研究工作。

2012-08-08 本文编辑：陈 俊）