热灌注顺铂治疗晚期卵巢癌恶性腹腔积液的临床疗效

李灿宇 张自森 薛长年 吴 敏 陈秀芹 郭尚云

(郑州大学第五附属医院肿瘤科，河南 郑州 450052)

热灌注顺铂治疗晚期卵巢癌恶性腹腔积液的临床疗效

李灿宇1张自森 薛长年 吴 敏 陈秀芹2郭尚云2

(郑州大学第五附属医院肿瘤科，河南 郑州 450052)

目的 探讨热疗联合顺铂对人卵巢癌细胞的毒性增效作用及治疗卵巢癌恶性腹腔积液的疗效。方法 MTT法研究常温及42℃不同作用时间下温热联合顺铂对卵巢癌细胞敏感株SKOV3的生长抑制作用，流式细胞术检测细胞凋亡。观察腹腔热灌注顺铂治疗36例晚期卵巢癌腹腔积液的疗效及不良反应。结果 42℃热疗显著增强顺铂对卵巢癌细胞敏感株SKOV3的生长抑制，42℃热疗60min联合顺铂化疗显著增加SKOV3细胞凋亡率。热灌注顺铂治疗卵巢癌腹腔积液的有效率为61.1%(22/36)，不良反应轻微。结论 热疗能显著增强顺铂的卵巢癌细胞毒性作用，热灌注顺铂是晚期老年卵巢癌患者安全有效的治疗方法。

热疗;化疗;顺铂;卵巢癌;恶性腹腔积液

大多数卵巢癌患者就诊时已有腹腔播散，并发恶性腹腔积液，严重影响患者的生活质量，尤其是复发或耐药的患者，全身化疗疗效差，且部分患者不能耐受，因此采取有效的治疗可改善此类患者生存。本研究采用细胞体外研究了热疗对顺铂的增效作用，并观察了腹腔热灌注顺铂治疗晚期卵巢癌合并恶性腹腔积液的疗效与不良反应，并对其进行临床分析。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病例资料 将2005年5月至2011年10月收治的36例经病理学或细胞学确诊的老年晚期卵巢癌合并腹水患者采用热灌注顺铂化疗。年龄60～78〔平均(66.2±5.9)〕岁，浆液性囊腺癌22例，黏液性囊腺癌14例，术后复发15例，Ⅲ期病变者21例，Ⅳ期病变者15例。本组患者卡氏评分均在60分以上。化疗前血常规、肝、肾功能及心电图均未发现异常，无化疗禁忌。化疗前均签署知情同意书。

1.1.2 细胞系 人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞株(SKOV3)，贴壁生长，由河南省医药科学研究院提供。

1.2 方法

1.2.1 热灌注化疗 经B超定位后常规腹腔置管，注药前尽量排尽腹腔积液，将顺铂(25 mg/m2)溶解到42℃的0.9%生理盐水2 000 ml，将混合液灌入腹腔，然后腹腔内注入地塞米松5 mg、2%利多卡因2 ml减轻腹膜粘连，灌注后封管，嘱患者多次变换体位，之后采用42℃条件下微波热疗1 h。每w灌注1次，连续3 w为1个疗程，休息1 w，连用2个疗程后评价疗效。

1.2.2 疗效评价 完全缓解(CR)：腹水消失并持续4 w以上;部分缓解(PR)：腹水减少50%以上并持续4 w以上;稳定(NC)：腹水减少不足50%或增加小于25%至少以上，持续4 w;无效(PD)：腹水增加20%，症状加重。有效率=(CR例数+PR例数)/总例数 ×100%。根据美国NCI制定的毒性评价标准评价不良反应事件。

1.2.3 细胞培养 人卵巢癌SKOV3细胞生长于含10 ml/L小牛血清的RPMI-1640培养液中，置于37.0℃、5%CO2的恒温培养箱中进行传代培养。

1.2.4 噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖 观察内容分两种设计：(1)固定热疗时间，温度为42℃，加热60 min，观察顺铂不同浓度时SKOV3细胞的生长抑制率，顺铂浓度分别为0、1、10、20、40、80 μg/ml;(2)固定热疗温度为42℃，热疗时间依次设定为0，30，60，90 和 120 min，共 5 个时间点，观察热疗不同时间时SKOV3细胞的生长抑制率。取对数生长期SKOV3细胞，经胰蛋白酶消化，计数以7×104/ml的细胞浓度接种到96孔板中，每孔100 μl，37.0℃、5%CO2的恒温培养24 h。设单纯细胞对照组、单纯热疗组、单纯化疗组、热化疗联合组4组，每组设4个重复孔。顺铂给药后，培养48 h，收集细胞，用MTT法检测顺铂不同浓度及作用不同时间对卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响，用酶标仪在570 nm处测定吸光值(A)。计算顺铂对SKOV3细胞的抑制率。实验重复3遍，取平均值。

1.2.5 流式细胞仪检测细胞凋亡 收集各组经过处理的细胞，离心后弃去上清液，磷酸盐缓冲液(PBS)洗2次。按照双色细胞凋亡检测(Annexin/PI)试剂盒操作说明，流式细胞仪检测细胞凋亡百分率。

1.3 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件分析，计量资料比较采用t检验，率的比较采用χ2检验，P＜0.05认为差异具有显著性。

2 结果

2.1 不同浓度顺铂对SKOV3细胞的生长抑制作用 在同一作用时间条件下，SKOV3细胞的生长抑制作用随顺铂药物浓度的增加而增强。42℃ 热疗60 min处理后，顺铂对SKOV3细胞的生长抑制作用显著增加(P＜0.05)。见表1。

表1 42℃热疗时不同顺铂浓度时SKOV3细胞的生长抑制率(%)

2.2 热化疗不同作用时间对SKOV3细胞的生长抑制作用

在 42℃ 条件下顺铂作用 0、30、60、90、120 min，分别检测 SKOV3细胞的生长抑制率。42℃下作用不同时间对SKOV3细胞的抑制作用差异有统计学意义(P＜0.05)，随热疗时间的延长，SKOV3细胞生长抑制率逐渐增加。42℃下作用60 min和30 min相比，差异有统计学意义(P＜0.05)。作用 60 min、90 min和120 min相比，差异无显著性。见表2。

表2 42℃热疗不同时间时顺铂对SKOV3细胞的生长抑制作用(%)

2.3 热疗联合顺铂化疗对SKOV3细胞凋亡的影响 顺铂处理SKOV3细胞后，42℃下作用60 min后，37℃下继续培养48 h。收集活细胞行Annexin V-FITC/PI检测，结果显示热疗联合顺铂化疗组细胞凋亡率(早期和晚期之和)为69.39%，单纯顺铂化疗组细胞凋亡率为47.94%，差异有统计学意义(P＜0.05)。热疗作用下，凋亡早期SKOV3细胞比率显著增加(P＜0.05)。见表3。

表3 热疗联合顺铂作用48 h后SKOV3细胞凋亡情况(%)

2.4 热灌注顺铂治疗卵巢癌恶性腹腔积液的临床疗效 36例患者经热灌注顺铂治疗后，22例患者腹水量得到控制，其中CR 3例，PR 19例，SD9例，PD 5例，有效率 61.1%(22/36)。副作用有轻微腹痛者4例，低热5例，轻微腹痛及低热患者未做特殊处理，自行缓解。副反应以消化道症状为主，发生率为66.7%(24/36)，其中Ⅰ～Ⅱ级者18例，Ⅲ～Ⅳ级者6例，处理后症状均缓解。血液系统副反应发生率为47.2(17/36)，多表现为轻度白细胞减少和贫血。全组患者均未出现腹腔感染、肠黏连等并发症，肠梗阻发生2例，为肿瘤进展压迫肠道所致。

2.5 热灌注顺铂对卵巢癌患者血清CA125水平的影响 监测记录记录治疗前、治疗第4周、治疗第8周CA125表达水平。根据临床疗效分组，有效组患者血清CA125水平较热灌注顺铂化疗前显著下降，差异有统计学意义(P＜0.05)。无效组患者血清CA125水平虽有下降，但差异无显著性。见表4。

表4 热灌注顺铂对卵巢癌患者血清CA125水平的影响(±s)

表4 热灌注顺铂对卵巢癌患者血清CA125水平的影响(±s)

分组 n 治疗前 第4周 第8周有效22 80.25±14.23 52.58±11.22 40.45±12.42无效14 102.51±24.33 99.64±21.86 86.50±19.36

3 讨论

卵巢癌是老年女性患者中最常见的恶性肿瘤，其腹腔转移后极易形成腹腔积液。顺铂腹腔灌注是卵巢癌常见且有效的治疗方法，能有效控制腹水产生。顺铂为剂量依赖性药物，但是大剂量的顺铂常导致严重副反应，严重限制了顺铂对肿瘤的杀伤效果。因此，增强卵巢癌细胞对顺铂化疗的敏感性成为重要临床课题。

热疗近年来逐渐成为继放化疗、生物治疗之后的又一肿瘤治疗手段，腹腔热灌注治疗成为腹腔肿瘤控制的有效方法，不良反应相对较少，安全性好〔1〕。有研究证实，温热对肿瘤细胞有直接的杀伤作用。热疗联合化疗可以提高抗肿瘤作用，顺铂是最早被发现与热疗有协同作用的化疗药物，腹腔热灌注顺铂可有效控制腹水生成〔2〕。热疗可以增加肿瘤细胞膜的通透性，提供细胞内的药物浓度，促进DNA与铂类药物结合，抑制DNA的修复，从而提高化疗药物的杀伤作用，还有助于逆转顺铂耐药的发生〔3〕。本研究通过体外研究证实，热疗能显著增强顺铂对卵巢癌SKOV3细胞的毒性作用，诱导细胞发生凋亡，这为卵巢癌热化疗的临床应用提供了理论参考依据。本研究在42℃热疗条件下观察了顺铂对卵巢癌SKOV3细胞的毒性作用，结果表明热疗时间为60 min是最佳作用时间，继续延长作用时间并不能进一步显著提高疗效。在临床实践的过程中，60 min也是患者能够耐受且副作用小的常用时间期限〔4〕。过度延长热疗时间可能带来其他副反应且使患者不易耐受。

本研究通过采用腹腔热灌注顺铂联合微波热疗对晚期老年卵巢癌合并腹腔积液的患者进行治疗观察，通过化疗和热疗的结合，取得了较好的临床疗效，与文献报道一致〔5〕。本研究对象为老年患者，采用了热灌注单药治疗，不良反应低于同时静脉联合用药的报道，仅表现为轻度胃肠道反应和骨髓抑制，有较好的安全性。虽然腹腔多药联合灌注也能取得较好的腹水控制效果，但其Ⅲ～Ⅳ级不良反应也显著增加〔6〕，降低患者生存质量。顺铂耐药是常见的临床难题，耐药机制复杂〔7〕。近来有报道免疫增强剂可逆转卵巢癌细胞对顺铂的耐药〔8〕，结果提示热灌注顺铂联合免疫增强剂治疗卵巢癌可能取得更好的疗效。

综上所述，本研究通过对热灌注顺铂治疗卵巢癌恶性腹腔积液的体外研究和临床观察，证实热疗能显著增强顺铂的卵巢癌细胞毒性作用，热灌注顺铂能有效控制卵巢癌恶性腹腔积液，不良反应较少，安全性好。因此，热灌注顺铂是晚期老年卵巢癌患者有效的治疗方法，临床上适宜推广。

1 巴明臣，崔书中，骆福添，等.腹腔热灌注化疗治疗进展期结直肠癌临床疗效及安全性的Meta分析〔J〕.中国普外基础与临床杂志，2010;17(7)：725-30.

2 刘志敏，康 琳，刘义冰，等.腹腔热灌注顺铂治疗恶性腹水的临床观察〔J〕. 肿瘤，2007;27(6)：508，510.

3 马 焱，瞿全新，张秀艳，等.腹腔热化疗中卵巢癌细胞对顺铂敏感性影响的体外研究〔J〕.中国肿瘤临床，2010;37(20)：1153-6.

4 魏志刚，卿三华.腹腔热灌注化疗治疗胃肠癌〔J〕.世界华人消化杂志，2006;14(2)：134-7.

5 任春振，曹军丽，胡宗兰，等.腹腔热灌注联合静脉化疗治疗晚期卵巢癌的临床观察〔J〕.中国肿瘤临床，2010;37(24)：1459-61.

6 段 萍，朱春丹，陈秀珍，等.腹腔内灌注IFN联合PF治疗卵巢癌合并腹水的临床疗效观察〔J〕.中国肿瘤临床，2002;29(2)：142-3.

7 Kelland L.The resurgence of platinum-based cancer chemotherapy〔J〕.Nat Rev Cancer，2007;7(08)：573-84.

8 曲红光，高 磊，贺 丹，等.灵芝多糖对顺铂诱导卵巢癌细胞耐药株的逆转〔J〕.中国老年学杂志，2011;31(5)：831-3.

R735

A

1005-9202(2012)17-3656-03;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.17.017

郑州市科技发展计划项目(No.2010SFXM345)

1 郑州大学第三附属医院妇产科 2 郑州大学第五附属医院妇产科通讯作者：吴 敏(1957-)，女，主任医师，主要从事肿瘤个体化治疗研究。

李灿宇(1977-)，女，硕士，主治医师，主要从事妇科肿瘤的基础与临床研究。

〔2012-04-10收稿 2012-05-18修回〕

(编辑 袁左鸣)