食管鳞癌组织中nm23的表达及临床意义

李秀娟，刘军超，张林西，金春亭，范 婕，李玉珍，李海军

（1.河北北方学院病理教研室，河北 张家口075000；2.河北北方学院附属第一医院病理科，河北 张家口075000）

食管癌死亡率较高的主要原因之一是由于早期症状不明显，多数患者在确诊时已达癌症的中晚期而延误了最佳治疗时机。

肿瘤转移抑制基因nm23定位于17号染色体的q21.3上，编码二磷酸核苷激酶，是新近发现的一种肿瘤转移抑制基因，在大多数恶性肿瘤中nm23低水平表达者易发生转移[1－5]。有研究表明，nm23基因表达率的降低与肿瘤的转移有一定的关系，且nm23基因的阳性表达与肿瘤患者的预后密切相关，nm23基因表达阴性的病人的存活率明显低于表达阳性的病人。本研究应用免疫组织化学SP法检测食管鳞癌组织中nm23的表达情况，为探讨nm23与食管癌预后的关系提供有利的依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 标本来源 收集2009－06—2010－12月期间河北北方学院附属第一医院病理科切除的食管癌存档标本蜡块74例。全部病例术前未经任何治疗，手术后病理切片证实均为食管鳞状细胞癌。其中男70例，女4例；中位年龄62岁。高分化鳞癌16例，中分化鳞癌40例，低分化鳞癌18例；淋巴结转移33例，无淋巴结转移41例；外膜浸润28例，无外膜浸润46例。另外收集22例正常食管黏膜组织作为对照。

1.1.2 试剂 鼠抗人nm23单克隆抗体、免疫组化二抗工作液和DAB试剂盒均购自北京中杉金桥生物制品有限公司。试剂均严格按照说明书使用，以确保实验的可靠性。

1.2 方法

采用免疫组化SP二步法进行染色，切片常规脱蜡至水，3%H2O237℃5min，柠檬酸缓冲液加热抗原修复15min，滴加一抗，37℃60min，PBS清洗后滴加二抗，37℃30min，DAB显色，中性树胶封片。同时用PBS代替一抗作染色的阴性对照，用已知nm23染色阳性的胃癌组织片做阳性对照。

1.3 结果判断

nm23主要定位于细胞核，细胞核中出现棕黄色颗粒为阳性。采用Image－Pro Plus图像分析软件进行图像分析。测定条件：每张切片随机观察5个高倍（10×40）视野计算均值，平均每高倍视野阳性癌细胞数占所观察癌细胞总数的百分率作为阳性结果，阳性细胞数＜10%为（－），10%～50%为（＋），＞50%为（＋＋）[6]。

1.4 统计学方法

采用SPSS13.0统计学软件进行分析，nm23蛋白表达与各临床病理参数的关系采用χ2检验，检验水准α＝0.05。

2 结 果

2.1 食管鳞癌及正常食管组织中nm23的表达（图1～2、表1）

图1 nm23expression in ESCC（IHC200＊ ）

图2 nm23expression in NEM（IHC200＊）

74例食管癌组织中nm23蛋白阳性表达率为71.6%（53/74），22例正常组织中nm23蛋白阳性表达率为95.5%（21/22），两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 食管鳞癌中nm23与各临床病理指标的关系（表2）

表1 食管鳞癌与正常食管组织中nm23的表达

表2 食管鳞癌nm23与临床病理指标的关系

食管癌组织中nm23蛋白在高中分化组和低分化组阳性表达率分别为78.6%和50.0%，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组nm23蛋白阳性表达率分别为57.6%和82.9%，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。提示nm23表达与组织分化和有无淋巴结转移有相关性，而与年龄、性别及浸润深度无关。

3 讨 论

nm23即肿瘤转移抑制基因，1988年被Steeg[7]等用消减杂交法从转移潜力不同的K－1735鼠黑色素瘤细胞株中分离出来。目前该基因家族有6个成员，其中nm23－H1基因与肿瘤转移关系最为密切，故临床上研究最多。nm23－H1基因定位于人类于人类17号染色体上，长度为18kD，含有5个外显子。

nm23基因编码的nm23蛋白与二磷酸核苷激酶（NDPK）的氨基酸顺序约有89%的同源性。主要位于细胞浆和细胞核，也可见于细胞膜。因此，nm23蛋白很可能通过与NDPK一致或相似的途径调节细胞的信号传递、细胞分化等过程[8]。NDPK为细胞提供除ATP外的所有三磷酸核苷，它能使GDP还原为GTP，而GTP可以直接调节细胞膜G蛋白活性，发挥生长抑制等负性调节功能。提示nm23所具有的功能一旦被破坏，便有可能导致细胞分化受阻而影响细胞发育和促进肿瘤发展。另外，GTP还可直接影响微管、微丝等细胞骨架蛋白的生物活性，通过调节细胞微管系统的状态影响纺缍体的形成和细胞运动。如果NDPK出现异常，会发生纺缍体形成障碍，从而出现非整倍体细胞，细胞运动也将出现异常，进而促进肿瘤细胞转移。

最近研究表明，nm23通过下调EDG2（内皮细胞分化溶血磷脂酸G蛋白偶联受体2）的水平来抑制肿瘤转移[9]。Leone将nm23cDNA导入乳腺癌细胞，结果表明乳腺癌的转移潜能显著下降，直接证实了nm23作为肿瘤转移抑制基因的功能。目前已明确在胃癌、肝癌、胆囊癌和结直肠癌等肿瘤中，nm23基因的高表达能有效抑制肿瘤转移，提高患者预后水平[10]。

本实验运用免疫组织化学SP法检测了nm23在食管鳞癌中的表达。结果显示，食管癌组织中nm23的阳性表达率明显低于正常食管粘膜组织（P＜0.05），在高中分化食管癌组织中nm23的阳性表达率（78.6%）明显高于低分化组（50.0%），在无淋巴结转移组（82.9%）明显高于淋巴结转移组（57.6%）。以上结果提示nm23蛋白在食管鳞癌发生发展过程中发挥负性调节作用，其表达程度越低预示预后越差。故食管癌患者手术前后检测nm23蛋白的表达可以用来预测食管癌的淋巴结转移，nm23可作为评价食管癌预后的指标之一。

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