重庆市部分种羊场山羊隐孢子虫感染情况调查

陈 静，沈克飞，任航行，高立芳，宁长申

（1.重庆市畜牧科学院，重庆 渝中400015；2.河南农业大学 牧医工程学院，河南 郑州450002）

隐孢子虫病（Cryptosporidiosis）是由隐孢子虫（Cryptosporidium）引起的一种呈世界性分布的机会致病性人兽共患原虫病，主要临床症状表现为腹泻。资料显示，欧美等多个国家相继诊断出山羊隐孢子虫感染［1］；我国贵州、河南等地均有山羊隐孢子虫感染报道［2－3］；山羊羔感染隐孢子虫后，轻者消瘦、阻碍生长，重者引发腹泻，甚至死亡，造成严重的直接和间接经济损失。El－Sherbini等报道，羊场饲养员隐孢子虫阳性率明显高于非饲养人员，表明羊为人隐孢子虫感染的一个重要来源［4］。鉴于山羊隐孢子虫重要的经济意义和公共卫生意义，为了对重庆市种羊场山羊隐孢子虫病发生的风险因素做出科学评价，笔者于2011年8月～2012年3月调查了重庆市3个地区6个羊场隐孢子虫的感染情况。调查报告如下。

1 材料与方法

1.1 样品来源与采集 2011年8月～2012年3月，先后在云阳、巫山、酉阳3个县6个羊场，随机经直肠采取粪样或采集山羊新鲜粪样共301份（每个羊场抽样检测率大于10%），将粪样分别装入洁净塑料袋，编号，并登记采样时间、地点、年龄、品种、性别、病史、临床症状及粪便状况、免疫及用药情况等，置于4℃冰箱待检。

1.2 调查羊品种及年龄 本次调查的羊为巫山黑山羊、波尔山羊、渝东白山羊、酉州乌羊、武汉乌骨羊、酉州黑山羊。本次采样年龄为1月龄到3岁之间的公、母羊，以1～4月龄的羔羊为主、产后1月内和怀孕2～5月左右的母羊、有腹泻症状而体弱的成年羊及部分健康的成年公、母羊。

1.3 样品检查 饱和蔗糖溶液漂浮法：取被检粪便3～5g，加蒸馏水30mL，搅拌均匀，用粪筛过滤，取滤液，于3 000r／min离心3min，倾去上层液，将沉淀物搅匀，加饱和蔗糖溶液30mL，搅拌均匀，以3 000r／min离心5min，然后用吊环与液面平行接触以蘸取表面液膜，抖落于载玻片上，加盖玻片，于400倍镜检。

1.4 判断标准 未见卵囊者记为阴性，镜检有隐孢子虫卵囊者需判断其感染强度。镜检时，50个视野可见5个以下隐孢子虫卵囊记＋ ，5～10个卵囊记＋＋，11个卵囊以上记＋＋＋。

1.5 卵囊形态观察及虫种鉴定 以测微尺测量经饱和蔗糖溶液漂浮法检查到的隐孢子虫卵囊100个左右，根据卵囊的长短径计算卵囊指数，再结合隐孢子虫卵囊形态特征和以往文献报道进行虫种初步鉴定。

2 结果

2.1 隐孢子虫感染情况 共检测重庆市3个县6个羊场粪样301份，检出隐孢子虫卵囊阳性样品16份，平均感染率为5.32%，3个羊场检出隐孢子虫卵囊，场感染率为50%，均在山峡库区，结果见表1。

表1 重庆市6个种羊场的隐孢子虫感染情况

2.2 不同年龄感染率及感染强度 本次检查结果显示，以2～3月龄羔羊、产后1月和怀孕2月左右母羊的感染率较高，分别为9.68%（9／93）、10.5%（2／19）和6.67%（1／15）。

经测定山羊隐孢子虫感染强度为每张玻片2～1 000↑个卵囊（1 000↑表示1 000以上），每张玻片200个视野；50%（8／16）为＋，卵囊数为2～10个／片；6.25%（1／16）＋＋，卵囊数为30个／片；43.8%（7／16）＋＋＋ ，卵囊数为50～1 000↑个／片。

2.3 卵囊形态结构观察 隐孢子虫卵囊在400×光镜下饱和蔗糖液中呈玫瑰红色，短卵圆形或近圆形；囊壁光滑，薄而均匀，无微孔和极粒，周围有亮绿色的折光带；卵囊内有弯曲的子孢子和残体，大多囊内的子孢子排列不规则，呈结构不清的多态状，残体为着色较深的颗粒状（见图1）。所测100个卵囊平均大小为5.0μm×4.6μm［（4.4～5.6）μm×（4.1～5.0）μm］，卵囊形态指数为1.09（长／宽），参考有关文献［3，5］初步鉴定为微小隐孢子虫（C.Parvum）。

图1 饱和蔗糖溶液漂浮法检测的隐孢子虫卵囊400×

3 讨论

笔者首次对重庆市3个养羊大县具有代表性的种羊场隐孢子虫感染情况进行了初步调查。调查结果显示，部分羊场存在隐孢子虫感染，场感染率为50%，均为山峡库区的两个种羊场，且阳性样品率差异较大。分析原因可能有：（1）感染存在一定的地域差异；（2）选取样本的局限性，因每个羊场的规模和羊的年龄分布存在差异，根据所调查羊场的实际情况，重点采集1～4月龄的羔羊、围产期前后的母羊、体况差的羊和拉稀的羊，故每个羊场不同阶段羊采集样品数量不一致；（3）品种间的差异，结果显示，本次调查的6个品种中波尔山羊的感染率较高，云阳县两个波尔山羊种羊场均有隐孢子虫感染，可能与波尔山羊是外来品种有关；（4）与饲养管理有密切关系，阳性率较高的羊场卫生条件相对较差，缺乏科学的饲养管理，相对建场时间较长7年，而酉阳的2个羊场建场时间较短，一个为1年，一个为4年，卵囊污染的机会和程度相对较低。

本次检查结果显示，以2～3月龄羔羊、产后1月和怀孕2月左右母羊的感染率较高，分别为9.68%、10.5%和6.67%，与国内外报道基本一致［3，6－7］，表明山羊隐孢子虫感染存在年龄、体况等差异。其中产后1月和怀孕2月的母羊感染强度均较强，全部为＋＋＋，可能与孕产期前后羊免疫力下降有关。阳性样品中均无明显临床症状，这与Causape A C.等［8］报道的30日龄以下的羔羊感染后易发生腹泻，而30日龄以上的羔羊感染后则通常无症状相一致。

所抽检的301份样品，平均感染率为5.32%，而 Hermida等［9］报道成年山羊感染率7.7%，国内吴位珩等［2］报道贵州部分地区山羊隐孢子虫感染率为40%以上，崔彬等［3］报道河南部分地区山羊隐孢子虫感染率为2.75%。可见重庆地区山羊隐孢子虫感染率较低。

根据镜检结果，初步判断阳性样品所感染的隐孢子虫为微小隐孢子虫。据资料报道，感染山羊的隐孢子虫种类有微小隐孢子虫、人隐孢子虫、猪隐孢子虫、安氏隐孢子虫、隐孢子虫鹿基因型等。而感染羊的优势种或基因型是微小隐孢子虫和隐孢子虫鹿基因型［5］。本次调查仅从形态学上初步鉴定重庆羊场感染的是微小隐孢子虫，有关病原特性有待进一步用分子生物学方法对其进行准确鉴定。

［1］崔彬，菅复春，宁长申，等.隐孢子虫和羊隐孢子虫病的研究进展［J］.中国寄生虫学与寄生虫病杂志，2009，27（4）：353－355.

［2］吴位珩，徐洪忠，杨茂生，等.贵州省部分地区山羊隐孢子虫病的调查分析［J］.中国兽医寄生虫病，2001，9（3）：21－22.

［3］崔彬，王永立，菅复春，等.河南省山羊隐孢子虫流行病学调查［J］.中国兽医杂志，2008，44（9）：12－14.

［4］El－Sherbini G T，Mohammad K A.Zoonotic cryptosporidiosis in man and animal in farms，Giza Governotate，Egypt［J］.J E－gypt Socparasitol，2006，36（2）：49－52.

［5］Xiao L H，Fayer R，Ryan U，etal.Cryptosporidiumtaxonomy：recent advances and implications for public health［J］.Clin Microbiol Rev，2004，17（1）：72－78.

［6］Noordeen F，Rajapakse R P，Faizal A C，etal.Prevalence of Cryptosporidium infection in goats in selected locations in three agroclimatic zones of Sri Lanka［J］.Vet Parasitol，2000，93（2）：95－101.

［7］Abou－Eisha A M.Cryptosporidial infection in man and farm animals in Ismailia－Governorate［J］.Vet Med J Giza，1994，42（2）：107－111.

［8］Causape A C，Quilez J.Sanchez－Acedo C，etal.Prevalence and analysis of potential risk factors for Cryptosporidium parvum infection in lambs in Zaragoza（northeastern Spain）［J］.Vet Parasitol，2002，104（4）：278－298.

［9］Castro－Hermida J A，Delafossc A，Pors I，etal.Giardia duodenalis and Cryptosporidium paroum infections in adult goats and their implications for neonatal kids［J］.Vet Rec，2005，157（20）：623－627.